劉清源

(廣東省惠州市惠城區(qū)馬安畜牧獸醫(yī)與漁業(yè)站，廣東 惠州 516001）

PRRSV滅活疫苗與弱毒疫苗的免疫效果比較

劉清源

(廣東省惠州市惠城區(qū)馬安畜牧獸醫(yī)與漁業(yè)站，廣東 惠州 516001）

為比較豬藍(lán)耳病滅活疫苗與弱毒疫苗的免疫效果，本試驗(yàn)在惠城區(qū)某豬場(chǎng)隨機(jī)選取100頭仔豬，分成兩組，分別免疫豬藍(lán)耳病滅活疫苗與弱毒疫苗，采用ELISA方法檢測(cè)血清中的抗體水平，并對(duì)兩組抗體的S/P值進(jìn)行比較。結(jié)果表明，豬藍(lán)耳病弱毒疫苗產(chǎn)生的抗體水平比滅活疫苗高，滅活疫苗免疫效果較差，且抗體持續(xù)時(shí)間短。本研究為豬場(chǎng)藍(lán)耳病的防控及免疫程序的制定提供理論依據(jù)。

PRRSV；滅活疫苗：弱毒疫苗；比較

豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種高致病性傳染病[1]。由于PRRSV具有免疫抑制的特點(diǎn)，病豬對(duì)其他疾病的抵抗能力也會(huì)降低，增加混合感染的風(fēng)險(xiǎn)，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病無特效治療藥物，對(duì)豬群進(jìn)行疫苗免疫和抗體水平監(jiān)測(cè)是防止PRRSV感染的重要手段[2]。我國的PRRSV商品化疫苗以滅活疫苗和弱毒疫苗為主[3]。為比較兩種疫苗免疫效果，探討2種疫苗的選用及免疫程序的制定，本試驗(yàn)分別使用上述兩種疫苗對(duì)惠城區(qū)某豬場(chǎng)的100頭豬進(jìn)行分組免疫，于免疫14 d、28 d、42 d、56 d、70 d后采集血清樣品，采用ELISA試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)，并對(duì)兩種疫苗的免疫效果進(jìn)行比較和分析，為豬場(chǎng)疫苗的選擇及免疫時(shí)間的確定提供參考。

1 材料和方法

1.1 儀器及試劑

酶標(biāo)儀ELX800，購自BIOTEK公司；PRRSV抗體試劑盒，購自武漢科前生物公司。

1.2 疫苗

PRRSV滅活疫苗（NVDC-JAXI株）和弱毒疫苗（JAXI-R株）均為國家招標(biāo)疫苗。

1.3 動(dòng)物分組及免疫情況

將某豬場(chǎng)100頭豬豬分為A、B兩組，每組50頭，A組接種滅活疫苗，2 mL/頭；B組接種弱毒疫苗，1頭份/頭，均在頸部肌肉注射，首免后48 d進(jìn)行二免。

1.4 血清的制備

分別于免疫前、免疫后1 4d 、28 d、42 d、56 d、70 d后從豬前腔靜脈采血，6 000 r/min離心15 min，取上清于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 抗體檢測(cè)方法

待檢血清采用E L ISA方法檢測(cè)PRRSV抗體，具體操作步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.6 結(jié)果判定

通過計(jì)算樣品孔與陽性孔 OD630nm比值 S/P 值來判定被檢血清PRRSV抗體的結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：S/P 值＞0．42，判定被檢血清藍(lán)耳病病毒抗體陽性；S/ P值＜0．42，則判定被檢血清藍(lán)耳病抗體陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 PRRSV抗體檢測(cè)陽性率比較

免疫后，A、B兩組抗體陽性率有所升高，A組抗體陽性數(shù)隨時(shí)間延長不斷增加，二免28 d后，陽性率達(dá)到94%；B組在免疫后42 d，抗體陽性率達(dá)到100%，二免后抗體水平趨于穩(wěn)定。B組陽性率在首免后不同時(shí)間段內(nèi)抗體陽性率均高于A組，對(duì)豬群的保護(hù)作用較A組理想（見表1）。

2.2 PRRSV疫苗誘導(dǎo)抗體的檢測(cè)結(jié)果

從兩種疫苗接種后PRRS V抗體S/P值來看（見圖1），弱毒疫苗激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生的抗體滴度要明顯高于滅活疫苗，B組在首免后抗體水平不斷升高，二免后抗體增幅較大，二免28 d后抗體水平達(dá)到最高值；A組在免疫后抗體滴度開始升高，首免后28～42 d抗體S/P值出現(xiàn)下降的現(xiàn)象，加強(qiáng)免疫后，PRRSV抗體滴度繼續(xù)升高，B組接種疫苗28 d內(nèi)，二免抗體水平高于首免。

3 討論

本研究表明，PRRSV弱毒疫苗接種后能快速激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體，從表1中可以看出，接種弱毒疫苗28 d后，B組試驗(yàn)豬群的平均抗體滴度超過國家規(guī)定的“抗體合格率超過70%”的標(biāo)準(zhǔn)。而A組結(jié)果顯示，PRRSV滅活疫苗在二免前豬群抗體合格率僅為64%，需要進(jìn)行補(bǔ)免才能使抗體合格率達(dá)到國家的基本要求。圖1結(jié)果顯示，B組在接種弱毒疫苗28 d后，PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果呈陽性。隨后，S/P值繼續(xù)升高，表明體內(nèi)的抗體滴度在免疫后不斷增強(qiáng)，抗體水平穩(wěn)定，能夠有效保護(hù)豬群不受該病的感染。而A組在接種滅活疫苗后28 d，仍有部分豬的抗體S/P值低于0．42，表1 中A組在免疫后42 d相比2周前抗體陽性率較高，但是在28～42 d內(nèi)，S/P值還出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，說明首免28 d后抗原蛋白在機(jī)體內(nèi)激發(fā)抗體產(chǎn)生的能力已開始減弱，因此，即使抗體陽性率符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，仍需對(duì)抗體S/P值進(jìn)行定期監(jiān)測(cè)，不能忽視因?yàn)轶w內(nèi)抗原降解而導(dǎo)致的豬群在出欄前抗體水平下降。二免后抗體水平雖然有所上升，首免70 d后，還存在個(gè)別豬出現(xiàn)抗體陰性的現(xiàn)象。在整個(gè)免疫過程中，滅活疫苗誘導(dǎo)的抗體始終低于弱毒疫苗，弱毒疫苗在接種1頭份/頭即可產(chǎn)生良好的效果，無需進(jìn)行二次免疫。而滅活疫苗要達(dá)到國家規(guī)定的抗體合格率，則需進(jìn)行加強(qiáng)免疫，時(shí)間設(shè)置在首免30日左右最為適宜。

表1 PRRSV滅活疫苗與弱毒疫苗免疫組的抗體陽性率 %

圖1 接種疫苗后PRRSV抗體S/P值變化情況

PRRSV滅活疫苗安全性較高，易于運(yùn)輸和保存，使用方便，因此為眾多養(yǎng)殖戶所青睞[4]。滅活疫苗可能在加工過程中造成一些重要的抗原表位喪失[5]，僅能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，導(dǎo)致首免效果不理想，需要二次免疫才能產(chǎn)生對(duì)豬群的有效保護(hù)。而弱毒疫苗具有快速誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生，抗體有效時(shí)間長等優(yōu)點(diǎn)，近年來也備受用戶關(guān)注，這可能是因?yàn)槿醵疽呙缃臃N后，機(jī)體內(nèi)部免疫與自然感染病毒類似，能同時(shí)誘導(dǎo)體液反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)[6]，使得抗體的產(chǎn)生速度更快，持續(xù)時(shí)間更長。但是PRRSV弱毒疫苗使用過程中存在安全性方面的問題，活的毒株可能在豬體內(nèi)發(fā)生弱毒返強(qiáng)的現(xiàn)象。豬場(chǎng)在疫苗選擇的問題上，應(yīng)該根據(jù)具體實(shí)際情況而定，在周邊PRRSV感染威脅較小的情況下，應(yīng)盡可能選用滅活疫苗，增加免疫次數(shù)，進(jìn)行定期抗體水平監(jiān)測(cè)，以期達(dá)到凈化PRRSV的目的[7]。而在PRRSV流行地區(qū)，或豬場(chǎng)已經(jīng)暴發(fā)該病，則應(yīng)選用弱毒疫苗，但需注意的是，斷奶仔豬不宜接種弱毒疫苗，因?yàn)椴糠秩醵疽呙缈赡苡捎跍p毒效果不理想，使抵抗力較低的仔豬出現(xiàn)“疫苗毒”感染[8]。另外，PRRSV弱毒疫苗的毒株在機(jī)體內(nèi)容易與其他毒株發(fā)生重組，產(chǎn)生病毒變異株，因而豬場(chǎng)在選用弱毒疫苗時(shí)，應(yīng)盡量避免不同毒株的疫苗混用。

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2017-02-16）

劉清源（1990-），男，廣東惠州人，碩士研究生，從事臨床獸醫(yī)方面研究