楊銘華+李常興+梅曉珍

【摘要】 目的 對(duì)一例進(jìn)行性對(duì)稱性紅斑角化癥（Progressive symmetric erythrokeratodermia，PSEK）患者GJB2、GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因突變進(jìn)行檢測(cè)。

方法 采用聚合酶反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增GJB2、GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB基因所有的外顯子及其鄰近的剪切點(diǎn)并進(jìn)行直接測(cè)序。

結(jié)果 PSEK患者的GJB2基因存在雜合突變，核苷酸序列第608位發(fā)生錯(cuò)義突變，堿基由T突變成C，GJB2基因編碼的蛋白第203位的異亮氨酸轉(zhuǎn)換成蘇氨酸突變；GJB3、GJB4、GJA1、GJB6及SERPINB基因未發(fā)現(xiàn)突變；患者家庭成員未發(fā)現(xiàn)GJB2基因突變。

結(jié)論 GJB2基因突變可能是該例PSEK患者的致病基因。

【關(guān)鍵詞】 進(jìn)行性對(duì)稱性紅斑角化癥；GJB2；基因；突變

中圖分類號(hào)：R758.61 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2017.03.004

【Abstract】 Objective To detect GJB2，GJB3，GJB4，GJB6，GJA1 and SERPINGB7 gene mutation in a case of progressive symmetric erythrokeratodermia（PSEK）.

Methods Polymerase chain reaction （PCR） was used to amplify all exons and adjacent shearing points of GJB2，GJB3，GJB4，GJB6，GJA1 and SERPINB genes，and they were sequenced directly.

Results Heterozygous mutations existed in the GJB2 gene of PSEK patients，and base changed from T to C.A missense mutation occurred at the 608th nucleotide sequence.The 203rd isoleucine converted into threonine mutant in protein encoded by GJB2 gene.And no mutations were found in GJB3，GJB4，GJA1，GJB6 and SERPINB genes，and no mutations in GJB2 gene were found in patients family members.

Conclusion Mutations in the GJB2 gene may be the causative gene in patient with PSEK.

【Key words】 PSEK；GJB2；gene；mutation

紅斑角化癥是皮膚科少見(jiàn)的單基因皮膚病，主要有兩種臨床亞型：（1）進(jìn)行性對(duì)稱性紅斑角化癥（OMIM：602036；Progressive symmetric erythrokeratodermia，PSEK）；（2）可變性紅斑角化癥（OMIM：133200；Erythrokeratodermia variabilis，EKV）[1～3]。1911年，Darier首次報(bào)道并命名PSEK，PSEK又稱Gottron綜合征，是一種常染色體顯性遺傳病，但約有半數(shù)病例為散發(fā)病例，患兒出生時(shí)正常，一般在生后數(shù)月內(nèi)發(fā)病，亦有延遲至17歲時(shí)發(fā)病。皮疹為紅色角化性紅斑或斑塊，對(duì)稱分布，好發(fā)于手掌、足跖、手腕、手足背、肘、踝、膝、臀和臉部等，一般無(wú)自覺(jué)癥狀與系統(tǒng)表現(xiàn)。病理學(xué)特征為輕度表皮增生伴致密角化過(guò)度和角化不全，可出現(xiàn)毛囊角栓，棘層增厚。本研究報(bào)道1例PSEK，測(cè)序發(fā)現(xiàn)該患者GJB2基因2號(hào)外顯子發(fā)生錯(cuò)義突變c.608 T>C（Ile203Thr），現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集PSEK患者家系所有成員4人。先證者，男，16歲，2歲時(shí)于雙手掌、足底出現(xiàn)對(duì)稱性紅斑。當(dāng)時(shí)未予處理，10歲時(shí)，皮疹開(kāi)始增多，表現(xiàn)為對(duì)稱性紅斑、角化性斑丘疹、斑塊、脫屑，伴有異味，累及雙手掌、足底、手指等（圖1A，B）。冬天與夏天無(wú)明顯變化。真菌鏡檢未發(fā)現(xiàn)菌絲和孢子?；颊咦愕兹〔男薪M織病理學(xué)檢查：表皮網(wǎng)籃狀角化過(guò)度，顆粒層和棘層增厚；真皮淺層可見(jiàn)少量淋病細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1C）。透射電鏡示基底層細(xì)胞間隙增大（圖1D）。先證者父母是非近親婚配，父母和弟弟無(wú)類似臨床癥狀。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）采集患者、家系成員及100例健康對(duì)照者的靜脈血4 ml，用EDTA二鉀鹽抗凝。按照QIAGEN試劑盒操作規(guī)程抽提基因組DNA。（2）用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)能夠擴(kuò)增GJB2、GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因所有編碼外顯子和鄰近的剪切位點(diǎn)引物，擴(kuò)增反應(yīng)所需的引物的序列見(jiàn)表1。（3）PCR反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件：PCR總反應(yīng)體系為30 μL，包括10×緩沖液3 μL，正向與反向引物各1 μL，20 ng基因組DNA，2 μL dNTPs和0.2 μL Taq，模板2 μL，H2O 20.8 μL。PCR反應(yīng)參數(shù)：預(yù)變性：96℃ 5 min；變性96℃ 20 s；退火55℃之間 3 min；延伸72℃ 1 min；最后終端延伸72℃ 5 min。（4）GJB2、GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因突變分析。純化產(chǎn)物后用ABI 3730（Applied Biosystem）型DNA測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序。PCR反應(yīng)進(jìn)行30個(gè)循環(huán)。

2 結(jié) 果

PESK家系GJB2基因測(cè)序結(jié)果顯示，患者的GJB2基因核苷酸序列第608位發(fā)生錯(cuò)義突變，堿基由T突變成C，GJB2基因編碼的蛋白第203位的異亮氨酸轉(zhuǎn)換成蘇氨酸突變（p.Ile203Thr）。見(jiàn)圖2A。PESK家系無(wú)臨床表現(xiàn)者、100例正常對(duì)照者未發(fā)現(xiàn)GJB2p.Ile203Thr突變。見(jiàn)圖2B。該患者的GJB2突變?yōu)樾律蛔?。PESK家系所有成員未檢測(cè)出GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因突變。

3 討 論

PSEK的病因及發(fā)病機(jī)制目前尚未闡明。1997年Ishida-Yamamoto等的研究認(rèn)為L(zhǎng)OR是PSEK的致病基因[4～5]，但Richard等對(duì)LOR基因是PSEK的致病基因提出質(zhì)疑，認(rèn)為Ishida-Yamamoto等報(bào)道中患者的臨床診斷可能是Vohwinkel綜合征的魚(yú)鱗病亞型而非PSEK[6]。目前的研究顯示：EKV發(fā)病相關(guān)的基因還有連接蛋白30.3（Cx30.3）基因及連接蛋白31（Cx31）基因[2，7]。這些研究提示PSEK具有遺傳異質(zhì)性。

本例患者的臨床表現(xiàn)為手掌、足底、手指等部位紅斑、斑塊伴角化，臨床符合PSEK，家系成員未發(fā)現(xiàn)類似臨床表型，組織病理學(xué)顯示致密的網(wǎng)籃狀角化過(guò)度，顆粒層、棘層增厚，真皮淺層可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，透視電鏡示基底層細(xì)胞間隙增大，病理和超微病理表現(xiàn)符合PSEK。先證者的臨床及組織病理與Nagashima型掌跖角化癥表現(xiàn)相似[4～5]，Nagashima型掌跖角化癥是由SERPINB7基因突變引起[9]，我們對(duì)SERPINB7基因7個(gè)編碼外顯子測(cè)序，未發(fā)現(xiàn)變異位點(diǎn)，排除了Nagashima型掌跖角化癥的診斷。進(jìn)一步對(duì)隙縫連接蛋白GJB2、GJB3、GJB4、GJB6及GJA1基因進(jìn)行測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)GJB2基因核苷酸序列第608位發(fā)生錯(cuò)義突變，堿基由T突變成C，GJB2基因編碼的蛋白第203位的異亮氨酸轉(zhuǎn)換成蘇氨酸突變，未發(fā)現(xiàn)GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因突變位點(diǎn)?；颊吒改负偷艿芪窗l(fā)現(xiàn)GJB2 p.Ile203Thr突變位點(diǎn)，該突變位點(diǎn)與家系臨床表型共分離，因此，可以考慮該突變?cè)谠摷蚁抵衅鹱饔茫摶颊邽樾律蛔?。編碼連接蛋白26（Connexin 26，Cx26）的GJB2基因，有2個(gè)細(xì)胞膜外區(qū)，在內(nèi)耳和皮膚組織均有表達(dá)。GJB2基因的突變會(huì)導(dǎo)致內(nèi)耳和皮膚功能的損害，例如GJB2基因突變可以導(dǎo)致聾啞癥伴掌跖角化癥和KID綜合征[10～14]。

我們雖然確診了該例患者，但是尚未找到很好的治療方法，維甲酸類藥物如他扎羅汀及激素軟膏復(fù)方氟米松軟膏能改善患者的皮損，但停藥后容易復(fù)發(fā)，該類患者的治療有待進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)

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（收稿日期：2017-04-10 修回日期：2017-04-28）

（編輯：潘明志）