趙崇+肖佳

（1.黑龍江威凱洱生物技術(shù)有限公司；2.哈爾濱凱程制藥有限公司）

摘 要：本實(shí)驗(yàn)對(duì)五味子配方顆粒劑的提取工藝及五味子配方顆粒劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。按照L9（34）正交設(shè)計(jì)表?xiàng)l件進(jìn)行試驗(yàn)，得到最佳提取工藝為加12倍量水，浸泡5小時(shí)，回流提取3次，每次1.5小時(shí)。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高，本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可以用于五味子配方顆粒劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：五味子配方顆粒劑；提?。毁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis （Turcz.）Baill.或華中五味子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils.的干燥成熟果實(shí)。唐等《新修本草》載“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。五味子具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心的功效。五味子常用于久嗽虛喘、夢(mèng)遺滑精、自汗、盜汗、津傷口渴、遺尿尿頻、內(nèi)熱消渴、心悸失眠等。五味子具有保肝、保護(hù)心腦血管、抗氧化、抗衰老、鎮(zhèn)靜、催眠等多種功能[1-5]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)五味子配方顆粒劑的提取工藝及五味子配方顆粒劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

HQ-50高端試劑級(jí)超純水機(jī)（鄭州華新電氣公司）；STIER M8000D實(shí)驗(yàn)室洗瓶機(jī)（廣州安一生物科技有限公司）；LC-310液相色譜系統(tǒng)（江蘇天瑞儀器股份有限公司）；15L多功能型超聲波清洗器（上海聲彥超聲波儀器有限公司）；LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；RMB 9044奧豪斯電子天平（上海書培實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。乙腈（上海甲美精細(xì)化工有限公司）；甲醇（山東浩中化工科技有限公司）；氯仿（山東浩中化工科技有限公司）；乙醇（山東浩中化工科技有限公司）；正己烷（山東浩中化工科技有限公司）；石油醚（30-60℃）（山東浩中化工科技有限公司）；甲酸乙酯（南京維之誠化學(xué)試劑有限公司）；甲酸（南京維之誠化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素考察

2.1.1 藥材粉碎

分別選用五味子藥材最初粉、粗粉、細(xì)粉進(jìn)行水提，結(jié)果最粗粉、粗粉、細(xì)粉的水煎液呈乳濁狀，難以用常規(guī)方法濾過，確定以五味子藥材為原料進(jìn)行試驗(yàn)。

2.1.2 提取次數(shù)

取五味子，加12倍量水，浸泡5小時(shí)，回流提取1小時(shí)，過濾，濃縮提取膏，將藥渣加12倍量水，回流提取1小時(shí)，過濾，濃縮提取膏，再將藥渣加12倍量水，回流提取1小時(shí)，過濾，濃縮提取膏。

2.1.3 加水倍數(shù)

取五味子，分別提取三次，回流提取時(shí)間為1小時(shí)，第一次加10倍水，浸泡5小時(shí)，連續(xù)三次，第二次加12倍水，浸泡5小時(shí)，連續(xù)三次，第三次加14倍水，浸泡5小時(shí)，連續(xù)三次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。

2.1.4 提取時(shí)間

取五味子，分別提取三次，加12倍水，浸泡5小時(shí)，第一次回流提取時(shí)間為1小時(shí)，連續(xù)三次，第二次回流提取時(shí)間為1.5小時(shí)，連續(xù)三次，第三次回流提取時(shí)間為2.0小時(shí)，連續(xù)三次，別過濾，合并濾液，減壓濃縮。

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇提取次數(shù)、加水倍數(shù)和提取時(shí)間作為考察因素，采用正交試驗(yàn)法對(duì)影響提取效率的其它工藝條件進(jìn)行優(yōu)選。采用3個(gè)考察水平，用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平表見表1。

3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

3.1 檢查應(yīng)符合《中國藥典》2015版附錄顆粒劑通則項(xiàng)下的檢查項(xiàng)目。重金屬不得超過百萬分之二十、砷鹽不得超過百萬分之十。

3.2 含量測(cè)定

3.2.1 色譜條件。色譜柱為KromasilTM C18（250mm×4.6mm，5μm）；乙腈-水（68：32），為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為224nm；流速1.0mL·min-1。

3.2.2 供試品溶液的制備。取五味子配方顆粒劑，精密稱定，精密加水20ml，超聲使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加正己烷萃取提取4次，每次20毫升，合并正己烷提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓ㄈ芙鈺r(shí)加少量氯仿），轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾。取續(xù)濾液，即得。量取提取濃縮膏適量，加一倍水稀釋，加正己烷萃取提取4次，每次50毫升，合并正己烷提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓ㄈ芙鈺r(shí)加少量氯仿），轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾。取續(xù)濾液，即得。

3.2.3 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取五味子醇甲對(duì)照品，用甲醇超聲溶解并稀釋至每1mL溶液中含五味子醇甲30μg的對(duì)照品溶液。

4 鑒別

供試液制備：取五味子配方顆粒劑，精密加水20ml，超聲使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次20ml.將氯仿層蒸干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。對(duì)照藥材溶液的制備：取五味子，加氯仿20ml.回流提取30分鐘，將氯仿蒸干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。對(duì)照品溶液制備：取五味子醇甲對(duì)照品，加氯仿制成每lml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。陰性對(duì)照液制備：取五味子配方顆粒劑的輔料，精密加水20ml，超聲使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次20ml.將氯仿層蒸干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為陰性對(duì)照液溶液。分別將供試液、對(duì)照藥材溶液、陰性對(duì)照液、對(duì)照品溶液點(diǎn)于硅膠CF254加0.3%羧甲基纖維素鈉的自制板，以石油醚（30-60℃）一甲酸乙酯-甲酸（15：5：l），置紫外光燈（254nm）下檢視。

5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

按照L9（34）正交設(shè)計(jì)表?xiàng)l件進(jìn)行試驗(yàn)，得到最佳提取工藝為加12倍量水，浸泡5小時(shí)，回流提取3次，每次1.5小時(shí)。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高，本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可以用于五味子配方顆粒劑的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1]齊治，崔景榮，田建柱，秦波，樓之岑.五味子果實(shí)揮發(fā)油對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥理作用研究[J].北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1988（06）.

[2]陳延鏞，舒增寶，黎蓮娘.五味子的研究——北五味子降谷丙轉(zhuǎn)氨酶有效成分的分離和鑒定[J].中國科學(xué)，1976（01）.

[3]劉濤，蔡紹先，汪達(dá)麗，陳瑋瑩，鄒立，鄭宇瓊，溫博貴.五味子對(duì)急性四氯化碳中毒大鼠肝整合素α1的影響[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2008（12）.

[4]熊雅婷，黃芳，徐麗華，竇昌貴，馬世平.五味子提取物對(duì)小鼠睡眠剝奪后腦組織自由基和一氧化氮的影響[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006（03）.

[5]王雯雯，仰榴青，李永金，吳向陽，鄒艷敏，趙江麗.南、北五味子提取物對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜、催眠作用的影響[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008（02）.