李雯

（黑龍江神志醫(yī)院）

摘 要：本實驗以肉桂酸為指標對清解防感顆粒提取工藝進行研究。清解防感顆粒最佳提取工藝為加入14倍量水，煎煮100分鐘，連續(xù)提取2次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高。

關(guān)鍵詞：清解防感顆粒；提??；工藝

清解防感顆粒由生甘草、金銀花、玄參、陳皮、大棗組成。清解防感顆粒主要用于防治甲型H1N1流感。玄參為清解防感顆粒主要成分之一。玄參為雙子葉植物玄參科Scrophulariaceae玄參Scrophularia ningpoensisHemsl. 的干燥根。玄參具有清熱涼血，瀉火解毒，滋陰的功效。玄參用于溫熱病熱入營血、煩躁、夜寐不安、口渴舌絳、神識不清或身發(fā)斑疹等癥。《玉楸藥解》記載：“玄參，清金補水，凡瘡瘍熱痛，胸膈燥渴，溲便紅澀，膀胱癃閉之證俱善。清肺與陳皮、杏仁同服，利水合茯苓、澤瀉同服?！毙⒕哂锌寡?、保肝、抗氧化、抗動脈粥樣硬化、抗心肌肥大、抗腦缺血、抗血小板聚集等作用[1-5]。本實驗以肉桂酸為指標對清解防感顆粒提取工藝進行研究。

1 儀器與試藥

便攜式PH計（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；色譜柱溫箱（北京國譜科技有限公司）；科捷液相/LC600A梯度液相色譜儀（南京科捷分析儀器有限公司）；雙頻數(shù)控加熱超聲波清洗器（上海汗諾儀器有限公司）；電子分析天平（白山市玖久儀器儀表有限公司）。肉桂酸對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）。乙腈（天津賽孚瑞科技有限公司）；磷酸（壽光市魯科化工有限責任公司）；三乙胺（天津賽孚瑞科技有限公司）；甲醇（天津賽孚瑞科技有限公司）；冰醋酸（天津賽孚瑞科技有限公司）；磷酸二氫鉀（天津賽孚瑞科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素考察

2.1.1 提取次數(shù)

按處方稱取生甘草、陳皮、玄參，粉碎為20目，分別至于圓底燒瓶內(nèi)，分別加入金銀花、大棗，分別提取三次，第一次加10倍水，每次煎煮120分鐘，過濾，合并濾液，減壓濃縮；第二次加10倍水，每次煎煮120分鐘，連續(xù)提取兩次，過濾，合并濾液，減壓濃縮；第三次加10倍水，每次煎煮120分鐘，連續(xù)提取三次，過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中肉桂酸含量并計算肉桂酸收率。

2.1.2 藥材粉碎目數(shù)

按處方稱取生甘草、玄參，分別粉碎為10目、20目、40目，分別至于圓底燒瓶內(nèi)，分別加入金銀花、大棗，加10倍水，每次煎煮120分鐘，連續(xù)煎煮2次，過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中肉桂酸含量并計算肉桂酸收率。

2.1.3 加水倍數(shù)

按處方稱取生甘草、陳皮、玄參，粉碎為20目，分別至于圓底燒瓶內(nèi)，分別加入金銀花、大棗，分別提取三次，第一次加14倍水，每次煎煮120分鐘，連續(xù)2次，第二次加12倍水，每次煎煮120分鐘，連續(xù)2次，第三次加10倍水，每次煎煮120分鐘，連續(xù)2次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中肉桂酸含量并計算肉桂酸收率。

2.1.4 提取時間

按處方稱取生甘草、陳皮、玄參，粉碎為20目，分別至于圓底燒瓶內(nèi)，分別加入金銀花、大棗，分別提取三次，第一次加10倍水，每次煎煮140分鐘，連續(xù)2次，第二次加10倍水，每次煎煮120分鐘，連續(xù)2次，第三次加10倍水，每次煎煮100分鐘，連續(xù)2次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中肉桂酸含量并計算肉桂酸收率。

2.2 正交試驗設(shè)計

實驗結(jié)果表明，粉碎目數(shù)對肉桂酸收率影響不大，提取次數(shù)、加水倍數(shù)和提取時間對肉桂酸收率影響較大。選擇提取次數(shù)、加水倍數(shù)和提取時間作為考察因素，采用正交試驗法對影響提取效率的其它工藝條件進行優(yōu)選。采用3個考察水平，用L9（34）正交表進行試驗，因素水平表見表1。

3 含量測定

3.1 流動相考察

分別考察甲醇-水（35：65），乙腈與1%醋酸溶液梯度洗脫，乙腈-1%冰醋酸溶液（20∶80），甲醇-乙腈-水-三乙胺（7：22：73：0.1）用磷酸調(diào)pH5，0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈-冰醋酸（70：30：1）不同比例的流動相，結(jié)果以乙腈與1%醋酸溶液梯度洗脫為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈與1%醋酸溶液梯度洗脫為流動相。

3.2 色譜條件：依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動相以乙腈為流動相A，以1%醋酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為280nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按肉桂酸銨峰計算應(yīng)不得低于2000。

3.3 供試品溶液的制備

取提取膏適量，精密稱取，加50%甲醇10毫升，超聲處理五分鐘，轉(zhuǎn)移至25毫升容量瓶內(nèi)，50%甲醇定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

3.4 對照品溶液的制備

分別精密稱取肉桂酸對照品5mg，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.5 標準曲線的制備

將濃度為50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml的對照品溶液分別吸取20μL注入HPLC，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標，繪制標準曲線。試驗表明，肉桂酸對照品在50～300μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 回收率試驗

取已知含量的同一批供試品各6份，分別精密添加一定量的肉桂酸對照品，測定含量，計算回收率。平均回收率為98.33%，RSD為0.95%。

4 實驗結(jié)果

解防感顆粒最佳提取工藝為加入14倍量水，煎煮100分鐘，連續(xù)提取2次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高。

參考文獻

[1]李靜，陳長勛，高陽，焦亞斌，吳喜民，王瑞，吳迎春，李醫(yī)明.玄參提取物抗炎與抗動脈硬化作用的探索[J].時珍國醫(yī)國藥，2010（03）.

[2]尚雁君，李醫(yī)明，蔣山好，朱大元，魏善建，焦炳華，黃才國.玄參中苯丙素苷Acteoside對小鼠高尿酸血癥的影響[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報，2006（01）.

[3]李靜，陳長勛，高陽，焦亞斌，吳喜民，王瑞，吳迎春，李醫(yī)明.玄參提取物抗炎與抗動脈硬化作用的探索[J].時珍國醫(yī)國藥，2010（03）.

[4]李醫(yī)明，曾華武，賀祥，姜遠英，蔣山好，朱大元.玄參中環(huán)烯醚萜甙和苯丙素甙對LTB4產(chǎn)生及血小板聚集的影響[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1999（05）.

[5]黃才國，李醫(yī)明，賀祥，魏善建，姜華.玄參中苯丙素苷XS-8對兔血小板cAMP和兔血漿中PGI2/TXA2的影響[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2004（08）.