林城麗，張寶龍，白東清*，朱國(guó)霞，方珍珍，崔培，喬秀亭

（1.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300384；2.天津現(xiàn)代晨輝科技集團(tuán)有限公司天津市水族動(dòng)物功能性飼料企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津301800）

水產(chǎn)養(yǎng)殖

萬壽菊粉對(duì)錦鯉生長(zhǎng)及抗氧化能力的影響

林城麗1，張寶龍2，白東清1*，朱國(guó)霞1，方珍珍1，崔培1，喬秀亭1

（1.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300384；2.天津現(xiàn)代晨輝科技集團(tuán)有限公司天津市水族動(dòng)物功能性飼料企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津301800）

為探究萬壽菊（Tagetes erecta L）粉對(duì)黃金錦鯉（Yamabaki ogon）生長(zhǎng)性能及抗氧化能力的影響，試驗(yàn)選用初始體重為（25.39±1.23）g的黃金錦鯉540尾，隨機(jī)分為6組，分別標(biāo)記為D1～D6，其中D1組為對(duì)照組，D2~D5組為試驗(yàn)組，每組3個(gè)重復(fù)，分別投喂含0.00%、0.50%、1.00%、2.00%、4.00%、8.00%萬壽菊粉的6組等氮等能飼料。飼養(yǎng)60 d后分析不同水平萬壽菊粉對(duì)黃金錦鯉生長(zhǎng)和抗氧化能力的影響。結(jié)果表明：在生長(zhǎng)方面，D5組增重率和蛋白質(zhì)效率提升最顯著且比對(duì)照組分別提高了58.66%、92.77%，D6組肥滿度提升最顯著且比對(duì)照組提高了36.95%，D5組餌料系數(shù)降低最顯著且比對(duì)照組降低了63.69%（P＜0.05）?？寡趸芰Ψ矫?，D5組的血清、頭腎和脾超氧化物歧化酶（SOD）活力提高最顯著且分別比對(duì)照組提高了71.21%、117.92%、230.76%，D4組肝胰臟和中腎SOD活力提高最顯著且分別比對(duì)照組提高了110.82%、92.28%（P＜0.05）；D5組肝胰臟、頭腎和脾過氧化氫酶（CAT）活性提升最顯著且分別高于對(duì)照組93.50%、50.38%100.83%，D4組血清和中腎CAT活性提升最顯著且分別高于對(duì)照組4.11%、66.31%（P＜0.05）；D5組的血清、肝胰臟、頭腎、中腎和脾的谷光甘肽（GSH）含量提升最顯著且分別比對(duì)照組提高了341.38%、223.91%、230.33%、372.26%、439.07%（P＜0.05）；D5組的血清、頭腎和脾GSH-PX含量提升最顯著且分別比對(duì)照組提高了112.07%、155.67%、236.28%，D6組肝胰臟谷光甘肽過氧化物酶（GSH-PX）含量提升最顯著且分別比對(duì)照組提高了157.47%（P＜0.05），試驗(yàn)組的中腎GSH-PX含量提高不顯著（P＞0.05）；D5組血清、肝胰臟、頭腎和脾的丙二醛（MDA）含量降低最顯著且分別比對(duì)照組降低了36.94%、51.25%、47.79%、81.25%（P＜0.05），而試驗(yàn)組中腎MDA含量降低不顯著（P＞0.05）。研究表明，飼料中添加4.00%萬壽菊粉能夠有效促進(jìn)黃金錦鯉生長(zhǎng)性能，并提高其抗氧化能力。

萬壽菊粉；黃金錦鯉；生長(zhǎng)；抗氧化能力

萬壽菊（Tagetes erecta L）屬菊科一年生草本植物，作為一種多用途、高價(jià)值的經(jīng)濟(jì)作物，國(guó)內(nèi)外對(duì)其研究越來越廣泛，主要包括種質(zhì)資源創(chuàng)新、栽培措施、形態(tài)結(jié)構(gòu)和葉黃素提取及應(yīng)用等（Santosa等，2005；Krinsky等，2003；Bosma等，2003），另外，作為食品、化妝品、煙草、醫(yī)藥及禽類飼料添加劑也被廣泛研究。研究表明，萬壽菊粉富含天然維生素E、類胡蘿卜素、腺嘌呤、膽堿、水蘇堿、黃酮類及多種維生素，具有疏風(fēng)清肝之功效，可有效防止脂肪肝的發(fā)生，增強(qiáng)機(jī)體耐缺氧能力（袁玲等，2010）。萬壽菊作為一種觀賞性花卉，不僅具有藥用性和營(yíng)養(yǎng)性，還可作為免疫增強(qiáng)劑用于長(zhǎng)毛兔、獺兔和肉兔（王秀，2010）、塞北兔（楊國(guó)忠，2008）、斷奶仔豬（花城，2009），以及鯉魚、鯽魚、草魚（劉春東，2002）等動(dòng)物，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，市場(chǎng)應(yīng)用潛力很大。

黃金錦鯉（Yamabaki ogon）是觀賞魚中比較名貴的品種之一，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。黃金錦鯉由于近親交配，導(dǎo)致其免疫力下降、發(fā)病率高、經(jīng)濟(jì)損失大（崔培等，2011）。因此，針對(duì)性地篩選適宜的免疫增強(qiáng)劑以替代抗生素成為當(dāng)務(wù)之急。本試驗(yàn)以黃金錦鯉為研究對(duì)象，在飼料中添加不同水平的萬壽菊粉，通過養(yǎng)殖試驗(yàn)，探討萬壽菊粉對(duì)黃金錦鯉生長(zhǎng)及抗氧化能力的影響，為黃金錦鯉養(yǎng)殖開發(fā)促生長(zhǎng)劑和免疫增強(qiáng)劑提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)魚與飼料同批次單色黃金錦鯉購(gòu)自天津藍(lán)科水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，初始體重（25.39± 1.23）g，初始體長(zhǎng)（10.1±0.25）cm，投喂基礎(chǔ)飼料，每2 d換水1/3，在養(yǎng)殖箱中暫養(yǎng)1周后挑選540尾體格健壯、體色鮮艷、無病無傷、規(guī)格一致的作為試驗(yàn)魚。以魚粉、豆粕、花生粕為主要蛋白源，面粉、麩皮為糖源，大豆油為脂肪源，配制試驗(yàn)基礎(chǔ)飼料，并作為對(duì)照組?；A(chǔ)飼料中添加不同含量（0.00%、0.50%、1.00%、2.00%、4.00%、8.00%）的萬壽菊粉（購(gòu)于翔森精細(xì)化工，純度為96%），配制成6種飼料，飼料所要投喂的養(yǎng)殖組分別記為D1～D6。飼料組成及實(shí)際測(cè)定的營(yíng)養(yǎng)成分分析見表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成%

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)與養(yǎng)殖540尾黃金錦鯉隨機(jī)分成6組，分別記為D1～D6，其中D1組為對(duì)照組，D2～D6組為試驗(yàn)組。每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚，隨機(jī)分到18個(gè)規(guī)格相同的水族箱（86 cm×56 cm×48 cm）中。馴化7 d后正式試驗(yàn)。每天9∶00和17∶00投喂飼料；每2 d換水1次（吸底），水質(zhì)要求：pH 7.5～8.0，水溫25～28℃，溶氧6.0～7.0 mg/L，氨氮0.4～0.5 mg/L。試驗(yàn)周期60 d。

1.3指標(biāo)測(cè)定及方法養(yǎng)殖60 d后測(cè)量各組魚的體重、體長(zhǎng)，計(jì)算增重率、肥滿度、蛋白質(zhì)效率及飼料系數(shù)。每個(gè)重復(fù)隨機(jī)撈取10條魚，抽取其血液后離心，血清放入2 mL的離心管，標(biāo)號(hào)后進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。解剖魚體，將采集的肝胰臟、脾、頭腎、中腎等放進(jìn)3號(hào)自封袋（整個(gè)過程在冰袋上操作以保持組織新鮮），凍存于-80℃冰箱。組織測(cè)定前用微量勻漿器研磨，將勻漿液倒入離心管中，于4℃、3000 r/min離心20 min后，吸取上清液進(jìn)行各指標(biāo)的測(cè)定（閆珊珊，2010）。飼料系數(shù)（FCR）、增重率（WG）、肥滿度（CF）、蛋白質(zhì)效率（PER）的計(jì)算公式：

式中：Id為攝食總量，g；W0、Wt為初始、終末魚體質(zhì)量，g；L為魚體長(zhǎng)，cm；Pd為飼料中蛋白質(zhì)含量，%。

用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）活力，采用TBA法測(cè)定丙二醛（MDA）含量，過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）等指標(biāo)均采用南京建成生物公司的試劑盒測(cè)定。

1.4數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0中的單因素方差分析進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。統(tǒng)計(jì)分析采用Duncan’s法進(jìn)行平均值的多重比較。

2結(jié)果

2.1萬壽菊粉對(duì)錦鯉生長(zhǎng)和飼料利用的影響由表2可知，到了第60天（終末均重），D5、D6組錦鯉體重顯著高于其他組（P＜0.05），其中D5組增高最多且比對(duì)照組提高了30.32%。D6組的增重率、肥滿度、蛋白質(zhì)效率等指標(biāo)均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，試驗(yàn)組各項(xiàng)指標(biāo)均高于對(duì)照組；而餌料系數(shù)呈先下降后上升趨勢(shì)，試驗(yàn)組均低于對(duì)照組。D5、D6組增重率、肥滿度和蛋白質(zhì)效率顯著高于D1～D4組（P＜0.05），其中D5組增重率最高且比對(duì)照組提高了58.66%，D6組肥滿度最高且比對(duì)照組提高了36.95%，D5組蛋白質(zhì)效率最高且比對(duì)照組提高了92.77%；D4～D6組飼料系數(shù)顯著低于D1～D3組（P＜0.05），其中D5組餌料系數(shù)最低且比對(duì)照組降低了63.69%。

表2 萬壽菊粉對(duì)錦鯉生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

2.2萬壽菊粉對(duì)錦鯉血清及組織中抗氧化指標(biāo)的影響

2.2.1萬壽菊粉對(duì)錦鯉血清及組織中SOD活力的影響由表3可知，D4、D5組血清SOD活力顯著高于對(duì)照組，D5組最高，較對(duì)照組提高了71.21%（P＜0.05）；D5組的頭腎和脾SOD活力均顯著高于對(duì)照組，分別提高了117.92%、230.76%（P＜0.05）；各試驗(yàn)組的肝胰臟SOD活力均顯著高于對(duì)照組，其中D4組活力最大，比對(duì)照組提高了110.82%（P＜0.05）；D4、D5組的中腎SOD活力顯著高于對(duì)照組，其中D4組活力最大，比對(duì)照組提高了92.28%（P＜0.05）。

表3 萬壽菊粉對(duì)錦鯉SOD活力的影響

2.2.2萬壽菊粉對(duì)錦鯉血清及組織中MDA含量的影響由表4可知，各組血清及各個(gè)組織的MDA含量均低于對(duì)照組，其中D5組血清、肝胰臟、頭腎、脾的MDA含量最低（P＜0.05），比對(duì)照組分別降低了36.94%、51.25%、47.79%、81.25%。D6組中腎的MDA含量最低，比對(duì)照組降低了16.07%，但各組間變化不顯著（P＞0.05）。

2.2.3萬壽菊粉對(duì)錦鯉血清及組織中CAT活力的影響根據(jù)表5所示，各試驗(yàn)組的CAT活力均高于對(duì)照組，D3、D4組中的血清CAT活力顯著高于對(duì)照組，其中D4組活力最高且比對(duì)照組提高了4.11%（P＜0.05）；D5組的肝胰臟CAT活力顯著高于對(duì)照組，提高了93.50%（P＜0.05）；D3～D5組的頭腎中CAT活力顯著高于對(duì)照組和D2組，其中D5組活力最高，較對(duì)照組提高了50.38%（P＜0.05）；D4～D6組中腎CAT活力顯著高于對(duì)照組，其中D4活性最高，較對(duì)照組提高了66.31%（P＜0.05）；D4～D5組的脾CAT活力顯著高于其余各組，其中D5組CAT活力最高，較對(duì)照組提高了100.83%（P＜0.05）。

表4 萬壽菊粉對(duì)錦鯉MDA含量的影n響mol/mL

表5 萬壽菊粉對(duì)錦鯉CAT活力的影響U/mL

2.2.4萬壽菊粉對(duì)錦鯉GSH含量的影響從表6可以看出，各組的錦鯉組織、血清中GSH含量均高于對(duì)照組。其中，D3～D6組的血清GSH含量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），D5、D6組的肝胰臟和脾GSH含量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），D5組的頭腎、中腎GSH含量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；D5組血清、頭腎、中腎、脾中GSH含量均最高，比對(duì)照組分別提高了341.38%、223.91%、230.33%、372.26%、439.07%。

表6 萬壽菊粉對(duì)錦鯉的GSH含量的影響

2.2.5萬壽菊粉對(duì)錦鯉GSH-PX活力的影響從表7可以看出，各試驗(yàn)組的組織、血清中GSHPX活力均高于對(duì)照組。其中，D2～D6組的血清GSH-PX活力均顯著高于對(duì)照組，D5組活力最大，相比對(duì)照組提高了112.07%（P＜0.05）；D3～D6組的頭腎GSH-PX活力顯著高于對(duì)照組，D5組活力最大，相比對(duì)照組提高了155.67%（P＜0.05）；D5組的脾GSH-PX活力顯著高于對(duì)照組，相比對(duì)照組提高了236.28%（P＜0.05）；D3～D6組的肝胰臟GSH-PX活力顯著高于對(duì)照組和D2組（P＜0.05），其中D6組活力比對(duì)照組提高了157.47%；各組的中腎GSH-PX活力變化不明顯（P＞0.05）。

表7 萬壽菊粉對(duì)錦鯉GSH-PX活力的影響

3討論

3.1萬壽菊粉對(duì)錦鯉生長(zhǎng)指標(biāo)的影響在飼料中添加菊粉分別投喂刺參（梁超，2011）、鯉魚（任永林，2008）、肉仔雞（張艷，2004）發(fā)現(xiàn)，其飼料轉(zhuǎn)化率、特定生長(zhǎng)率（SGR）、相對(duì)生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)和增重顯著提高。從本試驗(yàn)生長(zhǎng)指標(biāo)可以看出，在飼料中添加不同含量的萬壽菊粉飼喂黃金錦鯉，對(duì)促進(jìn)魚體的增重率、肥滿度、蛋白質(zhì)效率及降低飼料系數(shù)均有顯著影響，其中4%水平的萬壽菊粉對(duì)錦鯉增重率、蛋白質(zhì)效率、飼料系數(shù)效果最佳，而8%水平的萬壽菊粉對(duì)錦鯉的肥滿度效果最佳。隨著萬壽菊粉添加水平的提高，黃金錦鯉的增重率、蛋白質(zhì)效率、肥滿度明顯提高，而飼料系數(shù)明顯降低，這是因?yàn)轱暳纤鞍踪|(zhì)為魚的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，試驗(yàn)組飼料系數(shù)降低意味著飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用效率更高。萬壽菊粉促生長(zhǎng)的原因：一方面是因?yàn)槿f壽菊粉中含有多種氨基酸、常量及微量礦物元素及維生素等營(yíng)養(yǎng)成分，尤其是菊糖，能促進(jìn)攝食動(dòng)物的生長(zhǎng)。萬壽菊粉含有的菊糖具有益生素作用，能增強(qiáng)胃腸道蠕動(dòng)，提高腸胃功能，增加消化和食欲，從而促進(jìn)了腸道對(duì)食物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，進(jìn)而促進(jìn)生長(zhǎng)。另一方面是其濃烈的芳香氣味可提高錦鯉的食欲，增加魚對(duì)飼料的攝入量。而胡月明（2002）用添加萬壽菊花粉的餌料飼喂鯉魚發(fā)現(xiàn)，對(duì)餌料系數(shù)沒有影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果不同，這可能與養(yǎng)殖品種、養(yǎng)殖環(huán)境以及飼料營(yíng)養(yǎng)組成不同有關(guān)，因此萬壽菊粉促進(jìn)生長(zhǎng)的作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

3.2萬壽菊粉對(duì)錦鯉生化指標(biāo)的影響從生化指標(biāo)結(jié)果可以看出，試驗(yàn)組的SOD、CAT活力和GSH、GSH-PX、MDA含量與對(duì)照組有顯著差異，表明萬壽菊粉能提高黃金錦鯉的非特異性免疫力。這是由于葉黃素是萬壽菊的主要成分，其主要與月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸酯化的形式存在。Kumar等（2010）以及WANG等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，葉黃素能夠淬滅單線態(tài)氧，從而抑制具有破壞性的自由基的形成，因此擁有較強(qiáng)的抗氧化功能。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著萬壽菊粉含量的增多，血清及組織的SOD、CAT活力隨之增加，MDA含量隨之降低，說明萬壽菊粉可通過誘導(dǎo)錦鯉機(jī)體內(nèi)抗氧化酶和還原性物質(zhì)的生成，提高魚體抗氧化能力。且血清中的SOD活力遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于組織，這是由于細(xì)胞膜通透性穩(wěn)定，細(xì)胞內(nèi)SOD酶較少釋入血液，組織中的SOD酶活性就相對(duì)較高，血清中的SOD酶活性就偏低（魏軼男，2013）。SOD活性的升高促使SOD催化分解超氧陰離子，使得體內(nèi)過氧化氫含量增加。CAT可清除組織器官中的過氧化氫，因此其活性也隨之升高。梁超（2011）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加菊粉對(duì)刺參的SOD活性有著顯著影響，表明菊粉可提高刺參非特異性免疫能力。任永林（2008）研究表明，在飼料中添加紫錐菊提取物投喂鯉魚，能顯著提高其組織中相關(guān)免疫酶的活性、降低MDA含量。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著萬壽菊粉含量的增加，血清和組織的GSH、GSH-PX含量也隨之增加，且肝胰臟含量最大。這是因?yàn)镚SH的合成主要在肝內(nèi)，其合成方式有多種，其中一種是GSSG與蛋白質(zhì)分子中的巰基通過巰基轉(zhuǎn)移酶作用生成GSH。由于蛋白質(zhì)效率的提高，致使蛋白質(zhì)分子的巰基增多，從而促進(jìn)GSH的生成（王魯波等，2012）。GSH-PX的生理功能主要是催化GSH參與過氧化反應(yīng)，清除在細(xì)胞呼吸代謝過程中產(chǎn)生的過氧化物和羥自由基，因此，GSH-PX和GSH含量成正比關(guān)系。魏軼男（2013）發(fā)現(xiàn)添加1.0%菊粉可顯著降低1～42日齡肉仔雞肝臟和血清中的MDA含量，并可顯著提高GSH-PX含量（P＜0.05），與本試驗(yàn)結(jié)果相近，但最適添加量不同，這可能與養(yǎng)殖品種不同有關(guān)。

由于各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)、生化指標(biāo)沒有一個(gè)統(tǒng)一的最適濃度，只是各自的最佳結(jié)果固定在一個(gè)范圍。因此萬壽菊粉在錦鯉基礎(chǔ)飼料中的最適添加量及其作用機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

4結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，萬壽菊粉能有效提高黃金錦鯉生長(zhǎng)和抗氧化能力，且在錦鯉飼料中添加4%萬壽菊粉較為適宜。

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The study was investigated the effects of different levels of marigold powder（0%-D1，0.5%-D2，1%-D3，2%-D4，4%-D5，8%-D6）on growth and antioxidant capacity in Gold brocade carp（Yamabaki ogon）.A total of 540 Gold brocade carp with initial average body weight of（25.39±1.23）g were randomly divided into 6 treatment groups with 3 replicates of 30 each.The indicators of samples were measured at 60 d.The results showed that：In terms of growth，the rate of weight growth rate and protein efficiency ratio of D5 group that were the most significantly increased and 58.66%，92.77%higher than the control group，the condition factor of D6 group that was the most significantly increased and 36.95%higher than the control group（P＜0.05）；the feed conversion ratio of D5 group that was the most significantly decreased 63.69%lower than the control group（P＜0.05）.In terms of antioxidant capacity，superoxide dismutase（SOD）activity of serum，head kidney and spleen in D5 group that were the most significantly increased and respectively 71.21%，117.92%，230.76%higher than the control group，SOD activity of hepatopancreas and kidney in D4 group that were the most significantly increased and respectively 110.82%，92.28%higher than the control group（P＜0.05）；Catalase（CAT）activity of hepatopancreas，head kidney and spleen in D5 group that were the most significantly increased and 93.50%，50.38%100.83%higher than the control group，CAT activity of the serum and kidney that were the most significantly increased and 4.11%，66.31%higher than the control group（P＜0.05）；Glutathione（GSH）activities ofserum，hepatopancreas，head kidney，kidney and spleen in D5 group that were the most significantly increased and 341.38%，223.91%，230.33%，372.26%，439.07%higher than the control group（P＜0.05）；Glutathione peroxidase（GSHPX）activities of serum，head kidney and spleen in D5 group that were the most significantly increased respectively 112.07%，155.67%，236.28%higher than the control group，GSH-PX activities of hepatopancreas that was the most significantly increased and 157.47%higher than the control group（P＜0.05），but kidney GSH-Px activities of treated group had no significant difference with control group（P＞0.05）.Methane dicarboxylic aldehyde（MDA）contents of serum，hepatopancreas，head kidney and spleen in D5 group that were the most significantly decreased and 36.94%，51.25%，47.79%，81.25%lower than the control group（P＜0.05），but kidney MDA contents of treated group had no significant difference with control group（P＞0.05）.These data indicate that 4%marigold powder can promote the growth，enhance the oxidation resistance of Yamabaki ogon.

marigold powder；Yamabaki ogon；growth；antioxidant capacity

S963

A

1004-3314（2017）12-0037-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171210

國(guó)家級(jí)星火計(jì)劃項(xiàng)目（2012GA610003；天津市水產(chǎn)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（ITTFRS2017001）

*通訊作者