王中華，馬 瑛（天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑部，天津 300193）

不同產(chǎn)地和藥用部位的蜂房中重金屬含量比較

王中華＊，馬 瑛#（天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑部，天津 300193）

目的：建立同時(shí)測(cè)定蜂房中5種重金屬含量的方法，探討不同產(chǎn)地和藥用部位對(duì)其中重金屬含量的影響。方法：采用原子分光光度法（氫化物還原法、冷蒸氣法、石墨爐法、火焰法）測(cè)定藥材中砷（As）、汞（Hg）、鉛（Pb）、鎘（Cd）、銅（Cu）的含量。比較不同產(chǎn)地和藥用部位的藥材中重金屬含量的差異。結(jié)果：As、Hg、Pb、Cd、Cu檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為0～40、0～0.9、0～80、0～8、0～800 ng/m L（r分別為0.993 0、0.997 4、0.995 5、0.992 7、0.996 6）；定量限分別為4.473、2.35×10－3、8.380、2.128、54 ng/m L，檢測(cè)限分別為1.342、0.701×10－3、2.514、0.632、16 ng/m L；精密性、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜5.0%；加樣回收率分別為84.26%～102.25%（RSD＝7.71%，n＝6）、90.90%～115.31%（RSD＝9.38%，n＝6）、92.16%～105.70%（RSD＝6.19%，n＝6）、90.81%～113.99%（RSD＝8.86%，n＝6）、91.63%～102.79%（RSD＝5.09%，n＝6）。山東、河北產(chǎn)藥材樣品中重金屬超標(biāo)情況最為嚴(yán)重，其主要超標(biāo)的重金屬是Pb；蜂室藥材樣品中Pb含量高于其他藥用部位。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于蜂房中5種重金屬含量的同時(shí)測(cè)定。不同產(chǎn)地和藥用部位蜂房中重金屬含量有一定不同。

產(chǎn)地；藥用部位；蜂房；重金屬；含量；原子吸收分光光度法

歷代中醫(yī)藥著作對(duì)蜂房藥材的來(lái)源分為蜜蜂房和露蜂房?jī)煞N，二者成分略有不同，但藥理作用基本一致[1]。2015年版《中國(guó)藥典》（一部）收錄的來(lái)源是露蜂房，其來(lái)源為胡蜂科昆蟲(chóng)果馬蜂Polistesolivaceous（De-Geer）、日本長(zhǎng)腳胡蜂P.japonicus Saussure或異腹胡蜂Parapolybia varia Fabricius的巢。蜂房全國(guó)各地都有生長(zhǎng)，均為野生，呈圓盤(pán)狀、蓮房狀或不規(guī)則的扁塊狀，大小不一，體輕質(zhì)韌，略有彈性，氣微、味辛淡，功效為攻毒殺蟲(chóng)、祛風(fēng)止痛，可用于瘡瘍腫毒、乳癰、瘰疬、皮膚頑癖等證的治療[2]，并對(duì)某些惡性腫瘤有一定療效[3]。

鑒于當(dāng)前中藥材中重金屬對(duì)藥材質(zhì)量和安全性及臨床療效的影響備受關(guān)注[4]，筆者前期對(duì)臨床常用的中藥飲片進(jìn)行了重金屬含量的篩查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蜂房藥材中鉛（Pb）和鎘（Cd）超標(biāo)情況最嚴(yán)重。據(jù)此情況筆者進(jìn)一步收集市場(chǎng)中不同產(chǎn)地的蜂房進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果證明重金屬超標(biāo)情況具有普遍性。目前，文獻(xiàn)中還沒(méi)有關(guān)于蜂房藥材中重金屬含量方面的研究，2015年版《中國(guó)藥典》（一部）中也未將蜂房藥材確定為限定重金屬含量的品種。而考慮到中藥材中重金屬超標(biāo)的危害是明確的[5]，所以有必要深入地分析產(chǎn)地和藥用部位對(duì)蜂房藥材中重金屬含量的影響[6]，以提高蜂房藥材質(zhì)量和臨床用藥安全性。

由于蜂房本身結(jié)構(gòu)的特殊性，筆者在蜂房藥材樣品中取3個(gè)部位進(jìn)行試驗(yàn)，分別為整個(gè)蜂巢表層及中央部位的蜂室、與蜂巢連接的靠近根部的基柄部以及蜂房基柄部中呈棕褐色顆粒狀的內(nèi)容物；并對(duì)不同產(chǎn)地和藥用部位的蜂房藥材樣品采用原子吸收分光光度法進(jìn)行重金屬含量測(cè)定[7]，數(shù)據(jù)使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和正態(tài)性檢驗(yàn)，并進(jìn)行方差分析對(duì)比差異性?，F(xiàn)將有關(guān)情況報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

AA-6300C、GFA-EX7i型原子吸收分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）；AC2600B型制冷循環(huán)機(jī)（北京同洲維普科技有限公司）；DR-15型石墨消解器、MD6C-6H型微波消解儀（北京盈安美誠(chéng)科學(xué)儀器有限公司）；ST-02A型高速多功能粉碎機(jī)（北京京創(chuàng)泰寧偉業(yè)科技發(fā)展有限公司）；FA1104型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試劑

砷（As）、汞（Hg）、Pb、Cd、銅（Cu）單元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液（中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，批號(hào)分別為GSB04-17142004、GSB04-17292004、GSB04-17522004、GSB04-17672004、GSB04-17252004，質(zhì)量濃度均為1 000μg/m L）；試驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 藥材

2016年1－3月收集主要產(chǎn)地的蜂房樣品（見(jiàn)表1），經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院李天祥副教授鑒定為胡蜂科昆蟲(chóng)果馬蜂/日本長(zhǎng)腳胡蜂/異腹胡蜂的巢，且性狀特征、采收炮制方法均符合2015年版《中國(guó)藥典》（一部）規(guī)定。每個(gè)產(chǎn)地的蜂房樣品分別取3個(gè)部位，即蜂室、基柄部、內(nèi)容物。

表1 蜂房藥材來(lái)源Tab 1 Source of Vespae N idus

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器工作條件

儀器工作條件[8]見(jiàn)表2。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液 （1）As：精密量取“1.2”項(xiàng)下As標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，加0.2%硝酸溶液制成As質(zhì)量濃度為

表2 儀器工作條件Tab 2 Instrumentaldeterm ination condition

1μg/m L的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。精密量取上述As標(biāo)準(zhǔn)品貯備液各適量，加0.2%硝酸溶液制成As質(zhì)量濃度分別為0、5、10、20、40 ng/m L的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液。（2）Hg：精密量取“1.2”項(xiàng)下Hg標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，加10%硝酸溶液制成Hg質(zhì)量濃度為1μg/m L的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。精密量取上述Hg標(biāo)準(zhǔn)品貯備液各適量，分別置于50m L量瓶中，加20%硫酸溶液10m L、5%高錳酸鉀溶液0.5m L，搖勻，滴加5%鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，加水定容，搖勻，得Hg質(zhì)量濃度分別為0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 ng/m L的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液。（3）Pb：按“（1）”項(xiàng)下方法制成Pb質(zhì)量濃度為1μg/m L的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。精密量取上述Pb標(biāo)準(zhǔn)品貯備液各適量，加0.2%硝酸溶液制成Pb質(zhì)量濃度分別為0、5、10、20、40、60、80 ng/m L的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液。（4）Cd：按“（1）”項(xiàng)下方法制成Cd質(zhì)量濃度為1 μg/m L的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。精密量取上述Cd標(biāo)準(zhǔn)品貯備液各適量，加0.2%硝酸溶液制成Cd質(zhì)量濃度分別為0、2、4、6、8 ng/m L的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液。（5）Cu：按“（1）”項(xiàng)下方法制成Cu質(zhì)量濃度為10μg/m L的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。精密量取上述Cu標(biāo)準(zhǔn)品貯備液各適量，加0.2%硝酸溶液制成Cu質(zhì)量濃度分別為0、200、400、600、800 ng/m L的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.2 供試品溶液和空白對(duì)照溶液 （1）Pb：藥材樣品經(jīng)粉碎或剪碎后過(guò)40目篩，精密稱(chēng)定0.5 g，置于聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加0.2%硝酸溶液5m L，混勻，浸泡過(guò)夜后，加防爆膜旋緊外蓋，置于微波消解儀中消解，消解完全后設(shè)定溫度120℃，緩緩加熱2～3 h至紅棕色蒸氣揮盡，并繼續(xù)緩緩濃縮至2～3 m L，放冷，加水定容至25 m L，搖勻，即得。缺藥材樣品，同法制備空白對(duì)照溶液。（2）As：準(zhǔn)確量取“（1）”項(xiàng)下Pb供試品溶液10m L，加25%碘化鉀溶液1m L，搖勻，再加10%抗壞血酸溶液1 m L，搖勻，加鹽酸定容至25m L，搖勻，密塞，置80℃水浴中加熱3min，取出放冷，即得。缺藥材樣品，同法制備空白對(duì)照溶液。（3）Hg：按“（1）”項(xiàng)下方法操作至“并繼續(xù)緩緩濃縮至2～3 m L”，放冷，加20%硫酸溶液2m L、5%高錳酸鉀溶液0.5m L，搖勻，滴加5%鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，加鹽酸定容至10m L，即得。缺藥材樣品，同法制備空白對(duì)照溶液。（4）Cd：按“（1）”項(xiàng)下方法制備Cd供試品溶液和空白對(duì)照溶液。（5）Cu：按“（1）”項(xiàng)下方法制備Cu供試品溶液和空白對(duì)照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下As、Hg、Pb、Cd、Cu系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下儀器工作條件進(jìn)樣測(cè)定，以待測(cè)元素質(zhì)量濃度（x，ng/m L）為橫坐標(biāo)、儀器信號(hào)響應(yīng)值（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程與線性范圍，詳見(jiàn)表3。

表3 回歸方程、線性范圍與定量限、檢測(cè)限Tab 3 Regression equations，linear ranges，lim it of quantitationsand lim itof detections

2.4 定量限與檢測(cè)限考察

分別精密量取“2.2.2”項(xiàng)下空白對(duì)照溶液適量，并按“2.1”項(xiàng)下儀器工作條件進(jìn)樣測(cè)定，以其檢測(cè)結(jié)果的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率作為各待測(cè)元素的檢測(cè)限；以其檢測(cè)結(jié)果的10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率作為各待測(cè)元素的定量限，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下待測(cè)元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液（As、Hg、Pb、Cd、Cu質(zhì)量濃度分別為5、0.1、5、2、200 ng/m L）適量，按“2.1”項(xiàng)下儀器工作條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄儀器信號(hào)響應(yīng)值。結(jié)果，As、Hg、Pb、Cd、Cu儀器信號(hào)響應(yīng)值的RSD分別為1.73%、2.49%、1.62%、1.28%、2.96%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：1）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下儀器工作條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄儀器信號(hào)響應(yīng)值。結(jié)果，As、Hg、Pb、Cd、Cu儀器信號(hào)響應(yīng)值的RSD分別為1.72%、2.10%、1.53%、2.05%、1.92%（n＝5），表明供試品溶液室溫下放置12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同一批樣品（編號(hào)：1）適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.2.1”項(xiàng)下儀器工作條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄儀器信號(hào)響應(yīng)值并計(jì)算樣品含量。結(jié)果，As、Hg、Pb、Cd、Cu平均含量分別為67.298、0.382、0.000 5、1.162、0.267mg/kg，RSD分別為1.63%、1.26%、1.93%、2.60%、4.56%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量樣品（編號(hào)：1）0.5 g，共6份，分別加入一定量的待測(cè)元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下儀器工作條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄儀器信號(hào)響應(yīng)值并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 4 Resultsof recovery tests（n＝6）

2.9 藥材樣品中重金屬含量測(cè)定

取7批藥材樣品（每批3個(gè)部位）各適量，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下儀器工作條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄儀器信號(hào)響應(yīng)值并計(jì)算樣品中待測(cè)元素含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 藥材樣品中重金屬含量測(cè)定結(jié)果（n＝3，mg/kg）Tab 5 The contentsofmetallic element in samples（n＝3，mg/kg）

3 討論

2015年版《中國(guó)藥典》（一部）共確定了28種中藥材重金屬的限定標(biāo)準(zhǔn)，其中有12個(gè)品種的標(biāo)準(zhǔn)如下：As≤2.0 mg/kg，Hg≤0.2 mg/kg，Pb≤5.0 mg/kg，Cd≤0.3 mg/ kg，Cu≤20.0mg/kg；有10個(gè)品種規(guī)定了重金屬限定的總量，最低的是冰片（≤5mg/kg），最高的是滑石粉（≤40 mg/kg）。唯一一個(gè)與蜂房比較接近的品種蜂膠，其Pb的含量也要求≤8.0mg/kg。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，所有藥材樣品中Pb的含量最高，可達(dá)到上述限定標(biāo)準(zhǔn)的4.8～23.6倍，與蜂膠相比也高出了近3.0～14.8倍，超標(biāo)情況最嚴(yán)重。這說(shuō)明Pb是蜂房中最主要的重金屬污染物和危害因素，是需要嚴(yán)格控制和監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)。

從產(chǎn)地上分析，以藥材樣品中Pb的含量為指標(biāo)，顯示山東①產(chǎn)地的Pb含量超標(biāo)情況最嚴(yán)重，其次是山東②和河北產(chǎn)地，含量最低的是東北產(chǎn)地，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。以Cd的含量為指標(biāo)，顯示河北產(chǎn)地的Cd含量超標(biāo)情況最嚴(yán)重，其次是山東②和山東①產(chǎn)地，含量最低的是天津和內(nèi)蒙古產(chǎn)地，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。所有產(chǎn)地的藥材樣品中As的含量均低于2015年版《中國(guó)藥典》（一部）限定標(biāo)準(zhǔn)，但河北產(chǎn)地的藥材樣品中As含量相對(duì)較高，與其他產(chǎn)地的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。所有產(chǎn)地的藥材樣品中Hg和Cu的含量均明顯低于2015年版《中國(guó)藥典》（一部）限定標(biāo)準(zhǔn)，其產(chǎn)地上的差異性在此不作分析。

從藥用部位上分析，Pb主要存在于蜂室中，除山東①產(chǎn)地的藥材樣品外，其他各產(chǎn)地蜂室中的Pb含量均高于基柄部和內(nèi)容物，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Cd主要存在于內(nèi)容物中，其含量均高于蜂室和基柄部，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；As多存在于內(nèi)容物中，有5個(gè)產(chǎn)地藥材樣品的內(nèi)容物中As含量高于蜂室和基柄部，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。根據(jù)蜂房藥用部位中Cd和As的含量分布特點(diǎn)，提示在進(jìn)行蜂房采收加工炮制時(shí)，應(yīng)盡量將其棕褐色顆粒狀內(nèi)容物去除，這也符合蜂房炮制規(guī)范中凈制除去雜質(zhì)的要求。由于各藥用部位樣品中Hg和Cu的含量均顯著低于2015年版《中國(guó)藥典》（一部）限定標(biāo)準(zhǔn)，其在部位上的差異在此不作分析。

以上結(jié)果證明，本試驗(yàn)方法可用于蜂房中5種重金屬含量的同時(shí)測(cè)定，且產(chǎn)地和藥用部位對(duì)蜂房中重金屬含量有一定的影響。此外，有文獻(xiàn)對(duì)中藥材交易市場(chǎng)中蜂房主要產(chǎn)地進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)和調(diào)研[9]，發(fā)現(xiàn)目前蜂房在全國(guó)范圍內(nèi)主要有21個(gè)省份的80多個(gè)產(chǎn)地，其中產(chǎn)量最大、分布最廣的是河北、山東、河南、廣西、云南等地。本試驗(yàn)的采樣也參考了以上部分省份或地區(qū)，但由于本次試驗(yàn)產(chǎn)地的樣本量比較單一，結(jié)論還不能全面、客觀地反映蜂房的準(zhǔn)確情況。未來(lái)研究中應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大蜂房各產(chǎn)地的樣本量，以提高結(jié)果的代表性和準(zhǔn)確性。

通過(guò)本次試驗(yàn)可初步推斷，由于目前的蜂房藥材均在自然環(huán)境下生長(zhǎng)，果馬蜂（胡峰）的生活習(xí)性和筑巢特點(diǎn)則決定了在蜂房的構(gòu)筑過(guò)程中容易受到諸如采收地區(qū)的人口密度、土壤水源情況、空氣污染程度、工業(yè)污染程度、城市農(nóng)村生活垃圾、植物及農(nóng)作物分布、農(nóng)藥化肥的使用等諸多因素的影響[10-11]，而這些因素直接或間接影響了蜂房藥材中重金屬的含量。加拿大的環(huán)境研究人員就曾發(fā)現(xiàn)，在蜂巢的組織結(jié)構(gòu)中混有人類(lèi)生活垃圾和塑料的成分[12]，這說(shuō)明果馬蜂（胡峰）的生態(tài)鏈已受到了周?chē)h(huán)境的破壞。同時(shí)，由于蜂房本身結(jié)構(gòu)的特殊性，對(duì)自然環(huán)境中的重金屬可能會(huì)有較強(qiáng)的富集和吸附作用[13]。本試驗(yàn)結(jié)果也證明，不同產(chǎn)地或部位藥材樣品中的重金屬含量差異性較大，這與其當(dāng)?shù)卣w的自然環(huán)境應(yīng)存在一定的相關(guān)性[14]。所以，從分析產(chǎn)地的自然環(huán)境入手，可嘗試篩選和淘汰高污染的蜂房采收產(chǎn)地，并將蜂房中的重金屬含量，尤其是蜂室部位中Pb的含量，作為質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)之一，具有一定的指導(dǎo)性和實(shí)用性。

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（編輯：張 靜）

Comparison of Different Producing Areasand Partson the Contentsof Heavy Metals in Vespae N idus

WANG Zhonghua，MA Ying（Dept.of Pharmacy，the First Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China）

OBJECTIVE:To establish themethod for simultaneous determ ination of 5 heavy metals in Vespae Nidus，and to dis-cuss the effects of difterent producing area and part on the contents of heavy metals in Vespae Nidus.METHODS:The contents of arsenic（As），mercury（Hg），lead（Pb），cadm ium（Cd）and copper（Cu）were determ ined by atom ic spectrophotometry（hydride generation method，cold vapormethod，graphite furnacemethod and flamemethod）.The difference in the contents of heavy metals in sampleswere compared among different producing areas by analyzing data.RESULTS：The linear range of As，Hg，Pb，Cu，Cd were 0-40 ng/m L（r＝0.993 0），0-0.9 ng/m L（r＝0.997 4），0-80 ng/m L（r＝0.995 5），0-8 ng/m L（r＝0.992 7），0-800 ng/m L（r＝0.996 6），respectively.Limitof quantitationwere 4.473，2.35×10－3，8.380，2.128，54 ng/m L，limit of detection were 1.342，0.701× 10－3，2.514，0.632，16 ng/m L.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 5.0%.The recoveries were 84.26%-102.25%（RSD＝7.71%，n＝6），90.90%-115.31%（RSD＝9.38%，n＝6），92.16%-105.70%（RSD＝6.19%，n＝6），90.81%-113.99%（RSD＝8.86%，n＝6），91.63%-102.79%（RSD＝5.09%，n＝6）.The phenomenon that heavy metals of sample from Shandong and Hebei exceed the standard was themost serious.Main heavy metal which exceed the standard was Pb.The content of Pb in Chamber was higher than other parts.CONCLUSIONS:Themethod is simple，precise，stable and reproducible，and can be used for simultaneous determ ination of 5 heavy metals in Vespae Nidus.There are different contents of heavy metal in Vespae Nidus of different producing areas and parts.

Producing areas；Medicinal parts；Vespae Nidus；Heavymetal；Content；Atomic spectrophotometry

R282.5

A

1001-0408（2017）15-2119-05

2016-08-05

2016-10-08）

＊副主任中藥師，碩士。研究方向：臨床藥學(xué)和中藥鑒定分析。E-mail：dazhizhi@hotmail.com

#通信作者：主任中藥師，碩士生導(dǎo)師。研究方向：中藥制劑與成分。電話：022-27432768

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.15.29