姜鷹雁，耿志鵬，劉 燕，索 棟，楊海霞（山東省藥學(xué)科學(xué)院生物藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250101）

頂空氣相色譜法同時(shí)測定艾司奧美拉唑鎂原料藥中6種有機(jī)溶劑的殘留量Δ

姜鷹雁＊，耿志鵬，劉 燕，索 棟，楊海霞#（山東省藥學(xué)科學(xué)院生物藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250101）

目的：建立同時(shí)測定艾司奧美拉唑鎂原料藥中甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機(jī)溶劑殘留量的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為DB-624毛細(xì)管柱，程序升溫，進(jìn)樣口溫度為200℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為250℃，載氣為氮?dú)?，氮?dú)饬魉贋?.0m L/min，分流比為5∶1，頂空進(jìn)樣量為1m L，頂空平衡溫度為80℃，平衡時(shí)間為20m in。結(jié)果：甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為12.56～628.00μg/m L（r＝0.999 7）、20.22～1 011.20μg/m L（r＝0.999 9）、1.96～97.76μg/m L（r＝0.999 7）、3.10～154.88μg/m L（r＝0.999 8）、20.69～1 034.56μg/m L（r＝0.999 8）、3.53～176.72μg/m L（r＝0.999 8）；定量限分別為1.00、0.91、0.47、0.93、0.41、0.35μg/m L，檢測限分別為0.31、0.30、0.14、0.31、0.12、0.11μg/m L；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜3%；加樣回收率分別為94.53%～101.29%（RSD＝2.15%，n＝9）、97.78%～103.42%（RSD＝1.77%，n＝9）、96.99%～105.76%（RSD＝2.59%，n＝9）、96.83%～102.05%（RSD＝1.86%，n＝9）、97.98%～101.13%（RSD＝0.88%，n＝9）、97.80%～102.40%（RSD＝1.41%，n＝9）。結(jié)論：該方法靈敏、準(zhǔn)確，可用于艾司奧美拉唑鎂原料藥中甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機(jī)溶劑殘留量的同時(shí)測定。

艾司奧美拉唑鎂；頂空氣相色譜法；有機(jī)溶劑；殘留量；甲醇；異丙醇；乙腈；二氯甲烷；乙酸乙酯；甲苯

艾司奧美拉唑鎂是奧美拉唑的S異構(gòu)體的鎂鹽[1]，是一種弱堿性物質(zhì)，臨床主要用于胃食管反流性疾病、十二指腸潰瘍、消化性食管炎等相關(guān)疾病的治療[2-3]。艾司奧美拉唑鎂與奧美拉唑相比，其肝臟的首關(guān)效應(yīng)更低，不良反應(yīng)發(fā)生率更低，臨床治療效果更好[4-6]。艾司奧美拉唑鎂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《美國藥典》（USP）、《歐洲藥典》（EP）、《英國藥典》（BP）等國外藥典[7-9]，但均未對(duì)其殘留溶劑檢測方法作出規(guī)定。而人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)議（ICH）對(duì)藥品中殘留溶劑的種類和限度有明確規(guī)定[10]。艾司奧美拉唑鎂在合成工藝中使用了甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機(jī)溶劑，為有效控制該制劑質(zhì)量，保證用藥安全，必須對(duì)上述有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行有效控制[11]。鑒于此，本課題組參考相關(guān)文獻(xiàn)[12-15]，首次采用頂空氣相色譜法建立了同時(shí)測定艾司奧美拉唑鎂原料藥中甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機(jī)溶劑殘留量的方法，以期為艾司奧美拉唑鎂原料藥的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

7890B型氣相色譜儀，包括氫火焰離子化檢測器（FID）、色譜工作站及7697A頂空進(jìn)樣器（美國Agilent公司）；XS-205型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 藥品與試劑

艾司奧美拉唑鎂原料藥（山東省藥學(xué)科學(xué)院生物藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制，批號(hào)：20140301、20140302、20140303）；甲醇對(duì)照品（批號(hào)：130308，純度：≥99.5%）、異丙醇對(duì)照品（批號(hào)：121220，純度：≥99.5%）、乙腈對(duì)照品（批號(hào)：130913，純度：≥99.5%）均購自天津市康科德科技有限公司；二氯甲烷對(duì)照品（批號(hào)：130731，純度：≥99.5%）、乙酸乙酯對(duì)照品（批號(hào)：130701，純度：≥99.5%）均購自西隴化工股份有限公司；甲苯對(duì)照品（萊陽經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠，批號(hào)：20110308，純度：≥99.5%）；N，N-二甲基乙酰胺為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細(xì)管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm）；升溫程序：初始溫度50℃，保持5min，以3℃/min升溫至100℃，再以30℃/m in升溫至230℃，保持3 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測器：FID；檢測器溫度：250℃；載氣：氮?dú)?；氮?dú)饬魉伲?.0m L/min；分流比：5∶1；頂空進(jìn)樣量：1m L；頂空平衡溫度：80℃；平衡時(shí)間：20 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱取甲醇對(duì)照品78.50 mg、異丙醇對(duì)照品126.40mg、乙腈對(duì)照品12.22mg、二氯甲烷對(duì)照品19.36mg、乙酸乙酯對(duì)照品129.32mg、甲苯對(duì)照品22.09mg，置于同一50m L量瓶中，加適量N，N-二甲基乙酰胺定容，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液。精密量取5m L混合對(duì)照品貯備液，置于50m L量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約0.25 g，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加N，N-二甲基乙酰胺5m L，密封，振搖，使溶解，即得。

2.2.3 空白對(duì)照溶液 精密量取N，N-二甲基乙酰胺5 m L，置于頂空瓶中，密封，即得。

2.3 專屬性及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白對(duì)照溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各待測有機(jī)溶劑峰均能達(dá)到基線分離，分離度均＞1.5；甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯的保留時(shí)間分別為4.47、6.66、7.00、7.35、10.40、18.63m in，理論板數(shù)以各待測有機(jī)溶劑峰計(jì)均＞5 000。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測定無干擾。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC Chromatogram s

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液0.4、1.0、2.5、5.0、6.0、20m L，分別置于50m L量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺定容，搖勻，即得系列混合對(duì)照品溶液。取上述系列混合對(duì)照品溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以各待測有機(jī)溶劑質(zhì)量濃度（x，μg/m L）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。

表1 回歸方程與線性范圍Tab 1 Regression equationsand linear ranges

2.5 定量限（LOQ）與檢測限（LOD）考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得LOQ；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得LOD，結(jié)果見表2。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯峰面積的RSD分別為2.22%、2.18%、0.97%、1.09%、1.19%、1.20%（n＝6），表明儀器精密度良好。

表2 LOQ與LOD測定結(jié)果Tab 2 Determ ination resultsof LOQ and LOD

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、12 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯峰面積的RSD分別為2.35%、2.05%、1.22%、1.27%、1.62%、1.08%（n＝5），表明混合對(duì)照品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取樣品（批號(hào)：20140301）約0.25 g，共6份，分別置于頂空瓶內(nèi)，分別精密加入“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液5m L，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯峰面積的RSD分別為2.29%、2.05%、1.39%、1.40%、1.30%、1.05%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20140301）適量，共9份，分別置于50 m L量瓶中，分別加入低、中、高質(zhì)量的各待測有機(jī)溶劑對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表3。

2.10 樣品有機(jī)溶劑殘留量測定

取3批樣品（批號(hào)：20140301、20140302、20140303）各適量，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算有機(jī)溶劑殘留量。結(jié)果，3批樣品中均未檢出殘留溶劑。

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

本課題組曾采用AgilentHP-5（30m×0.32mm，0.25 μm）、DB-1（30m×0.32mm，1μm）、DB-624（30m×0.53 mm，1.8μm）等毛細(xì)管柱對(duì)6種待測有機(jī)溶劑進(jìn)行分離。結(jié)果，采用HP-5、DB-1毛細(xì)管柱時(shí)，混合對(duì)照品溶液各主成分峰對(duì)稱因子較差，且個(gè)別待測有機(jī)溶劑峰與其他峰重合，不能完全將6種待測有機(jī)溶劑分離；采用DB-624毛細(xì)管柱可使6種待測有機(jī)溶劑達(dá)到基線分離。進(jìn)一步研究了DB-624毛細(xì)管柱填料內(nèi)徑分別為（30m×0.32mm，1.8μm）及（30m×0.53mm，3.0μm）時(shí)6種待測有機(jī)溶劑的分離情況，發(fā)現(xiàn)當(dāng)采用DB-624毛細(xì)管柱（30m×0.53mm，3.0μm）時(shí)，各待測有機(jī)溶劑峰相對(duì)于前者對(duì)稱因子較好，理論板數(shù)較高，且保留時(shí)間較適宜，分離度較高。因此，本試驗(yàn)選擇DB-624毛細(xì)管柱（30m×0.53mm，3.0μm）測定樣品中的有機(jī)溶劑殘留量。

表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 3 Resultsof recovery test（n＝9）

3.2 頂空平衡溫度與平衡時(shí)間的選擇

當(dāng)平衡時(shí)間為20m in時(shí)，本課題組分別考察了頂空平衡溫度為70、80、90℃時(shí)各待測有機(jī)溶劑的色譜峰峰面積，結(jié)果表明隨著頂空平衡溫度的升高，色譜峰峰面積增加，靈敏度也隨之提高，考慮到溶劑的沸點(diǎn)會(huì)對(duì)檢測結(jié)果產(chǎn)生影響[16-17]，且當(dāng)平衡溫度為80℃時(shí)各待測有機(jī)溶劑已有較好的響應(yīng)，滿足檢測要求，最終選擇80℃作為頂空平衡溫度。當(dāng)頂空平衡溫度為80℃時(shí)，分別對(duì)平衡時(shí)間10、20和30min進(jìn)行比較，結(jié)果表明當(dāng)平衡時(shí)間達(dá)到20m in與30min時(shí)各待測有機(jī)溶劑峰面積沒有明顯變化，且均高于10m in時(shí)，說明20min時(shí)已經(jīng)達(dá)到氣液平衡。故本試驗(yàn)選擇頂空平衡時(shí)間為20m in。

綜上所述，本方法靈敏、準(zhǔn)確，可用于艾司奧美拉唑鎂原料藥中甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機(jī)溶劑殘留量的同時(shí)測定。

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SimultaneousDeterm ination of 6 Residual O rganic Solvents in Omeprazole M agnesium by Headspace GC

JIANG Yingyan，GENG Zhipeng，LIU Yan，SUO Dong，YANG Haixia（Key Laboratory of Biopharmaceuticals，Shandong Academy of Pharmaceutical Science，Jinan 250101，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the simultaneous determ ination of 6 kinds of residual organic solvents in Omeprazole magnesium，such as methanol，isopropanol，acetonitrile，dichloromethane，ethyl acetate and toluenein.METHODS：Headspace GC was adopted.The determ ination was performed on the column of DB-624 column by temperature programm ing.The inlet temperature was 200℃，and hydrogen flame ionization detector was adopted w ith the temperature of 250℃；nitrogen gas was used as carrier gas w ith flow rate of 2.0 m L/m in；the splitting-radio was 5∶1，and sample size was 1 m L；the headspace temperature was 80℃and the equilibrium time was 20min.RESULTS：The linear range were 12.56-628.00μg/m L formethanol（r＝0.999 7），20.22-1011.20μg/m L for isopropanol（r＝0.999 9），1.96-97.76μg/m L for acetonitrile（r＝0.999 7），3.10-154.88μg/m L for dichloromethane（r＝0.999 8），20.69-1034.56μg/m L for ethyl acetate（r＝0.999 8），and 3.53-176.72μg/m L for toluene（r＝0.999 8）；the limits of quantitation were 1.00，0.91，0.47，0.93，0.41 and 0.35μg/m L respectively；the limits of detection were 0.31，0.30，0.14，0.31，0.12 and 0.11μg/m L respectively；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 3%；the recoveries were 94.53%-101.29%（RSD＝2.15%，n＝9），97.78%-103.42%（RSD＝1.77%，n＝9），96.99%-105.76%（RSD＝2.59%，n＝9），96.83%-102.05%（RSD＝1.86%，n＝9），97.98%-101.13%（RSD＝0.88%，n＝9）and 97.80%-102.40%（RSD＝1.41%，n＝9）.CONCLUSIONS：Themethod is sensitive and accurate，can be used for the simultaneous determ ination of 6 kinds of residual organic solvents in Omeprazolemagnesium，such asmethanol，isopropanol，acetonitrile，dichloromethane，ethyl acetate and toluenein.

Omeprazolemagnesium；Headspace GC；Organic solvent；Residual；Methanol；Isopropanol；Acetonitrile；Dichloromethane；Ethyl acetate；Toluenein

R927.2

A

1001-0408（2017）15-2093-04

2016-08-09

2016-12-12）

（編輯：劉 柳）

“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（No.2009ZX09301-013）

＊工程師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0531-81213067。E-mai：yyjiang2009@163.com

#通信作者：高級(jí)工程師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0531-81213065。E-mail：hxyangxu@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.15.22