龍全江，張穎，徐雪琴

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不同加工方法對(duì)延胡索3種生物堿含量的影響

龍全江，張穎，徐雪琴

安徽中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校，安徽蕪湖 241000

目的 比較不同加工方法對(duì)延胡索藥材中有效成分的影響。方法 采用HPLC測(cè)定延胡索中原阿片堿、去氫紫堇堿、延胡索乙素的含量。色譜柱：Agilent HC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（三乙胺調(diào)pH 5.3）＝26∶74；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣量：10 μL。在上述色譜條件下，3種成分均得到很好分離，各成分質(zhì)量與峰面積在相應(yīng)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（2≥0.999 6），平均加樣回收率分別為100.31%、99.34%、99.34%（RSD≤2.70%）。結(jié)果 大號(hào)規(guī)格（鮮品直徑2.0～3.0 cm）煮制時(shí)間5～6 min、中號(hào)規(guī)格（鮮品直徑1.5～1.9 cm）煮制時(shí)間2～4 min、小號(hào)規(guī)格（鮮品直徑0.7～1.4 cm）煮制時(shí)間1～2 min者中原阿片堿、去氫紫堇堿、延胡索乙素的含量及3種生物堿總含量比各組其他樣品高，經(jīng)煮制加工的延胡索藥材樣品中3種生物堿的含量總體低于蒸制加工所得的延胡索藥材。結(jié)論 本研究為延胡索藥材產(chǎn)地加工工藝的確定提供了依據(jù)。

延胡索；蒸制；煮制；生物堿；高效液相色譜法

延胡索為罌粟科植物延胡索W.T.Wang的干燥塊莖，具有顯著的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、催眠作用，對(duì)冠心病、心律失常、胃潰瘍等多種疾病有較好的治療效果[1]?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》收載的產(chǎn)地加工方法為“置沸水中煮至恰無(wú)白心時(shí)，取出，曬干”[2]。延胡索主產(chǎn)于浙江東陽(yáng)、磐安等地，陜西、安徽、江蘇、湖北、湖南等地也產(chǎn)[3]。產(chǎn)地加工傳統(tǒng)習(xí)慣上主要依據(jù)藥材大小掌握不同的煮制時(shí)間，煮至中心有一小白點(diǎn)時(shí)即可[4]。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，有研究者以延胡索乙素為考察指標(biāo)，分析了不同采收期及不同加工方法對(duì)延胡索藥材的影響，結(jié)果以蒸制加工延胡索乙素含量高[5]；張麗宏等[6]以延胡索乙素、原阿片堿為指標(biāo)的研究，認(rèn)為微波法比煮法為好；孫乙銘等[7]同樣以延胡索乙素、原阿片堿為指標(biāo)對(duì)產(chǎn)地加工工藝進(jìn)行研究。

中藥以多成分起效為其作用特點(diǎn)，延胡索中所含延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素（原阿片堿）等生物堿類(lèi)化學(xué)成分[8-9]具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和抗心律失常等多種生理活性[1]。本研究在對(duì)延胡索產(chǎn)地加工方法進(jìn)行實(shí)地調(diào)研的基礎(chǔ)上，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況，通過(guò)測(cè)定不同加工方法的延胡索藥材中去氫紫堇堿、延胡索乙素、原阿片堿3種生物堿成分的含量，對(duì)其產(chǎn)地加工方法進(jìn)行全面考察和探討，更加客觀、全面地評(píng)價(jià)產(chǎn)地不同加工方法對(duì)延胡索藥材質(zhì)量的影響。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜檢測(cè)儀（包括G1322A在線脫氣機(jī)、G1312B二元梯度泵、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱、G4212B DAD檢測(cè)器、Agilent 1260色譜工作站），Agilent HC-C18（2）色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm，NO.588905-902），DV215CD十萬(wàn)分之一電子分析天平（美國(guó)OHAUS），JK-250DB型超聲波清洗器（合肥金尼機(jī)械制造有限公司）。

延胡索乙素對(duì)照品（批號(hào)CFN99553，純度98%）、去氫紫堇堿對(duì)照品（批號(hào)CFN90330，純度98%）、原阿片堿對(duì)照品（批號(hào)CFN99399，純度98%），武漢天植生物技術(shù)有限公司；乙腈（色譜純），天津市大茂化學(xué)試劑廠，娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 樣品采集與制備

延胡索鮮藥材于2014年5月5日采自安徽省蕪湖縣花橋鎮(zhèn)，不同大小規(guī)格的樣品均采自同一塊藥田，全部樣品經(jīng)本校中藥生藥教研室汪榮斌副教授鑒定為罌粟科植物延胡索W.T.Wang的塊莖。

延胡索鮮藥材經(jīng)淘洗，凈選，除去外皮等非藥用部分，略晾干多余水分，按大小對(duì)藥材進(jìn)行分檔，大、中、小規(guī)格分別編號(hào)為A、B、C，依據(jù)傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)，鮮品直徑大號(hào)為2.0～3.0 cm，中號(hào)為1.5～1.9 cm，小號(hào)為0.7～1.4 cm。根據(jù)傳統(tǒng)加工方法調(diào)研情況，取不同檔樣品（每份500 g）分別進(jìn)行蒸、煮制備，取出，繼續(xù)曬至干。曬干的成品呈不規(guī)則扁球形，表面黃色或黃褐色，具不規(guī)則網(wǎng)狀皺紋。曬至藥材不再減失質(zhì)量，判斷為藥材已曬干，計(jì)算折干率。折干率（%）＝曬干后成品質(zhì)量÷鮮藥材質(zhì)量×100%。樣品加工方法、加工后性狀、折干率、含水量見(jiàn)表1（f為加工前放置2周樣品）。

表1 延胡索藥材樣品加工性狀、折干率及含水量

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（三乙胺調(diào)pH 5.3）＝26∶74；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量10 μL。在此條件下，理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰、原阿片堿峰和去氫紫堇堿峰計(jì)算均不低于3000[10]?？瞻兹軇┥V圖中在與延胡索乙素、去氫紫堇堿、原阿片堿色譜峰相應(yīng)位置上無(wú)峰，說(shuō)明此系統(tǒng)條件無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

3.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)取原阿片堿對(duì)照品1.46 mg、去氫紫堇堿對(duì)照品2.09 mg、延胡索乙素對(duì)照品3.36 mg，置于1000 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，溶解，即得對(duì)照品溶液。

3.3 供試品溶液制備

精密稱(chēng)取樣品粉末0.5 g，加水25 mL，超聲提取2次，30 min/次，過(guò)濾，合并濾液，定容至100 mL容量瓶中，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

注：A.混合對(duì)照品；B.供試品；1.原阿片堿；2.去氫紫堇堿；3.延胡索乙素

3.4 線性關(guān)系考察

取3種對(duì)照品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件分別依次進(jìn)樣2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0 μL，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。原阿片堿＝1270.8＋0.004 3，2＝0.999 9，在0.002 92～0.043 8 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；去氫紫堇堿＝2108.2－1.847 2，2＝0.999 6，在0.004 18～0.062 7 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；延胡索乙素＝906.56－1.421 2，2＝0.999 6，在0.006 72～0.100 8 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果原阿片堿峰面積RSD＝2.71%，去氫紫堇堿峰面積RSD＝1.70%，延胡索乙素峰面積RSD＝2.70%，表明精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品，按“3.3”項(xiàng)下方法分別制備6份供試品溶液，原阿片堿、去氫紫堇堿和延胡索乙素平均含量分別為1.87、0.33、0.56 mg/g，RSD分別為2.19%、2.17%、2.18%，表明方法重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，在0、1、2、3、4、5、6、7、8 h進(jìn)樣測(cè)定，原阿片堿峰面積RSD＝4.04%，去氫紫堇堿峰面積RSD＝1.56%，延胡索乙素峰面積RSD＝1.79%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取6份已知含量的樣品各0.25 g，添加各對(duì)照品溶液適量，按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)得原阿片堿、去氫紫堇堿和延胡索乙素平均加樣回收率分別為100.31%、99.34%、99.34%，RSD分別為1.60%、2.27%、2.70%，見(jiàn)表2。

表2 3種生物堿加樣回收率試驗(yàn)

3.9 樣品的測(cè)定

取各制備好的樣品，分別制備供試品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定3種成分含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 延胡索樣品中3種生物堿含量測(cè)定結(jié)果（mg/g，以干燥品計(jì)）

4 討論

比較延胡索產(chǎn)地加工方法發(fā)現(xiàn)，經(jīng)煮制加工的延胡索藥材中原阿片堿、去氫紫堇堿、延胡索乙素的含量及3種生物堿總含量總體低于蒸制加工所得的延胡索藥材，從多指標(biāo)成分角度分析，延胡索藥材產(chǎn)地加工采用蒸法較好。

在對(duì)延胡索藥材傳統(tǒng)加工企業(yè)調(diào)研時(shí)發(fā)現(xiàn)，不同大小藥材的煮制時(shí)間不同，一般大者5～6 min，小者3～4 min。試驗(yàn)中根據(jù)藥材大小分別設(shè)定加工時(shí)間并通過(guò)藥材切面觀察藥材加工程度。從原阿片堿、去氫紫堇堿、延胡索乙素的含量及3種生物堿總含量變化看，大號(hào)規(guī)格（鮮品直徑2.0～3.0 cm）煮制時(shí)間5～6 min者被檢測(cè)成分含量高，中號(hào)規(guī)格（鮮品直徑1.5～1.9 cm）煮制時(shí)間2～4 min者被檢測(cè)成分含量高，小號(hào)規(guī)格（鮮品直徑0.7～1.4 cm）煮制時(shí)間1～2 min者被檢測(cè)成分含量高。上述規(guī)格試驗(yàn)樣品繼續(xù)延長(zhǎng)煮制時(shí)間則被檢測(cè)成分含量下降。試驗(yàn)還對(duì)煮法與蒸法進(jìn)行了比較研究，在加工時(shí)間相同情況下，蒸法比煮法加工者被檢測(cè)成分含量高。試驗(yàn)結(jié)果表明，不合理延長(zhǎng)煮制時(shí)間，有效成分會(huì)有所損失，而蒸法則保留有效成分較好。

調(diào)研中還發(fā)現(xiàn)，延胡索藥材存在加工前趁鮮放置（連帶泥土）一段時(shí)間后再加工的現(xiàn)象，試驗(yàn)中另設(shè)該組樣品（連帶泥土放置2周）進(jìn)行比較研究。結(jié)果表明，在相同加工條件下，趁鮮放置會(huì)使被檢測(cè)成分含量下降，可見(jiàn)延胡索產(chǎn)地加工應(yīng)以采收后即行加工為好。另外，不同加工品規(guī)格之間被檢測(cè)成分含量差異明顯，規(guī)格越小的延胡索藥材有效成分含量越高。

綜上所述，不同加工方法對(duì)延胡索藥材有效成分含量有影響。不同規(guī)格其煮制時(shí)間、煮制程度、蒸制時(shí)間、蒸制程度等都可能影響測(cè)定結(jié)果，因此，制定規(guī)范化的操作規(guī)程很有必要。本研究為制定延胡索產(chǎn)地加工工藝規(guī)范提供了參考依據(jù)。

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Effects of Different Processes on Contents of Three Alkaloid Ingredients in Coridalis Rhizoma

LONG Quan-jiang, ZHANG Ying, XU Xue-qin

Objective To explore the effects of different processes on the contents of three alkaloid ingredients in Coridalis Rhizoma. Methods The contents of three alkaloid ingredients (protopine, dehydrocorydaline, tetrahydropalmatine) were determined by HPLC. Agilent HC-C18(2) column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) was set at 35 ℃; acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution (triethylamine adjusted pH 5.3) (26:74) was set as mobile phase; the flow rate was 1.0 mL/min and detection wavelength was set at 280 nm; the injection volume was 10 μL. The three components were separated well under these chromatographic conditions. The linear relationship between the mass of each component and the peak area was good (2≥0.999 6). The average recoveries were 100.31%, 99.34%, and 99.34%, respectively (RSD≤2.70%). Results The contents of protopine, dehydrocorydaline, tetrahydropalmatine and the total contents of three alkaloids were higher than other groups in large size samples (diameter of fresh products was 2.0–3.0 cm) which were boiled 5–6 minutes, the medium size samples (diameter of fresh products was 1.5–1.9 cm) which were boiled 2–4 minutes and the small size samples (diameter of fresh products was 0.7–1.4 cm) which were boiled 1–2 minutes. The contents of alkaloid in boiled process were lower than steamed process. Conclusion The results of study provide an experimental basis for origin processing of Coridalis Rhizoma.

Coridalis Rhizoma; steaming process; boiling process; alkaloids; HPLC

10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.021

R282.4

A

1005-5304(2017)07-0090-04

安徽省高等教育振興計(jì)劃人才項(xiàng)目-省級(jí)專(zhuān)業(yè)帶頭人資助項(xiàng)目（2013年）；蕪湖市科技計(jì)劃產(chǎn)學(xué)研合作重點(diǎn)項(xiàng)目（2013cxy03）

（2016-08-27）

（2017-01-09；編輯：陳靜）