王娟娟，孔維歡，吳書奇，李蓮瑞*

（1.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾843300；2.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子832000；3.塔里木大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆阿拉爾843300）

和田黑雞與普通商品雞體液免疫水平差異分析

王娟娟1,2，孔維歡2，吳書奇3，李蓮瑞3*

（1.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾843300；2.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子832000；3.塔里木大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆阿拉爾843300）

利用硫酸銨鹽析法提取免疫球蛋白，采用SDS聚丙烯酰胺法和玫瑰花環(huán)試驗(yàn)的結(jié)果判定和田黑雞（未注射疫苗）和普通商品雞（注射疫苗）體液免疫水平的差異，并分析疫苗對(duì)于家禽免疫力的影響。因和田地區(qū)大部分的和田黑雞都不予以注射疫苗，導(dǎo)致和田黑雞的免疫力和抗病力都較低，極大影響了和田黑雞的商品效益和品種的品質(zhì)，而普通肉用商品雞因出生就開始免疫，免疫力和抵抗力都優(yōu)于和田黑雞，所以本試驗(yàn)分別提取未注射疫苗的和田黑雞和普通商品雞的外周血，通過密度梯度離心法分離血清，采用鹽析法提取血清中的免疫球蛋白IgG，然后將提取的IgG進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，對(duì)比相同濃度下，和田黑雞和普通商品雞IgG的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳輕鏈和重鏈的蛋白量，同時(shí)，進(jìn)行和田黑雞和普通商品雞EAC花環(huán)對(duì)比試驗(yàn)，分析疫苗注射對(duì)免疫力影響的高低。通過試驗(yàn)可以看出普通商品雞IgG的輕鏈和重鏈的蛋白量都顯著大于和田黑雞，并且經(jīng)統(tǒng)計(jì)普通商品雞的EAC花環(huán)率為23.42%，和田黑雞的EAC的花環(huán)率為15.3%，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)兩個(gè)樣本進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)分析，可以看出普通商品雞的EAC花環(huán)率比和田黑雞的EAC花環(huán)率差異顯著(0.01＜P≤0.05)，試驗(yàn)結(jié)果顯示疫苗注射后的普通商品雞體液免疫水平要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于和田黑雞，疫苗注射能夠刺激普通商品雞機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答增強(qiáng)免疫力，預(yù)防疾病，這為和田黑雞疫苗注射的推廣和后期的疫苗研發(fā)提供了必要的參考依據(jù)，通過選擇合適的疫苗并進(jìn)行免疫，是保證家禽養(yǎng)殖的成功和工作人員人身安全的重要手段。

和田黑雞和普通商品雞；體液免疫；差異分析；

IgG（免疫球蛋白）是一類具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的免疫球蛋白，普遍存在于哺乳動(dòng)物的血液、組織液及外分泌液中，在動(dòng)物體內(nèi)具有重要的免疫和生理調(diào)節(jié)作用，是動(dòng)物體內(nèi)免疫最關(guān)鍵的組成物質(zhì)之一，根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原性差異，免疫球蛋白可分為IgG、IgM、IgA、IgE和IgD[1]，雞的lgG主要存在IgM、IgA和IgG中，其中IgG又稱作IgY，相當(dāng)于哺乳動(dòng)物的lgG和IgE[2]，IgG主要是從血清和卵黃中提取，而卵黃抗體是由血清抗體(主要是IgG)在卵黃中的積累形成的[3]，IgG是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體，單體分子結(jié)構(gòu)都是相似的，為兩條相同的重鏈和輕鏈四條肽鏈構(gòu)成的“Y”字形的分子，重鏈包括可變區(qū)（variable region,VH）和恒定區(qū)（constant region,CH），輕鏈可變區(qū)（VL）與重鏈的可變區(qū)相對(duì)應(yīng)，構(gòu)成抗體分子的恒定區(qū)（CL）[4]，紅細(xì)胞受體(ER)能與動(dòng)物的紅細(xì)胞結(jié)合形成玫瑰花結(jié)[5]，通過玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)[6,7]可以反應(yīng)出和田黑雞和普通商品雞的免疫力的高低，這對(duì)動(dòng)物疫病診治、飼養(yǎng)繁殖以及血液學(xué)特性的深入研究等方面都提供了重要參考依據(jù)[8]，也為和田黑雞的品種資源保種和擴(kuò)繁提供基礎(chǔ)的參考材料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物普通商品雞（圖1）與和田黑雞（圖2）來源：塔里木大學(xué)動(dòng)科院實(shí)驗(yàn)站（注：和田黑雞未注射疫苗，商品雞已注射疫苗）；豚鼠：養(yǎng)殖場(chǎng)購買。

圖1 普通商品雞

圖2 和田黑雞

1.1.2 試驗(yàn)試劑磷酸鹽緩沖液、50%硫酸銨溶液、pH8.0的0.005mol/L磷酸緩沖液、奈氏試劑1mmol/L EDTA、30%丙稀酰胺、Tris(pH8.8)、Tris (pH6.8)、10%SDS、10%過硫酸銨、DTT、TEMED、雞紅細(xì)胞懸液、補(bǔ)體。

1.1.3 試驗(yàn)主要儀器雪花制冰機(jī)（FM180型北京長(zhǎng)流科技儀器公司）；電熱恒溫水浴鍋（OK-S26型上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)（Neofuge15R型力康發(fā)展有限公司）；垂直板狀電泳儀（DYC2-24DIV型北京六一儀器制造廠）；電腦三恒多用電泳儀（DYY―10C型北京六一儀器制造廠）；低速臺(tái)式離心機(jī)（TDL-5上海安亭科學(xué)儀器廠）；70℃超低溫冰柜(DN-HW328中科美菱低溫科技有限責(zé)任公司)；電子天平(BS124S北京市賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；超凈工作臺(tái)（SW-CJ-2F型上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；全自動(dòng)攝影生物顯微鏡（DP70+B10-olysLIA日本奧林巴斯）；電子萬用爐（DL-1型北京永光明醫(yī)療儀器廠）；紫外可見分光光度計(jì)（Golds54型上海棱光技術(shù)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 IgG的分離和純化[11]及蛋白電泳IgG的分離純化：取抗血清2ml加2ml PBS(血清已用Hanks液稀釋一倍），慢慢搖動(dòng)避免形成泡沫。在冰浴中逐滴加入4ml飽和硫酸銨溶液，邊加邊攪拌，以防止形成團(tuán)塊，減少沉淀。此時(shí)即有大量的γ-球蛋白沉淀（主要是IgG）[9]，置4℃冰箱靜置30 min冷凍離心(3000rpm，15min)，棄上清。沉淀用2ml PBS緩沖液溶解。逐滴加入1ml飽和硫酸銨邊加邊攪拌，使飽和度為33%，置4℃冰箱30 min，離心收集沉淀（3000rpm，15min），反復(fù)三次，可得到較純的IgG。

1.2.2 IgG的濃度測(cè)定提前將儀器打開，待儀器開機(jī)與自校成功后，預(yù)熱30min后進(jìn)行測(cè)定工作，調(diào)波長(zhǎng)，放置標(biāo)準(zhǔn)液，調(diào)吸光度，將普通商品雞和和田黑雞的原倍IgG樣品加入比色皿中，放入儀器的樣品室內(nèi)，記住放置的順序。蓋下樣品室蓋。依次向外拉出相應(yīng)“1”、“2”位置，讀出相應(yīng)的吸光度值。通過讀數(shù)對(duì)比普通商品雞和和田黑雞的IgG的樣品濃度是否一致，如有差異再進(jìn)行調(diào)整使兩者濃度相等。經(jīng)測(cè)定普通商品雞和和田黑雞的OD280值為1.78[10]。

1.2.3 SDS聚丙烯酰胺凝膠的配制[5]及電泳按蛋白電泳槽廠商使用指南安裝玻璃平板夾層并固定，確定所需凝膠溶液體積，按表1的數(shù)值配制相應(yīng)濃度的分離膠溶液，并按順序加樣。取蛋白濃度一致的普通商品雞與和田黑雞血清IgG樣品10μl，用PBS倍比稀釋至8倍后，加等體積的1×SDS凝膠加樣緩沖液，5min沸水浴后離心。

將電泳裝置與電源相接（正極應(yīng)接下槽），凝膠上所加電壓為8v/cm。當(dāng)染液前沿進(jìn)入分離膠后，把電壓提高到15v/cm，繼續(xù)電泳直至溴酚藍(lán)到達(dá)分離膠底部（約需4h）。

表1 配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離膠所用溶液

按表2制備積層膠：按表給出的數(shù)據(jù)在離心管中制備一定體積及一定濃度的丙烯酰胺溶液，依次混合各成分。加入TEMED后，立即混勻液體并進(jìn)入下一步操作,配制積層膠所需溶液。

表2 配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳5%積層膠所用溶液

1.2.4 染色與脫色在45ml甲醇和45ml水（1: 1）和10ml冰乙酸的混合液溶解0.25g考馬斯亮藍(lán)R250，用濾紙過濾染液去除顆粒狀物質(zhì)，要用染液完全浸泡凝膠，放在平緩搖動(dòng)的平臺(tái)上于室溫染色4h以上，移出并回收染液以備后用，將凝膠浸泡于不加染料的脫色液中，平緩搖動(dòng)4～8h，其間應(yīng)更換脫色液三四次。脫色越充分，考馬斯亮藍(lán)染色法的蛋白質(zhì)檢出下限就越低，脫色24h通常能檢測(cè)到單一條帶中含量低至0.1μg的蛋白質(zhì)，脫色后，可將凝膠浸于水中，用于后續(xù)拍照，脫色時(shí)要注意控制脫色時(shí)間，過長(zhǎng)的脫色時(shí)間或者過短的脫色時(shí)間對(duì)結(jié)果都會(huì)產(chǎn)生影響。

1.2.5 EAC花環(huán)形成試驗(yàn)[11]EAC懸液的配制：取4%的CRBC懸液（雞紅細(xì)胞懸液）200μl加等量的用無鈣、鎂Harks液稀釋成一定濃度的溶血素混勻，置37℃水浴15min，取出后加入50μl（原倍、10倍、50倍、100倍）稀釋的補(bǔ)體，再放于37℃水浴15min取出，備用。

淋巴細(xì)胞的分離：取加1ml無鈣、鎂的Harks液的抗凝血1ml沿管壁輕輕地加入裝入1ml分層液的小試管中，使二者保持清晰的界面，置低速臺(tái)式離心機(jī)中2000rpm離心20min，取出后吸出富含淋巴細(xì)胞層，備用。

取50μl淋巴細(xì)胞懸液加50μl EAC懸液混勻，室溫放置30min后，1000rpm離心5min，棄上清，留少許液體，將試管慢慢旋轉(zhuǎn)使細(xì)胞懸起，最后再取一滴細(xì)胞懸液于載玻片上，慢慢涂開風(fēng)干后進(jìn)行染色。用100%乙醇滴1～2滴在載玻片上的細(xì)胞懸液上，1～2min后。用瑞氏染液染色4min。傾斜沖洗再用工作緩沖液染色4min。傾斜沖洗凈染液后再用吉姆薩工作染液4min后沖洗凈晾干后鏡檢。在高倍鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞中形成EAC花環(huán)的百分?jǐn)?shù)，淋巴細(xì)胞周圍粘附3個(gè)以上CRBC者為EAC花環(huán)形成細(xì)胞。觀察時(shí)要注意混入的多形核白細(xì)胞和單核細(xì)胞形成的花環(huán)，不應(yīng)將其計(jì)入，可從形態(tài)上加以區(qū)分。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 淋巴細(xì)胞分離結(jié)果低速臺(tái)式離心機(jī)中2000rpm離心20min后，可見清晰的分層，一般分為四層，分別為血漿層、淋巴細(xì)胞層、分離液層和紅細(xì)胞層。從圖3、圖4我們可以明顯的看出，未注射疫苗的和田黑雞分離出的淋巴細(xì)胞的量要明顯少于注射疫苗的普通商品雞，在機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫等特異免疫反應(yīng)中，淋巴細(xì)胞起著重要作用，淋巴回流使淋巴結(jié)能很快地接受侵入機(jī)體的抗原刺激，經(jīng)過一系列復(fù)雜的細(xì)胞和體液因子的作用，發(fā)動(dòng)了對(duì)此抗原特異性的免疫反應(yīng)，通過輸出效應(yīng)淋巴細(xì)胞或免疫活性成分，發(fā)動(dòng)身體其他部位，特別是有害成分侵入?yún)^(qū)域的免疫反應(yīng)，及時(shí)解除對(duì)機(jī)體的傷害，未進(jìn)行疫苗免疫的和田黑雞的淋巴細(xì)胞的數(shù)量明顯少于疫苗注射的普通商品雞，反映出了疫苗注射對(duì)于提高禽類的免疫能力具有重要的作用。

圖3 和田黑雞淋巴細(xì)胞分離圖

圖4 普通商品雞淋巴細(xì)胞分離圖

2.2 EAC花環(huán)試驗(yàn)的結(jié)果見圖5、圖6。

圖5 和田黑雞EAC花環(huán)

圖6 普通商品雞EAC花環(huán)

經(jīng)統(tǒng)計(jì)和田黑雞的EAC花環(huán)率為15.3%，普通商品雞的EAC花環(huán)率為23.42%（健康動(dòng)物的EAC花環(huán)率正常值為15%～30%），通過兩個(gè)樣本百分?jǐn)?shù)差異顯著性檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，普通商品雞的EAC花環(huán)率與和田黑雞的EAC花環(huán)率差異顯著(0.01〈P≤0.05)[12]。說明普通商品雞的B淋巴細(xì)胞數(shù)目比和田黑雞多。花環(huán)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。

表3 和田黑雞與普通商品雞EAC花環(huán)統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.3 SDS聚丙烯酰胺凝膠的電泳結(jié)果見圖7、圖8。

IgG是血清主要的抗體成分，約占血液中IG總量的70%～75%，在結(jié)合補(bǔ)體、增強(qiáng)免疫細(xì)胞、吞噬病原微生物和中和細(xì)菌毒素的能力方面具有重要作用，能有效地抗感染。重鏈又稱H鏈，大約由420～440個(gè)氨基酸組成，分子量約為50000～77000。輕鏈又稱L鏈，由213～214個(gè)氨基酸組成，分子量約為22500。從圖7、圖8看出，普通商品雞和和田黑雞跑出兩條清晰的條帶。一條帶在67～70KD之間，另一條帶在25～29.0KD之間[13]，正好符合IgG的重鏈帶和輕鏈帶的分子量，IgG是動(dòng)物血清中含量最高的免疫球蛋白，占血清免疫球蛋白含量的75%～80%，IgG也是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體，尤其是在機(jī)體的免疫反應(yīng)中，IgG的含量最高，是體液免疫的主力軍[14]。

圖7 普通商品雞IgG電泳(10mL血漿分離純化)

圖7中原倍代表1倍稀釋，即為PBS和分離純化血漿以1:1比例進(jìn)行稀釋，以此類推，是將上一次稀釋后的血漿再按1:1比例進(jìn)行再次稀釋，× 4、×8、×16分別代表4倍稀釋、8倍稀釋和16倍稀釋，通過SDS聚丙烯凝膠電泳，我們可以從圖7上看到清晰的兩條帶，分別為重鏈和輕鏈，重鏈的分子量大小為67～70KD，而輕鏈的分子量大小為26～28KD,由于普通商品雞的IgG含量較大，濃度較高，所以重鏈與輕鏈的條帶較寬且顏色較深，這說明普通商品雞具有較高的免疫力。

圖8 和田黑雞IgG電泳結(jié)果(10ml血漿分離純化)

從圖8得知，與普通商品雞一樣，和田黑雞IgG電泳結(jié)果同樣都具有重鏈和輕鏈，但其帶寬要遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于普通商品雞的，且顏色較暗。通過圖7、圖8對(duì)比，可以看出普通商品雞IgG的含量要遠(yuǎn)大于和田黑雞，這反映出了普通商品雞具有更強(qiáng)的免疫力。

5ml普通商品雞血漿分離純化得到的IgG凝膠電泳所得的結(jié)果見圖9。

圖9 普通商品雞與和田黑雞的IgG電泳（5ml）

從圖9可以看出普通商品雞的IgG含量依然很高，但和田黑雞的IgG含量較低，輕鏈基本看不到條帶，說明隨著稀釋度的遞增兩種雞IgG含量都遞減,并且普通商品雞IgG的濃度要比和田黑雞大，經(jīng)實(shí)驗(yàn)摸索15ml和田黑雞分離純化后的血漿中IgG含量與5ml普通商品雞分離純化的血漿中IgG的含量相當(dāng)，電泳結(jié)果見圖10。

圖10 普通商品雞（5ml）和田黑雞IgG電泳（15ml）

從圖10可以看出，3倍的和田黑雞血漿所提取的IgG含量與普通商品雞的IgG含量大致相當(dāng)，說明，普通商品雞比和田黑雞有更強(qiáng)的免疫能力，這反映出了疫苗注射對(duì)于商品雞的免疫能力起到了很大的提高作用。

3 討論

從未注射疫苗的和田黑雞與注射疫苗的普通商品雞在淋巴細(xì)胞分離、玫瑰花環(huán)及IgG聚丙烯凝膠電泳的結(jié)果都顯示了疫苗免疫后的普通商品雞比和田黑雞具有更強(qiáng)的免疫力[15,16,17]，疫苗注射對(duì)于提高家禽的免疫力具有顯著的作用。

Barrington[18]認(rèn)為，對(duì)新生幼畜而言，成功的被動(dòng)免疫就是適量、及時(shí)地?cái)z取和吸收IgG，而中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所的劉先菊、楊帆等人就專門研究了虎血清免疫球蛋白的純化及活性鑒定的研究，并建立了一種簡(jiǎn)單快速的分離純化虎血清的方位，為虎血清的IgG二級(jí)抗體的制備提供了高純度、活性好的抗體疫原[19]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)豬瘟病毒(HCV)與牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)同為黃病毒科、瘟病毒屬成員，兩者在基因結(jié)構(gòu)和抗原性上有很高的同源性，具有共同的可溶性抗原，因此，可以產(chǎn)生交叉免疫保護(hù)作用，馮彥軍等[20]、劉亞剛等[21]長(zhǎng)期、多次的實(shí)驗(yàn)證明了用豬瘟弱毒苗預(yù)防牛病毒性腹瀉黏膜病是安全有效的，所以，選擇豬瘟弱毒苗來免疫犢奶牛具有顯著效果，這都給我們?cè)谝院蟮娘曫B(yǎng)家禽過程中通過合理的飼喂管理和通過免疫注射的方法提高家禽的免疫力提供了重要的參考依據(jù)。國(guó)外的許多學(xué)者證明了免疫增強(qiáng)物質(zhì)對(duì)提高動(dòng)物體免疫力的重要性，在以后的研究過程中，要加強(qiáng)疫苗與免疫增強(qiáng)劑的研究，以促進(jìn)我國(guó)家禽養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康穩(wěn)定的發(fā)展，在滿足人們對(duì)健康飲食的要求的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)家禽市場(chǎng)的可持續(xù)發(fā)展和經(jīng)濟(jì)效益的最大化。

[1]Isolauri E,Rautava S,Kalliomaki M.Food allergy in irritable bowel syndrome:new facts and old fallacies[J].Gut,2004,53(10):1391-1393.

[2]王永山.抗雞IgG單克隆抗體的研究[J].獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1989,9(2):109～113.

[3]楊宗照,華榮虹,張書霞,等.鴨IgG的提取方法的比較試驗(yàn)[J],中國(guó)獸醫(yī)科技,2001,31(4)：26-27.

[4]Millichap JG,Yee MM.The diet factor in pediatric and adolescent migraine[J].Pediatr Neurol,2003,28 (1):9-15.

[5]趙明,孫文東,努爾·波拉提,等.孕血清中早孕因子的分離純化[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2001,32(2):129-133.

[6]劉曉宇,孫文東,袁武梅,楊梅,等.孕婦血清中早孕因子的分離與純化[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2005,28(4): 315-317.

[7]徐貴卿.利用玫瑰花環(huán)試驗(yàn)對(duì)雞外周血液T,B淋巴細(xì)胞的檢測(cè)[J].畜牧與獸醫(yī),1984，4:160～162.

[8]舒文祥.雞血清IgG純化方法研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(25):7835～7837.

[9]王廷華.蛋白質(zhì)理論與技術(shù)[M].北京:科學(xué)出版社, 2005,3:96～107.

[10]Jain RI,F Fais,S Kaplan S,et a1.Ig H and L chain variable region gene sequence analyses of twelve synovial tissue derived B cell lines producing IgA,IgG,and IgM rheumatoid factors structure/function comparisons of antigenic specificity,V gene sequence,and Ig isotype[J]. Autoimmunity,1995,22(4):229～243.

[11]明道緒.生物統(tǒng)計(jì)附試驗(yàn)設(shè)計(jì)[M].第三版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2002,6:84～87.

[12]王永山.抗雞IgG單克隆抗體的研究[J].獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1989,9(2):109～113.

[13]顧有為,劉艷慧,陳會(huì)良,等.免疫球蛋白分離提取方法及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)科技信息, 2004，12:12-14.

[14]梅承君，康相濤，孫桂榮．對(duì)固始雞與安卡雞F2資源群體血液生化指標(biāo)的研究[J]．江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，29(2):257-261

[15]Rajpal S Kashyap,Shweta H Morey,et al,Detection of viral antigen,IgM and IgG antibodies in cerebrospinal fluid of chikungunya patients neurological complications[J].Kashyap,et al. Cerebrospinal Research,2012,12(7):1-6.

[16]McConnell,Michelle A,et al.A comparison of IgG and IgG activity in an early milk concentrate from non immunized cows and a milk from hyperimmunised animals[J].Food Research International,2001,34:255-261.

[17]Alexander I,Taylor,Gould,Brian J.Sutton,and Rosaleen,et a1.Avian IgY binds to a monocyte receptor with IgG like Kinetic Despite an IgE-like Structre[J].Joural of biological chemistry, 2008,283(24):16384-16390.

[18]Barrington G M,Parish S M,Garry F B. Immunodeficiency in south American camels[J]. Journal of Camel Practice and Research,1999,6 (2):185-190.

[19]劉先菊,楊帆,林樹柱,等.虎血清免疫球蛋白(IgG)的純化及純度、活性鑒定[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2007,17(11)：637-640.

[20]馮彥君.豬瘟兔化弱毒對(duì)牛病毒性腹瀉-黏膜病的防治作用[J].中國(guó)奶牛,1995,1:39-40.

[21]劉亞剛,殷中瓊,劉世貴,等.豬瘟弱毒苗預(yù)防牛病毒性腹瀉/粘膜病的短期安全性與微量中和試驗(yàn)[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào),2003,40(5):30-32.

S858.312.4

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1673-1085（2017）06-0008-07和田黑雞（尼雅型）是民豐縣一種古老、珍貴和獨(dú)特的地方家禽品種，也是新疆高寒地區(qū)農(nóng)牧民養(yǎng)殖的主體家禽，肉質(zhì)極佳，鮮嫩可口，隨著其市場(chǎng)價(jià)值的遞增，對(duì)和田黑雞所進(jìn)行的研究也越來越多，具有抗逆抗病性強(qiáng)、耐粗飼、抗高溫、遺傳性穩(wěn)定、飼料報(bào)酬高、經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值高的特點(diǎn)，且一年四季均有就巢性，并未與其他雞種雜交，具有原始生態(tài)條件和品種的特殊性能，具有較高的綠色價(jià)值，是非常珍貴的保健食品之一，并且是優(yōu)良的肉蛋兼用型地方品種,但和田地區(qū)大部分的養(yǎng)殖戶因其實(shí)用價(jià)值，都未對(duì)其進(jìn)行疫苗注射，并且極為反對(duì)對(duì)和田黑雞進(jìn)行疫苗免疫，這就造成了和田黑雞普遍免疫力低下、抗病力差、死亡率高的現(xiàn)象，極大地影響了和田黑雞的商品價(jià)值及市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益，對(duì)和田黑雞的大規(guī)模和持續(xù)性養(yǎng)殖也產(chǎn)生了極大的阻礙作用。目前關(guān)于和田黑雞的研究資料甚少，尤其是關(guān)于疫苗免疫對(duì)于和田黑雞免疫力影響研究的文章甚少，本文旨在通過對(duì)未注射疫苗的和田黑雞和注射疫苗的商品雞的免疫效果進(jìn)行對(duì)照，為和田黑雞疫苗免疫的推廣提供切實(shí)可靠的參考依據(jù)。

2017-05-06

王娟娟（1986-），女，漢族，新疆吐魯番人，現(xiàn)學(xué)在讀博士，專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖，郵箱：wangjuanjuand10@163.com。

*通訊作者：李蓮瑞（1968-），女，漢族，教授，博士，新疆庫爾勒人,研究方向：動(dòng)物基因工程，電子郵箱：lilianrui51@163.com。