韓 琪 范姝瓊 張子臻 沈丹平 劉佳驊 陳奕寬 韓虎林 付?；?蘇欣瑩 殷曉璐 倪醒之#

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院胃腸外科1(200127) 阿斯利康投資(中國)有限公司2

·論 著·

Bcl-2基因擴(kuò)增和蛋白表達(dá)與原發(fā)性胃腸道彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤臨床病理特征和免疫表型的關(guān)系

韓 琪1*范姝瓊2*張子臻1沈丹平1劉佳驊1陳奕寬1韓虎林2付海花2蘇欣瑩2殷曉璐2倪醒之1#

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院胃腸外科1(200127) 阿斯利康投資(中國)有限公司2

背景：Bcl-2基因轉(zhuǎn)錄異常與結(jié)內(nèi)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)關(guān)系密切，對Bcl-2與原發(fā)性胃腸道DLBCL(PGI-DLBCL)的關(guān)系則缺乏充分研究。目的：探討PGI-DLBCL中Bcl-2基因擴(kuò)增和蛋白表達(dá)與腫瘤臨床病理特征、免疫表型和預(yù)后的關(guān)系。方法：采集136例手術(shù)治療PGI-DLBCL患者的臨床資料，電話隨訪生存信息。以熒光原位雜交技術(shù)檢測腫瘤組織Bcl-2基因擴(kuò)增，免疫組化法檢測Bcl-2蛋白表達(dá)，分析兩者與腫瘤臨床病理特征、免疫表型和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：136例患者中，33例(24.3%)Bcl-2基因擴(kuò)增陽性，90例(66.2%)Bcl-2蛋白表達(dá)陽性；基因擴(kuò)增與腫瘤原發(fā)部位、Ann Arbor分期、血清乳酸脫氫酶水平、B癥狀、國際預(yù)后指數(shù)(IPI)評分相關(guān)(P<0.05)，蛋白表達(dá)與腫瘤原發(fā)部位和免疫表型相關(guān)(P<0.05)。Bcl-2基因擴(kuò)增陽性患者和免疫表型為非GCB型的Bcl-2蛋白表達(dá)陽性患者5年總生存率(OS)分別顯著低于相應(yīng)陰性患者(41.5%對71.5%,P<0.05;54.6%對84.6%,P<0.05)。Bcl-2基因擴(kuò)增或蛋白表達(dá)陽性患者中，CHOP化療的5年OS顯著低于利妥昔單抗聯(lián)合CHOP化療(48.6%對80.3%,P<0.05;66.4%對83.4%,P<0.05)。結(jié)論：檢測Bcl-2基因擴(kuò)增對PGI-DLBCL的預(yù)后判斷具有重要意義，檢出Bcl-2基因擴(kuò)增者預(yù)后較差。非GCB型PGI-DLBCL中，Bcl-2蛋白表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)。利妥昔單抗可提高Bcl-2基因擴(kuò)增或蛋白表達(dá)陽性患者的生存率。

胃腸腫瘤； 淋巴瘤，大B細(xì)胞，彌漫性； 免疫表型分型； 預(yù)后

原發(fā)性胃腸道彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(primary gastrointestinal diffuse large B-cell lymphoma,PGI-DLBCL)是胃腸道惡性淋巴瘤中最常見的病理類型，與其他淋巴瘤或胃腸道惡性腫瘤在臨床特征等方面具有相似性，早期診斷困難，誤診率較高。不同免疫表型PGI-DLBCL的預(yù)后差異較大[1-2]，部分患者腫瘤侵襲性高，對常規(guī)化療不敏感，預(yù)后較差。B細(xì)胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)基因具有細(xì)胞凋亡抑制作用，可通過延長細(xì)胞生存、阻止細(xì)胞凋亡而使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，對正常B細(xì)胞的發(fā)育、分化亦起重要作用。研究證實(shí)Bcl-2基因轉(zhuǎn)錄 異常與結(jié)內(nèi)DLBCL關(guān)系密切[3-4]，而在PGI-DLBCL中，Bcl-2與腫瘤間的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。本研究通過檢測PGI-DLBCL中的Bcl-2基因擴(kuò)增、蛋白表達(dá)并分析其與腫瘤臨床病理特征、免疫表型和預(yù)后的關(guān)系，為PGI-DLBCL的預(yù)后評估和靶向治療提供一定的理論依據(jù)。

對象與方法

一、研究對象

納入2001年6月—2015年12月在上海仁濟(jì)醫(yī)院胃腸外科接受手術(shù)治療的PGI-DLBCL患者136例。納入條件：①無其他腫瘤病史、免疫系統(tǒng)疾病史和器官移植史；②原發(fā)性DLBCL，排除復(fù)發(fā)病例；③術(shù)前未接受放化療；④切片經(jīng)病理醫(yī)師復(fù)核，符合Dawson提出的原發(fā)性胃腸道淋巴瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)，DLBCL診斷標(biāo)準(zhǔn)參照WHO“造血和淋巴組織腫瘤性疾病”新分類(2016)；⑤臨床資料完整。

二、主要試劑

Bcl-2 SpectrumRed探針(Enzo Life Sciences,Inc.)；CEP8 SpectrumGreen探針(Vysis,Abbott Labor-atories)；DAPI復(fù)染劑(Vector Laboratories)；小鼠抗人Bcl-2單克隆抗體、EnVison+/HRP(小鼠)(Dako,Agilent Technologies)。

三、方法

1.熒光原位雜交(FISH)檢測Bcl-2基因擴(kuò)增：此步驟中FISH探針由兩部分組成，CEP8探針以SpectrumGreen標(biāo)記，為綠色熒光；Bcl-2基因特異性位點(diǎn)探針以SpectrumRed標(biāo)記，為紅色熒光。3 μm厚腫瘤組織切片56 ℃烤片過夜，二甲苯脫蠟，乙醇脫水，經(jīng)蛋白酶處理后滴加探針混合液，79 ℃變性6 min，37 ℃雜交48 h，去除蓋玻片，75.5 ℃雜交后洗液(0.3% NP40/23 SSC)和室溫雜交后洗液(23 SSC)分別洗滌2 min以洗去多余的探針混合液，DAPI復(fù)染細(xì)胞核并封固，在熒光顯微鏡下分別經(jīng)紅色、綠色和藍(lán)色濾光片捕獲不同熒光。每例隨機(jī)選擇50個(gè)大小一致、邊界完整、DAPI染色均一、無重疊的細(xì)胞核進(jìn)行觀察。細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)3個(gè)或3個(gè)以上紅色信號判定為Bcl-2基因擴(kuò)增[5]。

2.免疫組化染色檢測Bcl-2蛋白表達(dá)：采用EnVision二步法。4 μm厚腫瘤組織切片二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，高溫高壓抗原修復(fù)，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，滴加小鼠抗人Bcl-2單克隆抗體，室溫孵育60 min，滴加二抗EnVison+/HRP(小鼠)，37 ℃孵育30 min，DAB顯色0～15 min，光學(xué)顯微鏡下觀察。陽性細(xì)胞數(shù)≤25%判定為Bcl-2蛋白表達(dá)陰性，>25%判定為Bcl-2蛋白表達(dá)陽性[5]。

3.臨床資料采集和隨訪：通過查閱病例采集136例患者的相關(guān)臨床病理資料，包括性別、年齡、腫瘤 原發(fā)部位、Ann Arbor分期、血清乳酸脫氫酶(LDH)水平、有無B癥狀、國際預(yù)后指數(shù)(International Prognostic Index,IPI)評分、免疫表型[生發(fā)中心B細(xì)胞樣(germinal center B cell-like,GCB)型和非GCB型]和治療方案[6-8]。全部病例以電話形式進(jìn)行隨訪，截止時(shí)間為2016年5月30日，隨訪內(nèi)容包括一般狀況和近期復(fù)查情況。生存時(shí)間定義為手術(shù)治療日至末次隨訪時(shí)間或死亡時(shí)間，以月為單位。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本報(bào)訊繼廣東、廣西、云南之后，四川成為柑橘種植新的風(fēng)口。據(jù)悉，短短3年時(shí)間，四川省柑橘擴(kuò)種面積高達(dá)200萬畝，并保持每年60余萬畝的增速，2017年四川柑橘種植面積突破了600萬畝。但是在四川柑橘種植業(yè)繁榮發(fā)展的背后，也隱藏不少產(chǎn)區(qū)痛點(diǎn)問題，如因長期不合理施肥而導(dǎo)致的土壤酸化和土壤板結(jié)，因施肥理念較為落后而導(dǎo)致肥料利用率過低、產(chǎn)量大小年等等。這些問題不僅僅影響著廣大種植戶的收益，更是制約著整個(gè)四川柑橘產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

結(jié) 果

一、一般情況

136例 PGI-DLBCL患者中男性82例，女性54例，男女比例1.52∶1，年齡18～86歲，中位年齡62歲，<60歲58例，≥60歲78例。隨訪時(shí)間1～174個(gè)月，平均生存時(shí)間(52.3±41.3)個(gè)月，中位生存時(shí)間41.0個(gè)月。隨訪期內(nèi)87例(64.0%)患者存活，49 例(36.0%)死亡，3年總生存率(overall survival,OS)為72.2%，5年OS為 64.5%。

胃DLBCL 82例(60.3%)，其中胃體45例，胃竇25例，賁門5例，彌漫性5例，多發(fā)病灶2例；腸DLBCL 54例(39.7%)，其中回盲部22例，小腸14例，升結(jié)腸13例，乙狀結(jié)腸1例，多發(fā)病灶4例。IPI評分0～2分即低/低中危84例(61.8%)，3～5分即中高/高危52例(38.2%)。92例(67.6%)患者術(shù)后接受化療，44例(32.4%)術(shù)后未接受化療，5年OS分別為78.4%和35.4%；術(shù)后化療者中50例(54.3%)采用CHOP(環(huán)磷酰胺、阿霉素、長春新堿、甲潑尼龍)方案化療，42例(45.7%)采用利妥昔單抗(rituximab)聯(lián)合CHOP(R-CHOP)方案化療，5 年OS分別為74.1%和84.7%。

二、Bcl-2基因擴(kuò)增情況及其與PGI-DLBCL臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

136例患者中33例(24.3%)Bcl-2基因擴(kuò)增陽性，103例(75.7%)陰性(圖1A、1B)。33例基因擴(kuò)增陽性者中，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性31例(93.9%)，陰性2例(6.1%)；103例基因擴(kuò)增陰性者中，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性59例(57.3%)，陰性44例(42.7%)。Bcl-2基因擴(kuò)增與蛋白表達(dá)之間存在相關(guān)性(χ2=15.005,P=0.004)。

χ2檢驗(yàn)顯示，Bcl-2基因擴(kuò)增陽性與腫瘤原發(fā)部位、Ann Arbor分期、血清LDH水平、B癥狀、IPI評分之間存在相關(guān)性(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤免疫表型無關(guān)(P>0.05)。原發(fā)于腸道、Ann Arbor Ⅲ-Ⅳ期、血清LDH升高、有B癥狀、IPI評分3～5分的PGI-DLBCL，Bcl-2基因擴(kuò)增陽性率分別顯著高于原發(fā)于胃、Ann ArborⅠ-Ⅱ期、LDH正常、無B癥狀和IPI評分0～2分者(表1)。

A：Bcl-2基因擴(kuò)增陽性；B：Bcl-2基因擴(kuò)增陰性；C：Bcl-2蛋白表達(dá)陽性；D：Bcl-2蛋白表達(dá)陰性

圖1 PGI-DLBCL中Bcl-2基因擴(kuò)增(FISH，×400)和蛋白表達(dá)(EnVision二步法，×400)

生存分析顯示，Bcl-2基因擴(kuò)增陽性組平均生存時(shí)間為(36.5±28.7)個(gè)月，中位生存時(shí)間為34.0個(gè)月；陰性組平均生存時(shí)間為(57.3±43.5)個(gè)月，中位生存時(shí)間為48.0個(gè)月。陽性組5年OS顯著低于陰性組(41.5%對71.5%,P=0.000 4)(圖2A)。

Bcl-2基因擴(kuò)增陽性患者中，CHOP化療組5年OS顯著低于R-CHOP化療組(48.6%對80.3%,P=0.034 9)(圖2B)；Bcl-2基因擴(kuò)增陰性患者中，CHOP與R-CHOP化療組5年OS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(82.2%對89.3%,P=0.615 7)(圖2C)。

136例患者中90例(66.2%)Bcl-2蛋白表達(dá)陽性，46例(33.8%)陰性(圖1C、1D)。

χ2檢驗(yàn)顯示，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性與腫瘤原發(fā)部位和免疫表型之間存在相關(guān)性(P<0.05)，與性別、年齡、Ann Arbor分期、血清LDH水平、有無B癥狀、IPI評分無關(guān)(P>0.05)。原發(fā)于腸道和非GCB型PGI-DLBCL，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率分別顯著高于原發(fā)于胃和GCB型PGI-DLBCL(表2)。

生存分析顯示，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性組平均生存時(shí)間為(50.2±40.7)個(gè)月，中位生存時(shí)間為40.0個(gè)月；陰性組平均生存時(shí)間為(56.3±42.5)個(gè)月，中位生存時(shí)間為48.0個(gè)月。陽性組5年OS低于陰性組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(61.3%對79.1%,P=0.110 9)(圖3A)。

表1 Bcl-2基因擴(kuò)增與PGI-DLBCL臨床病理特征的關(guān)系

Bcl-2蛋白表達(dá)陽性患者中，CHOP化療組5年OS顯著低于R-CHOP化療組(66.4%對83.4%,P=0.028 7)(圖3B)；Bcl-2蛋白表達(dá)陰性患者中，CHOP與R-CHOP化療組5年OS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(87.4%對90.0%,P=0.868 7)(圖3C)。

進(jìn)一步分析不同免疫表型PGI-DLBCL中Bcl-2蛋白表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。GCB型中，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性與陰性組間5年OS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(84.2%對 75.1%,P=0.720 6)(圖4A)；非GCB型中，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性組5年OS顯著低于陰性組(54.6%對84.6%,P=0.047 6)(圖4B)。

表2 Bcl-2蛋白表達(dá)與PGI-DLBCL臨床病理特征的關(guān)系

圖2 Bcl-2基因擴(kuò)增和化療方案與PGI-DLBCL預(yù)后的關(guān)系

圖3 Bcl-2蛋白表達(dá)和化療方案與PGI-DLBCL預(yù)后的關(guān)系

圖4 不同免疫表型PGI-DLBCL中Bcl-2蛋白表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

討 論

利用基因芯片技術(shù)可將DLBCL根據(jù)基因表達(dá)譜分為3種亞型，分別為GCB型、活化B細(xì)胞樣(activated B cell-like,ABC)型和GCB、ABC同時(shí)低表達(dá)的第3型[9]，其中GCB型預(yù)后較好，ABC型與第3型預(yù)后相似，均明顯差于GCB型。然而基因芯片技術(shù)復(fù)雜、價(jià)格昂貴、對組織標(biāo)本要求較高，導(dǎo)致該分型方法的臨床應(yīng)用受到限制。而Hans等[10]提出的基于免疫組化染色的分型方法系根據(jù)Bcl-6、分化群10(cluster of differentiation 10,CD10)和黑色素瘤相關(guān)抗原1(melanoma-associated antigen 1,Mum-l)表達(dá)將DLBCL分為GCB型和非GCB型，其中非GCB型可能包括基因表達(dá)譜分型中的ABC型和第3型，GCB型預(yù)后優(yōu)于非GCB型。Hans分型與基因表達(dá)譜分型的符合率接近86%，預(yù)后分析結(jié)果亦與之相一致，目前已被廣泛認(rèn)可和使用[1，11-12]。

本組136例PGI-DLBCL患者中24.3%檢測到Bcl-2基因擴(kuò)增，生存分析顯示Bcl-2基因擴(kuò)增陽性患者5年OS顯著低于陰性者(41.5%對71.5%)，表明在PGI-DLBCL中，Bcl-2基因擴(kuò)增與預(yù)后不良密切相關(guān)，與張子臻等[5]的研究結(jié)果一致。同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)Bcl-2基因擴(kuò)增陽性與PGI-DLBCL原發(fā)于腸道、血清LDH水平升高、有B癥狀、Ann Arbor臨床分期較晚和IPI評分中高危相關(guān)。上述結(jié)果表明Bcl-2基因擴(kuò)增是PGI-DLBCL疾病進(jìn)展的重要影響因素，檢測Bcl-2基因擴(kuò)增對PGI-DLBCL的預(yù)后判斷具有重要意義，與國內(nèi)研究提出的Bcl-2基因擴(kuò)增在結(jié)外DLBCL中具有預(yù)后判斷價(jià)值相一致[4]。

盡管本研究33例Bcl-2基因擴(kuò)增陽性PGI-DLBCL患者中27例(81.8%)免疫表型為非GCB型，僅6例(18.2%)為GCB型，但相關(guān)性分析顯示Bcl-2基因擴(kuò)增與免疫表型無關(guān)，與本科室2000—2007年間PGI-DLBCL病例的分析結(jié)果一致[5]。蔣會勇等[4]對結(jié)內(nèi)DLBCL的研究同樣顯示，雖然Bcl-2基因擴(kuò)增患者大多為非GCB型，但基因擴(kuò)增與免疫表型無關(guān)。鑒于上述研究樣本量較小，Bcl-2基因擴(kuò)增與胃腸道和結(jié)內(nèi)DLBCL免疫表型的關(guān)系需擴(kuò)大樣本量作進(jìn)一步研究。

本組PGI-DLBCL患者Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率為66.2%。在各項(xiàng)臨床病理參數(shù)中，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性與性別、年齡、血清LDL水平、有無B癥狀、Ann Arbor臨床分期和IPI評分均無關(guān)，而與腫瘤原發(fā)部位和免疫表型顯著相關(guān)，非GCB型Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率顯著高于GCB型(74.0%對47.5%)。無論是在全組PGI-DLBCL還是在GCB型患者中，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性與陰性組間5年OS差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(61.3%對79.1%；84.2%對75.1%)；而在非GCB型患者中，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性組5年OS顯著低于陰性組(54.6%對84.6%)，即Bcl-2蛋白表達(dá)陽性僅在非GCB型患者中與預(yù)后不良相關(guān)。已知Bcl-2是一種抗凋亡蛋白，其在GCB型與非GCB型DLBCL間的差異有助于加深對PGI-DLBCL發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤凋亡生物學(xué)特征的了解。

Bcl-2基因染色體易位是引起DLBCL中Bcl-2蛋白過表達(dá)的原因之一，有研究顯示其與Bcl-2蛋白高表達(dá)呈正相關(guān)[4]。理論上Bcl-2基因擴(kuò)增也可引起B(yǎng)cl-2蛋白高表達(dá)，但本科室前期研究[5]卻未提示兩者間的相關(guān)性。本研究樣本量較前期研究有所增加，分析結(jié)果顯示Bcl-2基因擴(kuò)增與蛋白表達(dá)之間存在相關(guān)性(P=0.004)。然而在90例Bcl-2蛋白表達(dá)陽性患者中，僅31例(34.4%)Bcl-2基因擴(kuò)增陽性，表明Bcl-2蛋白表達(dá)并不完全由Bcl-2基因擴(kuò)增決定，其他如染色體易位、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、上下游調(diào)控信號通路異常、檢測結(jié)果假陽性等因素均可能與Bcl-2蛋白表達(dá)陽性有關(guān)。

既往認(rèn)為手術(shù)切除聯(lián)合術(shù)后放化療是局灶性PGI-DLBCL的首選治療方案[13]。CHOP方案(環(huán)磷酰胺+阿霉素+長春新堿+潑尼松)是近30年來治療DLBCL的標(biāo)準(zhǔn)化療方案，總體緩解率為 80%～90%，完全緩解率為40%～50%，5年OS約30%～40%。隨著免疫學(xué)和分子生物學(xué)研究的深入，利妥昔單抗聯(lián)合CHOP的R-CHOP方案逐漸成為新的治療DLBCL的一線標(biāo)準(zhǔn)治療方案。利妥昔單抗是針對B細(xì)胞CD20抗原的人/鼠嵌合型單克隆抗體，能特異性結(jié)合B細(xì)胞上的CD20抗原，通過抗體依賴性細(xì)胞毒作用和補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用兩種途徑殺傷B細(xì)胞，抑制B細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)B細(xì)胞凋亡，并能提高腫瘤細(xì)胞的化療敏感性[7]。利妥昔單抗可下調(diào)Bcl-2表達(dá)，從而增加caspase酶原降解活性產(chǎn)物和促凋亡蛋白Bax表達(dá)，加速腫瘤細(xì)胞凋亡，改善患者預(yù)后。本研究生存分析顯示，Bcl-2基因擴(kuò)增/蛋白表達(dá)陽性患者中，接受R-CHOP方案治療者的預(yù)后顯著優(yōu)于接受CHOP方案治療者，而在Bcl-2基因擴(kuò)增/蛋白表達(dá)陰性患者中，兩種方案的預(yù)后無明顯差異，表明利妥昔單抗可改善Bcl-2基因擴(kuò)增/蛋白表達(dá)陽性患者的生存率。因此，臨床上可通過FISH或免疫組化方法檢測Bcl-2基因擴(kuò)增或蛋白表達(dá)以指導(dǎo)PGI-DLBCL的化療用藥。

綜上所述，檢測Bcl-2基因擴(kuò)增對PGI-DLBCL的預(yù)后判斷具有重要意義，檢出Bcl-2基因擴(kuò)增者預(yù)后較差。Bcl-2基因擴(kuò)增與蛋白表達(dá)相關(guān)，但蛋白表達(dá)并不完全由基因擴(kuò)增決定。Bcl-2蛋白表達(dá)參與了非GCB型PGI-DLBCL的發(fā)生、發(fā)展，并與預(yù)后不良相關(guān)。利妥昔單抗可提高Bcl-2基因擴(kuò)增或蛋白表達(dá)陽性患者的生存率，臨床上可通過FISH或免疫組化方法檢測Bcl-2基因擴(kuò)增或蛋白情況，對PGI-DLBCL患者進(jìn)行預(yù)后評估并指導(dǎo)靶向治療。

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(2017-01-13收稿；2017-02-07修回)

Bcl-2 Gene Amplification and Protein Expression and Their Relationship with Clinicopathological Characteristics and Immunophenotype of Primary Gastrointestinal Diffuse Large B-cell Lymphoma

HANQi1,FANShuqiong2,ZHANGZizhen1,SHENDanping1,LIUJiahua1,CHENYikuan1,HANHulin2,FUHaihua2,SUXinying2,YINXiaolu2,NIXingzhi1.

1DepartmentofGastrointestinalSurgery,RenjiHospital,SchoolofMedicine,ShanghaiJiaoTongUniversity,Shanghai(200127);2AstraZenecaR&D,Shanghai

NI Xingzhi,Email:georgeniwjc@163.com

Gastrointestinal Neoplasms; Lymphoma,Large B-Cell,Diffuse; Immunophenotyping; Prognosis

10.3969/j.issn.1008-7125.2017.05.003

*本文共同第一作者：韓琪，Email:qq110hq@163.com；范姝瓊，Email:Joan.Fan@astrazeneca.com

#本文通信作者，Email:georgeniwjc@163.com

Background:Aberrant Bcl-2 transcription is closely related with nodal diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL),however,the relationship between Bcl-2 and primary gastrointestinal DLBCL (PGI-DLBCL) was not fully studied.Aims:To investigate the relationship between Bcl-2 gene amplification and protein expression and clinicopathological characteristics,immunophenotype and prognosis of PGI-DLBCL.Methods:Clinical data was collected from 136 PGI-DLBCL patients receiving surgical treatment,and a telephone interview was conducted for survival information.Bcl-2 gene amplification and protein expression in tumor tissue were determined by fluorescenceinsituhybridization and immuno-histochemistry,respectively,and relationships between Bcl-2 and clinicopathological characteristics,immunophenotype and prognosis of PGI-DLBCL were analyzed.Results:Among 136 PGI-DLBCL patients,33 (24.3%) showing gene amplification and 90 (66.2%) showing protein expression of Bcl-2;gene amplification was correlated with primary tumor location,Ann Arbor stage,serum lactate dehydrogenase level,B symptom and International Prognostic Index (IPI) score (P<0.05),while protein expression was correlated with primary tumor location and immunophenotype (P<0.05).5-year overall survival (OS) in patients positive for Bcl-2 gene amplification and patients with non-GCB immunophenotype and positive for Bcl-2 protein expression were inferior to those negative ones (41.5%vs.71.5%,P<0.05;54.6%vs.84.6%,P<0.05).In Bcl-2 gene amplification or protein expression positive patients,5-year OS of CHOP chemotherapy was inferior to that of rituximab combined with CHOP chemotherapy (48.6%vs.80.3%,P<0.05;66.4%vs.83.4%,P<0.05).Conclusions:Detection of Bcl-2 gene amplification is useful for prediction of prognosis in PGI-DLBCL.Both patients with Bcl-2 gene amplification and non-GCB patients with Bcl-2 protein expression have a poorer prognosis.Rituximab may improve the prognosis in patients with Bcl-2 gene amplification or protein expression.