吳美富 王燕(通訊作者)

100191北京大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院

水通道蛋白1在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達情況分析

吳美富 王燕(通訊作者)

100191北京大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院

目的：探討妊娠期高血壓患者胎盤組織中水通道蛋白1的表達情況。方法：收治妊娠期高血壓患者60例為研究組，以同期正常足月剖宮產(chǎn)孕婦60例為對照組。結(jié)果：各組孕婦胎盤組織中均有AQP1的表達；AQP1陽性表達率：重度子癇前期組＞輕度子癇前期組＞妊娠期高血壓組＞對照組(P＜0.05)。結(jié)論：AQP1在胎盤組織中的表達與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生及病情輕重程度有關(guān)。

水通道蛋白1；胎盤；高血壓；妊娠期

妊娠期高血壓是妊娠期特有的并發(fā)癥，常發(fā)生在妊娠20周后，孕婦出現(xiàn)高血壓、蛋白尿、水腫，嚴(yán)重者出現(xiàn)以溶血(H)、肝酶升高(EL)和血小板減少(LP)為特點的HELLP綜合征，這是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒死亡的重要原因[1]。水通道蛋白1(AQP1)是水通道蛋白(AQPs)家族中唯一在內(nèi)皮細(xì)胞表達的蛋白，參與跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運水。有學(xué)者認(rèn)為胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞、合體滋養(yǎng)細(xì)胞、胎膜的羊膜上皮細(xì)胞及平滑絨毛膜的滋養(yǎng)細(xì)胞是表達AQP1的主要細(xì)胞[2]。劉慧姝等運用RT-PCR法、Western印跡和免疫組織化學(xué)方法檢測的結(jié)果與上述結(jié)果一致[3]，并提示AQP1在胎盤和胎膜中的表達對母胎液體交換及羊水平衡發(fā)揮重要的作用。目前關(guān)于AQP1與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)性研究，國內(nèi)外只有少量報道。Aralla等認(rèn)為AQP1在胎盤和胎膜組織中的表達水平可能是影響妊娠期高血壓病情的因素之一[4]，可能在妊娠期高血壓的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮作用。本研究通過分析、比較妊娠期高血壓產(chǎn)婦與正常妊娠產(chǎn)婦的胎盤組織中AQP1的表達情況，探討其與妊娠期高血壓疾病的關(guān)系。

資料與方法

納入標(biāo)準(zhǔn)：單胎、孕婦無煙酒嗜好、無其他妊娠合并癥(研究組患妊娠期高血壓疾病)。排除孕前急慢性病史者。且此次妊娠無藥物服用史及縮宮素引產(chǎn)史。研究組：選取2013年1月-2014年1月在北京大興部分醫(yī)院產(chǎn)科定期產(chǎn)檢檢出患有妊娠期高血壓疾病的孕婦，且最終在該院產(chǎn)科住院，經(jīng)解痙治療后病情控制仍不滿意，最終行剖宮產(chǎn)分娩的產(chǎn)婦60例作為研究組，其中妊娠期高血壓21例、重度子癇前期20例、輕度子癇前期19例。依據(jù)《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版中妊娠期高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期高血壓：血壓≥140/90 mmHg，妊娠期首次出現(xiàn)，并于產(chǎn)后12周血壓恢復(fù)正常；尿蛋白(-)；可伴有上腹部不適或血小板減少，產(chǎn)后方可確診。②重度子癇前期：血壓≥160/110 mmHg；尿蛋白≥2.0 g/24 h或(++)；血肌酐＞106 μmol/L；血小板＜100×109/L；微血管病性溶血(血LDH升高)；血清ALT或AST升高；持續(xù)頭痛、其他腦神經(jīng)或視覺障礙；持續(xù)性上腹不適。③輕度子癇前期：孕20周后出現(xiàn)血壓≥140/90 mmHg；尿蛋白≥300 mg/24 h或(+)；可伴有上腹不適、頭痛等癥狀。對照組：選取同期正常足月妊娠，因頭盆不稱、漏斗骨盆、胎兒窘迫等因素行剖宮產(chǎn)分娩的產(chǎn)婦，并經(jīng)產(chǎn)婦和家屬知情同意，納入60例為對照組。

標(biāo)本采集：在產(chǎn)婦胎盤娩出后30 min內(nèi)剪取胎盤組織，應(yīng)避開梗死、出血及鈣化區(qū)，生理鹽水漂洗去除血液，10%的中性福爾馬林固定24～48 h以上，石蠟包埋用于免疫組化檢測。

實驗方法：采用免疫組化SP法對胎盤組織中的AQP1的表達進行檢測，一抗為濃縮型兔抗人AQP1多克隆抗體。切片脫蠟入水，組織抗原微波修復(fù)，先中高火7 min，停3 min，再中高火7 min，停5 min；PBS 5 min，2次；3%H2O2阻斷過氧化物酶活性10 min；PBS 3 min，3次；用正常山羊血清于室溫下孵育10 min；相應(yīng)的一抗4℃過夜，PBS 5 min，3次；生物素標(biāo)記二抗室溫孵育30 min，PBS 3 min，3次；DAB顯色，顯微鏡觀察，水洗終止；蘇木素復(fù)染1 min；梯度酒精脫水各3 min；透明二甲苯各5 min；中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。

結(jié)果判定：評分標(biāo)準(zhǔn)參照Fromowitz等的綜合計分法進行分析，細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)無著色或與背景顏色一致的為陰性細(xì)胞，被染呈棕黃色為陽性細(xì)胞。染色強度評分標(biāo)準(zhǔn)：深棕褐色3分，棕褐色2分，淺棕褐色1分，不著色0分。每張切片隨機觀察10個視野，高倍鏡下計數(shù)細(xì)胞總數(shù)和陽性細(xì)胞數(shù)。陽性細(xì)胞數(shù)：＞50%為3分，26%～49%為2分，6%～25%為1分，＜5%為0分。陽性細(xì)胞數(shù)和強度相加得出的結(jié)果：0～1分為(-)，2.0分為(+)，3～4分為(++)，5～6分為(+++)，將(+)、(++)、(+++)視為陽性。

統(tǒng)計學(xué)方法：本研究所獲得的數(shù)據(jù)資料采用SPSS 13.0軟件進行處理和分析。用(±s)描述研究對象的年齡、孕期、胎次，采用趨勢χ2檢驗比較對照組、妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組4組中AQP1的表達陽性比例是否呈線性變化。檢驗水準(zhǔn)為α=0.05，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 兩組研究對象一般臨床資料比較(±s)

表1 兩組研究對象一般臨床資料比較(±s)

項目對照組研究組FP例數(shù)6060年齡(歲)27.7±2.728.5±2.40.6390.108孕期(d)268.0±10.2259.0±9.52.2600.135產(chǎn)次1.57±0.71.63±0.70.8200.620

表2 兩組之間AQP1陽性率表達情況的比較(n)

結(jié)果

一般情況：研究組平均年齡(28.5± 2.4)歲，平均孕期(259.0±9.5)d，平均孕次(1.63±0.7)。對照組平均年齡(27.7± 2.7)歲，平均孕期(268.0±10.2)d，平均孕次(1.57±0.7)。比較兩組產(chǎn)婦的年齡、孕期和產(chǎn)次，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

AQP1分布及表達情況：AQP1主要分布于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，在胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中表達。且正常產(chǎn)婦胎盤組織的胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞正常，血管及毛細(xì)血管部分內(nèi)皮細(xì)胞的胞膜及胞質(zhì)中可見淺棕黃色染色，而重度子癇前期的胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞增生，血管及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞膜和胞質(zhì)呈深棕黃染色，見圖1和圖2。

研究組AQP1的陽性表達率高于對照組。進一步分析表明，各子組胎盤組織中AQP1的陽性表達率：重度子癇前期組＞輕度子癇前期組＞妊娠期高血壓組＞對照組，χ2=27.233，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

圖1 AQP1在正常產(chǎn)婦胎盤組織中的表達(SP染色×200)

圖2 AQP1在重度子癇前期產(chǎn)婦胎盤組織中的表達(SP染色×200)

討論

胎盤是維持妊娠和促進胎兒生長發(fā)育的重要器官，能夠分泌多種激素，進行母體和胎體之間的物質(zhì)交換。而構(gòu)成胎盤的主要細(xì)胞是滋養(yǎng)細(xì)胞，維持胎盤的正常妊娠功能。胎盤功能異常會引發(fā)自然流產(chǎn)、妊娠期高血壓及胎兒生長受限等[5]。妊娠期高血壓在產(chǎn)婦分娩后癥狀消失，提示胎盤與妊娠期高血壓存在關(guān)聯(lián)，但目前其病理機制尚不清楚，有待于進一步研究。

AQPs是細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)囊泡中具有透水功能的蛋白分子，其表達或功能不僅對妊娠期母胎之間的液體交換及羊水的生成和代謝密切相關(guān)水分子的傳輸產(chǎn)生影響，而且許多疾病如高血壓、心腎功能衰竭、腦水腫、肺水腫及視網(wǎng)膜水腫等均可能與AQPs功能異?；蛘{(diào)節(jié)失控有關(guān)。

目前共發(fā)現(xiàn)了13種AQPs，即AQP0-AQP12[6，7]；在胎盤組織中已發(fā)現(xiàn)有表達的AQPs包括：AQP1、3、4、8、9，但是胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞只能表達AQP1。

本研究采用形同的方式(免疫組化法)檢測兩組孕婦妊娠期AQP1的表達水平，檢測結(jié)果顯示，與正常妊娠孕婦組相比，妊娠期高血壓組孕婦胎盤組織具有更高的AQP1陽性表達率，并且在研究組的3個子組中，發(fā)現(xiàn)隨著病情的加重，AQP1的陽性表達率呈逐漸增強的趨勢，重度子癇前期組AQP1的陽性表達率最高，與國內(nèi)學(xué)者Chen等的研究結(jié)果相一致[8]；并同時應(yīng)用趨勢χ2檢驗，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。說明AQP1在胎盤組織中的表達情況與妊娠期高血壓相關(guān)。提示AQP1可能在妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展中起了重要作用。推測可能的發(fā)病機制：①在妊娠期高血壓疾病中，隨著病情的加重，AQP1表達增高，導(dǎo)致胎盤局部組織缺血缺氧，降低胎盤抗凋亡基因表達，引起滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致胎盤血管生理性重鑄障礙，引發(fā)妊娠期高血壓；②AQP1的表達升高導(dǎo)致血管內(nèi)皮生長因子減少，損傷血管內(nèi)膜完整性，從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長和分化，減少胎盤血管生成，導(dǎo)致胎盤血流灌注不足，血管舒縮因子失衡，引起子宮動脈痙攣，引發(fā)妊娠期高血壓。

綜上所述，妊娠期高血壓患者胎盤組織中AQP1表達異常，可能與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，但有待于進一步深入的研究證實，以探索妊娠期高血壓疾病的防治新方法，這對減少圍產(chǎn)期母兒死亡有重要意義。

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Clinical analysis of AQP1 expression in placenta of the patients with hypertensive disorder complicating pregnancy

Wu Meifu,Wang Yan(Corresponding author)
School of Public Health of Peking University 100191

Objective:To investigate the expression of aquaporin 1(AQP1)in placenta tissue from the patients with different subsets of gestational hypertension.Methods:60 pregnant women who were diagnosed as gestational hypertension were enrolled in the study group,and 60 cases of the normal full-term cesarean section at the same period as the control group.Results:The expression of AQP1 in placental tissue of pregnant women in each group;the positive rate of AQP1 expression:the severe preeclampsia group＞mild preeclampsia group＞gestational hypertension group＞the control group(P＜0.05).Conclusion:The expression of AQP1 in placenta related to the incidence and severity of hypertensive disorder complicating pregnancy.

Aquaporin 1;Placenta;Hypertension;Gestation period

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.13.54