熊永嶗　楊桂艷　楊嫦玉　吳重聰　周雯雯

【摘要】 目的：探討阿司匹林預(yù)處理對(duì)多囊卵巢綜合征行試管嬰兒（invitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）的療效及其機(jī)制。方法：選取2015年1月-2016年6月在珠海市婦幼保健院生殖中心因多囊卵巢綜合征行試管嬰兒治療的患者119例，采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為研究組（62例）和對(duì)照組（57例）。研究組在IVF-ET治療前給予阿司匹林預(yù)處理，對(duì)照組給予安慰劑治療。觀察比較兩組患者的促性腺激素（Gn）使用時(shí)間、Gn使用劑量、獲卵數(shù)、2PN受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、啟動(dòng)日T淋巴細(xì)胞、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）及IVF-ET結(jié)局。結(jié)果：研究組患者的Gn使用時(shí)間短于對(duì)照組，Gn使用劑量低于對(duì)照組，獲卵數(shù)和優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。研究組患者的啟動(dòng)日T淋巴細(xì)胞、TNF-α和IL-6水平均低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。研究組患者的臨床妊娠率和胚胎種植率均高于對(duì)照組，流產(chǎn)率低于對(duì)照組，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：阿司匹林預(yù)處理對(duì)多囊卵巢綜合征行IVF-ET有積極的臨床意義。

【關(guān)鍵詞】 阿司匹林； 多囊卵巢綜合征； IVF-ET； T淋巴細(xì)胞； 腫瘤壞死因子-α； 白介素-6

Study on the Effect and Mechanism of Aspirin Pretreatment on IVF-ET in Patients with Polycystic Ovary Syndrome/XIONG Yong-lao，YANG Gui-yan，YANG Chang-yu，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（15）：016-019

【Abstract】 Objective：To investigate the effect and mechanism of Aspirin pretreatment on invitro fertilization-embryo transfer （IVF-ET） in polycystic ovary syndrome（PCOS）.Method：From January 2015 to June 2016，in the reproductive center of Maternal and Child Health Care Hospital of Zhuhai，119 patients with polycystic ovary syndrome were treated with IVF-ET and selected，they were divided into research group （62 cases）and control group（57 cases） according to the random number table method.The research group was given Aspirin before IVF-ET treatment，the control group was given placebo.The Gonadotropin（Gn） using time，Gn using dosage，amount of acquired oocytes，high-quality embryos，level of the serum T lymphocytes，TNF-α and IL-6 at the initiation day and clinical results of the two groups were observed and compared.Result：The Gn using time of the research group was shorter than that of the control group，and the dosage of Gn was lower than that of the control group， the amount of the acquired oocytes and high-quality embryos of the research group were all more than those of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The levels of T lymphocytes，TNF-α and IL-6 at the initiation day of the research group were lower than those of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The pregnancy rate and implantation rate of research group were higher than those in control group，the abortion rate was lower than that in control group，but the differences were not statistically significant（P>0.05）.Conclusion：Aspirin pretreatment has positive clinical significance in the treatment of polycystic ovary syndrome with IVF-ET.

【Key words】 Aspirin； Polycystic ovary syndrome； Invitro fertilization-embryo transfer； T lymphocytes； TNF-α； IL-6

First-authors address：Maternal and Children Health Care Hospital of Zhuhai，Zhuhai 519000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.15.005

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是青春期和育齡期婦女的一種常見病，發(fā)病率為5%～10%，無排卵婦女中占75%，多毛婦女可高達(dá)85%以上。臨床表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)、肥胖、不孕、痤瘡，生化檢查表現(xiàn)為高黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、高雄激素和胰島素抵抗。多囊卵巢綜合征發(fā)病機(jī)制不明，由于卵泡發(fā)育異常，長期無排卵，自然妊娠困難需行試管嬰兒（invitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）治療。在IVF-ET治療過程中，多囊卵巢綜合征促排卵過程中常存在卵泡募集障礙和成熟障礙，卵泡易閉鎖，卵子質(zhì)量低，流產(chǎn)率高，是臨床治療過程中的一個(gè)疑難問題。

多囊卵巢綜合征病因及發(fā)病機(jī)制不明，筆者前期的研究表明多囊卵巢綜合征患者體內(nèi)存在慢性炎癥反應(yīng)，多囊卵巢綜合征婦女外周血中炎癥細(xì)胞和炎癥因子明顯升高[1]。多囊卵巢綜合征是由于高胰島素和高LH導(dǎo)致體內(nèi)雄激素過高，導(dǎo)致體內(nèi)和卵泡內(nèi)炎癥因子濃度升高[2]，阻礙卵泡發(fā)育，降低卵子質(zhì)量[3]。目前對(duì)多囊卵巢慢性炎癥治療的報(bào)道較少[4]，且效果不明顯，存在爭議，阿司匹林的抗感染作用可能降低體多囊卵巢綜合征患者體內(nèi)血液和卵泡液中炎癥反應(yīng)，改善多囊卵巢綜合征體內(nèi)激素的平衡，本文主要研究其預(yù)處理對(duì)多囊卵巢綜合征行IVF-ET臨床結(jié)局的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月-2016年6月在珠海市婦幼保健院生殖中心因多囊卵巢綜合征行試管嬰兒治療的患者119例，所有患者年齡20～40歲，診斷參照鹿特丹標(biāo)準(zhǔn)：（1）月經(jīng)紊亂，臨床表現(xiàn)為閉經(jīng)、月經(jīng)稀發(fā)、月經(jīng)頻發(fā)；（2）高雄激素的臨床表現(xiàn)和高雄激素血癥，臨床表現(xiàn)有痤瘡、多毛，血清總睪酮、游離睪酮均高于正常值；（3）卵巢多囊性改變，B超檢查見一側(cè)或雙側(cè)卵巢直徑2～9 mm的卵泡≥12個(gè)。符合上述3項(xiàng)中任何2項(xiàng)者，即可診斷為多囊卵巢綜合征。此外還需排除胃十二指腸潰瘍、凝血功能障礙及盆腔炎性疾病或者輸卵管炎性疾病的患者。采用隨機(jī)數(shù)字表法將所有患者分為研究組和對(duì)照組，其中研究組62例，平均年齡（31.30±3.33）歲；對(duì)照組57例，平均年齡（30.86±3.29）歲。兩組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均知情同意。

1.2 干預(yù)方法 試管嬰兒（invitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）治療采用常規(guī)長方案促排卵治療，在多囊卵巢綜合征患者知情同意的情況下，研究組在降調(diào)節(jié)前15 d開始給予阿司匹林口服，200 mg/次，2次/d，預(yù)防性使用洛賽克（質(zhì)子泵拮抗劑）20 mg，降調(diào)節(jié)15 d后促排卵啟動(dòng)日即停用阿司匹林，前后服用阿司匹林30 d。對(duì)照組給予安慰劑。取卵后第3天移植胚胎，移植后第14天化驗(yàn)血hCG，若hCG陽性則移植后30 d B超檢查妊娠情況。

1.3 評(píng)估與記錄 收集研究組和對(duì)照組患者的促性腺激素（Gn）使用時(shí)間、Gn使用總量、內(nèi)膜厚度以及啟動(dòng)日血液中T淋巴細(xì)胞、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平和IVF-ET獲卵數(shù)、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、臨床妊娠率、種植率、流產(chǎn)率。

1.4 檢測(cè)方法 T淋巴細(xì)胞采用CD3（Dako 公司）標(biāo)記后流式細(xì)胞儀檢測(cè)，TNF-α、IL-6采用ELISA試劑盒（美國BioSource）檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的促排卵情況比較 研究組的Gn使用時(shí)間短于對(duì)照組，Gn使用劑量低于對(duì)照組，獲卵數(shù)和優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；兩組患者的內(nèi)膜厚度、2PN受精率、周期取消率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2 兩組患者的啟動(dòng)日T淋巴細(xì)胞、TNF-α和IL-6比較 研究組患者的啟動(dòng)日T淋巴細(xì)胞、TNF-α和IL-6水平均低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）

2.3 兩組患者的IVF-ET結(jié)局比較 兩組患者的IVF-ET獲卵數(shù)、平均移植胚胎數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；研究組患者的臨床妊娠率和胚胎種植率均高于對(duì)照組，流產(chǎn)率低于對(duì)照組，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）

3 討論

本研究中阿司匹林預(yù)處理可明顯降低血液中T淋巴細(xì)胞的數(shù)目、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）的濃度。多囊卵巢綜合征卵泡發(fā)育存在募集和成熟障礙，卵泡易閉鎖，卵子質(zhì)量低，影響試管嬰兒（invitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）的成功率。在多囊卵巢綜合征卵泡的發(fā)育過程中，多種細(xì)胞和細(xì)胞因子通過旁分泌調(diào)節(jié)卵泡的發(fā)育[5-6]。T淋巴細(xì)胞是一種主要的慢性炎癥細(xì)胞，可以分泌產(chǎn)生淋巴因子，包括TNF-α和IL-6。顆粒細(xì)胞包繞卵子，自分泌和旁分泌大量細(xì)胞因子作用于卵子，其中TNF-α和IL-6是卵泡生長的主要抑制因子。在卵泡生長過程中，TNF-α和IL-6抑制顆粒細(xì)胞的分化，抑制雌二醇和孕激素的分泌[7-8]，促進(jìn)顆粒細(xì)胞的調(diào)亡[9]，導(dǎo)致卵泡閉鎖。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)TNF-α刺激雄激素合成[10]，促進(jìn)胰島素抵抗[11]，最終造成卵細(xì)胞質(zhì)量的下降，降低IVF-ET的妊娠率，增加流產(chǎn)率。已有研究報(bào)道卵泡液中TNF-α與多囊卵巢綜合征IVF-ET妊娠率呈負(fù)相關(guān)[12]。為了提高多囊卵巢綜合征行IVF-ET的妊娠率，臨床上有必要采用阿司匹林預(yù)處理的干預(yù)手段，降低T淋巴細(xì)胞的數(shù)目和顆粒細(xì)胞TNF-α、IL-6的表達(dá)。

本研究結(jié)果顯示，研究組的Gn使用時(shí)間短于對(duì)照組，Gn使用劑量低于對(duì)照組，獲卵數(shù)和優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。因此阿司匹林預(yù)處理有利于多囊卵巢綜合征促排卵過程中卵泡的發(fā)育，可減少患者促排卵藥物的使用時(shí)間，減少促排卵藥物的使用，從而減少患者的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，同時(shí)增加獲卵數(shù)和可移植胚胎數(shù)。

本研究結(jié)果顯示，研究組患者的臨床妊娠率和胚胎種植率均高于對(duì)照組，流產(chǎn)率低于對(duì)照組，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可能與病例數(shù)過少有關(guān)，再者研究組可移植胚胎數(shù)增多，累計(jì)妊娠率理論上應(yīng)該高于對(duì)照組。阿司匹林通過降低血液中T淋巴細(xì)胞數(shù)目[13]，從而降低細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6的表達(dá)[14-16]。在IVF-ET的治療中，阿司匹林預(yù)處理對(duì)正常婦女的妊娠率無明顯影響[17]，但對(duì)于患有自身免疫性疾病的患者行IVF-ET治療，阿司匹林可明顯提高妊娠率，降低流產(chǎn)率[18-20]。自身免疫性疾病的患者本身存在慢性炎癥，體內(nèi)淋巴細(xì)胞和炎癥因子如TNF-α、IL-6明顯升高，因此阿司匹林預(yù)處理通過降低體內(nèi)淋巴細(xì)胞、TNF-α、IL-6，降低血液和卵泡液中的炎癥反應(yīng)，抑制顆粒細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)卵泡發(fā)育，提高卵子質(zhì)量，從而提高自身免疫性疾病的患者IVF-ET的妊娠率。多囊卵巢綜合征患者存在慢性炎癥，因此臨床上可以使用阿司匹林預(yù)處理改善多囊卵巢綜合征行IVF-ET治療妊娠結(jié)局。

綜上所述，多囊卵巢綜合征存在慢性炎癥，這些炎癥細(xì)胞和炎癥因子阻礙卵泡發(fā)育，降低卵子質(zhì)量，繼而降低IVF-ET的妊娠率，增加流產(chǎn)率。阿司匹林預(yù)處理通過降低多囊卵巢綜合征患者體內(nèi)的炎癥反應(yīng)，可減少多囊卵巢綜合征患者行IVF-ET促排卵的時(shí)間，減少促排卵使用的總藥物量，增加獲卵數(shù)、可移植胚胎數(shù)，從而有利于患者的最終妊娠結(jié)局，值得在臨床中推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] Xiong Y L，Liang X Y，Yang X，et al.Low-grade chronic inflammation in the peripheral blood and ovaries of women with polycystic ovarian syndrome[J].European Journal of Obstetrics Gynecology & Reproductive Biology，2011，159（1）：148-150.

[2]陳欣，宋巖，鄧永志，等.慢性炎癥因子參與多囊卵巢綜合征發(fā)病的初步探討[J].中國婦幼保健，2016，31（22）：4635-4636.

[3] Hara S，Takahashi T，Amita M，et al.Pioglitazone counteracts the tumor necrosis factor-α inhibition of follicle-stimulating hormone-induced follicular development and estradiol production in an in vitro mouse preantral follicle culture system[J].Journal of Ovarian Research，2013，6（1）：69.

[4]唐僑飛，吳成勇，楊滿，等.葉酸對(duì)多囊卵巢綜合征患者炎癥因子及糖脂代謝的影響[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2016，13（8）：56-59.

[5]胡艷紅，徐忠芳.多囊卵巢綜合征內(nèi)分泌異常與CD8+CD28+/CD8+CD28-T細(xì)胞平衡的關(guān)系[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2016，13（26）：32-35.

[6] Darbon J M，Oury F，Laredo J，et al.Tumor necrosis factor alpha inhibits follicle-stimulating hormone-induced differentiation in cultured rat ignaling cells[J].Biochem Biophys Res Commun，1989，163（2）：1038-1046.

[7] Sakumoto R，Shibaya M，Okuda K.Tumor necrosis factor-alpha（TNF alpha） inhibits progesterone and estradiol-17beta production from cultured ignaling cells：presence of TNF-alpha receptors in bovine ignaling and theca cells[J].J Reprod Dev，2003，49（6）：441-449.

[8] Adashi E Y，Resnick C E，Packman J N，et al.Cytokine-mediated regulation of ovarian function：tumor necrosis factor alpha inhibits gonadotropin-supported progesterone accumulation by differentiating and luteinized murine ignaling cells[J].Am J Obstet Gynecol，1990，162（4）：889-899.

[9] Asselin E，Xiao C W，Wang Y F，et al.Mammalian follicular development and atresia：role of apoptosia[J].Biol Signals Recep，2000，9（2）：87-89.

[10] Roby K F，Terranova P F.Effects of tumor necrosis factor-alpha in vitro on steroidogenesis of healthy and atretic follicles of the rat： theca as a target[J].Endocrinology，1990，126（5）：2711-2718.

[11] Paolisso G，Rizzo M R，Mazziotti G，et al.Advancing age and insulin resistance： role of plasma tumor necrosis factor alpha[J].Am J Physiol，1998，275（2 Pt 1）：E294-E299.

[12] Lee K S，Joo B S，Na Y J，et al.Relationships between concentrations of tumor necrosis factor-alpha and nitric oxide in follicular fluid and oocyte quality[J].J Assist Reprod Genet，2000，17（4）：222-228.

[13] Sitia G，Aiolfi R，Lucia P D，et al.Antiplatelet therapy prevents hepatocellular carcinoma and improves survival in a mouse model of chronic hepatitis B[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2012，109（32）：2165-2172.

[14] Xu M G，Men L N，Zu Y，et al.Effects of intravenous immunoglobulin and aspirin treatment on the functions of circulating endothelial progenitor cells in children with Kawasaki disease[J].Chinese Journal of Contemporary Pediatrics，2011，13（12）：966-969.

[15] Akyazi I，Eraslan E，Gül?ubuk A，et al.Long-term aspirin pretreatment in the prevention of cerulein-induced acute pancreatitis in rats[J].World Journal of Gastroenterology，2013，19（19）：2894-2903.

[16] Eickmeier O，Seki H，O Haworth，et al.Aspirin-triggered resolvin D1 reduces mucosal inflammation and promotes resolution in a murine model of acute lung injury[J].Mucosal Immunol，2013，6（2）：256-266.

[17] Hanevik H I，F(xiàn)riberg M，Bergh A，et al.Do acetyl salicylic acid and terbutaline in combination increase the probability of a clinical pregnancy in patients undergoing IVF/ICSI[J].Journal of Obstetrics & Gynaecology the Journal of the Institute of Obstetrics & Gynaecology，2012， 32（8）：786-789.

[18] Ying Y，Zhong Y P，Zhou C Q，et al.A retrospective study on IVF outcome in patients with anticardiolipin antibody：effects of methylprednisolone plus low-dose aspirin adjuvant treatment[J].Journal of Reproductive Immunology，2012，94（2）：196-201.

[19] Geva E，Amit A，Lerner-Geva L，et al.Prednisone and aspirin improve pregnancy rate in patients with reproductive failure and autoimmune antibodies：a prospective study[J].Am J Reprod Immunol，2000，43（1）：36-40.

[20]張娛，季靜娟，劉雨生，等.阿司匹林聯(lián)合潑尼松對(duì)抗磷脂抗體陽性者行IVF-ET妊娠結(jié)局的影響[J].國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志，2013，32（3）：162-165.

（收稿日期：2017-04-17） （本文編輯：張爽）