李春麗

(黑龍江省牡丹江市三道林場(chǎng))

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不同處理方式對(duì)白蘚不定芽誘導(dǎo)影響的試驗(yàn)初探

李春麗

(黑龍江省牡丹江市三道林場(chǎng))

本文研究了不同處理方式對(duì)白蘚不定芽誘導(dǎo)的影響，結(jié)果表明，0.1%氯化汞和10%次氯酸鈉兩種滅菌劑的滅菌效果有著明顯地差異，白蘚地下芽的最佳滅菌劑為0.1%氯化汞，滅菌適宜時(shí)間為10min，其滅菌的效果最好，污染率和死亡率均較低。MS培養(yǎng)基中加入NAA、6-BA不同濃度及配比對(duì)白蘚地下芽啟動(dòng)培養(yǎng)的萌發(fā)率影響差異較大，以MS+NAA0.8mg/L+6-BA 0.6mg/L培養(yǎng)基為白蘚地下芽的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

白蘚 滅菌 不定芽誘導(dǎo)

白蘚(Dictamnus dasycarpus Thrcz.)別名八股牛、白羊鮮、羊鮮草、山牡丹、八木籽等，為蕓香科多年生宿根草本[1]。其以干燥根皮入藥，俗稱白鮮皮，具有清熱解毒、祛風(fēng)化濕、止癢等功效[2]，主治皮膚瘙癢、蕁麻疹、黃水瘡、濕疹、肝炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病[3]。在我國(guó)主要產(chǎn)于東北三省、內(nèi)蒙古、河北、江西等地[4]，常生于山坡林緣、疏林灌叢和草甸。隨著白蘚皮需求量的增加，野生資源已滿足不了市場(chǎng)需求，再加上野生白蘚資源不斷遭到破壞，因此白蘚的工廠化育苗和大面積人工栽培的研究尤為重要。本文研究了不同處理方式對(duì)白蘚不定芽誘導(dǎo)的影響，旨在探討其有效的組織培養(yǎng)繁殖方法，建立優(yōu)良的無(wú)性繁殖體系，為白蘚的充分利用和人工栽培提供優(yōu)質(zhì)苗木。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

于5～7月，選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害的白蘚優(yōu)良單株作為試驗(yàn)植株，取優(yōu)良單株的地下幼芽為外植體。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

外植體滅菌方法：將待實(shí)驗(yàn)用的地下芽用自來(lái)水沖洗，并用細(xì)毛刷把表面泥土刷凈，然后置于超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸泡15s，再用無(wú)菌水沖洗2～3次，然后進(jìn)行滅菌。滅菌試驗(yàn)設(shè)計(jì)為：分別采用0.1%氯化汞和10%次氯酸鈉進(jìn)行滅菌，0.1%氯化汞和10%次氯酸鈉滅菌時(shí)間設(shè)置為8min、10min、12min、14min、16min5個(gè)處理。滅菌后用無(wú)菌水沖洗5次，濾紙吸干表面水分，接種于培養(yǎng)基中，每瓶接種一個(gè)外植體，每個(gè)處理接種10瓶，重復(fù)3次，接種一周后觀測(cè)并統(tǒng)計(jì)其污染率。

不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基與方法：以MS為基本培養(yǎng)基添加不同濃度的NAA、6-BA作為不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。將滅菌后的地下芽接種于表1的培養(yǎng)基中，每個(gè)培養(yǎng)基接種20瓶，重復(fù)3次，接種后觀察不定芽的發(fā)生情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同滅菌方法對(duì)白蘚地下芽接種效果的影響

從圖1可以看出，兩種滅菌劑處理對(duì)白蘚地下芽接種的污染率和死亡率的影響有著明顯的差別。用0.1%氯化汞滅菌時(shí)，地下芽的污染率隨著滅菌時(shí)間的增加而明顯地下降，而死亡率隨之逐漸上升。當(dāng)0.1%氯化汞滅菌時(shí)間為8min時(shí)，外植體死亡率最低，但是污染率最高，高達(dá)45.2%；滅菌時(shí)間為10min時(shí)，污染率為20.4%，死亡率為6.5%；當(dāng)滅菌時(shí)間繼續(xù)上升時(shí)，其地下芽死亡率明顯上升，滅菌12min、14min和16min處理的死亡率分別比10min處理增加了15.3%、28.1%和35.6%，而污染率下降并不大。當(dāng)10%次氯酸鈉滅菌時(shí)間為16min時(shí)，污染率最低，但死亡率最高，達(dá)18.7%；當(dāng)滅菌時(shí)間為14min時(shí)，污染率和死亡率與其他處理相比，較為適中。10%次氯酸鈉滅菌處理，污染率隨著滅菌時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，而死亡率隨之升高。兩種滅菌劑相比較，0.1%氯化汞的滅菌效果好于10%次氯酸鈉。由此可得出結(jié)論白蘚地下芽的最佳滅菌處理為0.1%氯化汞滅菌10min。

表1 白蘚不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基

圖1 不同滅菌方法對(duì)白蘚地下芽接種效果的影響

2.2 不同激素及配比對(duì)地下芽啟動(dòng)培養(yǎng)的影響

從表1可知，白蘚地下芽接種于不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基中其萌發(fā)率有著明顯地差別。在MS培養(yǎng)基中加入NAA和6-BA兩種激素，白蘚地下芽可在15～20d后開始萌動(dòng)，出現(xiàn)分化現(xiàn)象，但不同激素濃度配比的分化數(shù)量和萌發(fā)率各不相同。試驗(yàn)的所有培養(yǎng)基中，當(dāng)NAA濃度為0.4mg/L和6-BA濃度為0.3mg/L時(shí)，地下芽的萌發(fā)率為61.7%，隨著6-BA和NAA濃度的增加，白蘚地下芽的萌發(fā)率逐漸上升，當(dāng)NAA濃度為0.8mg/L和6-BA濃度為0.6mg/L時(shí)，萌發(fā)率最大，高達(dá)83.3%；當(dāng)NAA濃度大于0.8mg/L、6-BA濃度大于0.6mg/L時(shí)，隨著兩種激素濃度的增加，白蘚地下芽的萌發(fā)率逐漸下降；當(dāng)兩種激素濃度為試驗(yàn)設(shè)計(jì)最大濃度時(shí)，其萌發(fā)率下降至56.7%。經(jīng)方差分析和多重比較，結(jié)果表明：加入不同激素及濃度配比的培養(yǎng)基間白蘚地下芽的萌發(fā)率存在顯著性差異(P=0.008<0.05)，特別是培養(yǎng)基5處理與其他培養(yǎng)基間達(dá)到極顯著差異。因此，白蘚地下芽的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+NAA0.8mg/L+6-BA 0.6mg/L。

表2 不同培養(yǎng)基對(duì)白蘚地下芽啟動(dòng)培養(yǎng)的影響

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P值<0.05)。

3 結(jié)論

在白蘚的組織培養(yǎng)中，對(duì)外植體的有效滅菌對(duì)試驗(yàn)的成功至關(guān)重要。滅菌劑的選擇和滅菌時(shí)間會(huì)因取材部位和取材時(shí)間的不同而不同。組培中常用的滅菌劑有氯化汞、次氯酸鈉、雙氧水、過(guò)氧化鈉等，不同的滅菌劑其滅菌時(shí)間也有所不同，有時(shí)滅菌時(shí)間過(guò)短，污染率較高，有時(shí)滅菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，污染率雖有下降，但外植體會(huì)出現(xiàn)失水萎蔫等現(xiàn)象。本試驗(yàn)以白蘚地下芽為外植體，采用0.1%氯化汞和10%次氯酸鈉作為滅菌劑進(jìn)行滅菌試驗(yàn)研究，結(jié)果表明：白蘚地下芽的最佳滅菌劑為0.1%氯化汞，滅菌適宜時(shí)間為10min，其滅菌的效果最好，污染率和死亡率均較低。不同的培養(yǎng)基對(duì)白蘚組織培養(yǎng)的誘導(dǎo)率有著重要的影響，本文研究了MS培養(yǎng)基中加入NAA、6-BA不同濃度及配比對(duì)白蘚地下芽啟動(dòng)培養(yǎng)萌發(fā)率的影響，結(jié)果表明，隨著6-BA和NAA濃度的增加，白蘚地下芽的萌發(fā)率逐漸上升，當(dāng)NAA濃度為0.8mg/L和6-BA濃度為0.6mg/L時(shí)，萌發(fā)率最大；不同激素及濃度配比的培養(yǎng)基間白蘚地下芽的萌發(fā)率存在顯著性差異。白蘚地下芽的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+NAA0.8mg/L+6-BA 0.6mg/L。

[1]中國(guó)科學(xué)院植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M].43卷，2分冊(cè).北京：科學(xué)出版社，1997：167.

[2]張明發(fā)，沈雅琴.白鮮皮藥理作用的研究進(jìn)展[J].抗感染藥學(xué)，2012，(2)：95-99.

[3]馬文海，張靜主編.大興安嶺主要藥用植物栽培技術(shù)[M].哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué)出版社，2006：73.

[4]中國(guó)科學(xué)院植物研究所.中國(guó)高等植物圖鑒[M].2冊(cè).北京：科學(xué)出版社，1980：551.

責(zé)任編輯：王宇紅、葛君

校 對(duì)：王大軍

Experimental Study on Effects of Different Treatments on the Adventitious Buds Induction of Dictamnus dasycarpus Thrcz.

LiChunli

(First-auther's address:Sandao forest farm of Mudanjiang city, Mudanjiang157000,Heilongjiang,China)

This paper studied the effects of different treatment on the adventitious buds induction of D. dasycarpus Thrcz. The results showed that 0.1% mercuric chloride and 10% sodium hypochlorite sterilization effect of two kinds of fungicides had obvious difference, the best sterilization agent fraxinella underground buds was 0.1% mercuric chloride, the suitable sterilization time was 10min, pollution rate and mortality were lower. Join the NAA and 6-BA of different concentration and ratio of underground bud initiation culture influence germination rate differences of MS in culture medium, culture medium was the best culture medium of bud induced fraxinella underground by MS+NAA0.8mg/L+6-BA 0.6mg/L.

Dictamnus dasycarpus Thrcz.; sterilization; adventitious bud induction

2016-12-18