馮世源 劉真真 胡桂秋 于水星 楊勇軍 杜崇濤 陳 巍

(吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，長(zhǎng)春130062)

毒力因子乙?；D(zhuǎn)移酶抑制金黃色葡萄球菌感染引起的巨噬細(xì)胞死亡

馮世源 劉真真 胡桂秋 于水星 楊勇軍 杜崇濤 陳 巍

(吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，長(zhǎng)春130062)

目的：探討毒力因子OatA在金黃色葡萄球菌感染中的作用。方法：在體外應(yīng)用金黃色葡萄球菌野生菌株USA300、OatA基因缺失菌株和OatA基因回補(bǔ)菌株感染小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞死亡情況；在體內(nèi)應(yīng)用滴鼻的方式構(gòu)建金黃色葡萄球菌肺部感染模型，分離肺泡巨噬細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞死亡情況。結(jié)果：體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)均顯示，相比野生菌株和回補(bǔ)菌株，OatA基因缺失菌株能誘導(dǎo)顯著的巨噬細(xì)胞死亡。結(jié)論：在金黃色葡萄球菌感染中，OatA能抑制金黃色葡萄球菌感染引起的巨噬細(xì)胞死亡。

金黃色葡萄球菌；OatA；巨噬細(xì)胞；細(xì)胞死亡

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)屬于葡萄球菌屬，革蘭陽(yáng)性菌、條件致病菌，是一種常見的能夠引起人和動(dòng)物感染的病原體[1-3]。金黃色葡萄球菌是引起化膿性疾病的重要致病菌，并且是毒力最強(qiáng)的化膿菌，常寄居于皮膚和軟組織中，引起創(chuàng)傷感染、膿腫、蜂窩織炎、乳腺炎[4,5]；也是血液感染最常見的病原菌之一，常引起感染性心內(nèi)膜炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、敗血癥和膿毒癥等[6-8]；此外，被金黃色葡萄球菌污染的食物或飼料能引起人類或動(dòng)物的食物中毒[9,10]。

金黃色葡萄球菌致病過程非常復(fù)雜，涉及大量的毒力因子：細(xì)菌分泌的毒素和酶，如殺白細(xì)胞素、溶血毒素、腸毒素、中毒休克綜合征毒素、耐熱核酸酶、凝固酶、表皮剝脫毒素等，以及某些細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，如葡萄球菌蛋白A、莢膜和纖連素結(jié)合蛋白等[11]。金黃色葡萄球菌的毒力因子眾多，仍有許多毒力因子未知或研究不深入，如乙?；D(zhuǎn)移酶(O-acetyltransferase A，OatA)，該毒力因子雖然不是金黃色葡萄球菌治病的主要毒力因子，但是在抵抗宿主免疫反應(yīng)中起著重要作用[12]。早在50年前，細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖和其他多糖的乙?；D(zhuǎn)移作用就被提出對(duì)細(xì)菌生存具有重要作用[13]，而在金黃色葡萄球菌研究中，首次發(fā)現(xiàn)修飾肽聚糖使其具有溶菌酶抗性[14]。近代分子生物化學(xué)技術(shù)詳細(xì)闡明，乙酰基轉(zhuǎn)移酶的生物酶功能為將肽聚糖的N-乙酰胞壁酸殘基N端的乙?；D(zhuǎn)移至N-乙酰葡萄糖胺殘基的羧基上，從而空間結(jié)構(gòu)上阻止細(xì)胞溶菌酶活性中心與肽聚糖結(jié)合，因此金黃色葡萄球菌具有抗溶菌酶抗性[15]。OatA為一種跨膜蛋白，普遍存在于革蘭陽(yáng)性菌中，而在革蘭陰性菌中也存在結(jié)構(gòu)不同作用類似的酶[16]。研究發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌的OatA具有可溶性C端，在分子內(nèi)部具有非典型的 Ⅰ 型信號(hào)肽裂酶解位點(diǎn)[17]，而該信號(hào)肽酶一般作用于分泌性蛋白，提示OatA除了使金黃色葡萄球菌具有溶菌酶抗性，還可能存在其他功能。

在機(jī)體固有免疫應(yīng)答中，OatA有怎樣的調(diào)節(jié)作用？目前研究發(fā)現(xiàn)，OatA基因缺失的金黃色葡萄球菌更易被宿主TLRs識(shí)別，且巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的作用增加[18]，NLRP3炎性體活化，IL-1β分泌增加[19]。OatA缺陷株毒力增強(qiáng)？其他細(xì)菌不一樣。在其他細(xì)菌如單核細(xì)胞增生性李斯特菌中，OatA缺失株能誘導(dǎo)易感細(xì)胞炎癥因子和趨化因子的早期分泌[20]。這些都表明OatA在病原菌抵抗宿主宿主固有免疫應(yīng)答中具有重要作用。

因此，本實(shí)驗(yàn)在前期構(gòu)建金黃色葡萄球菌USA300 OatA基因缺失菌株和回補(bǔ)菌株的基礎(chǔ)上[21]，在體外感染骨髓來源巨噬細(xì)胞 (Bone marrow derive macrophage,BMDM) ，在體內(nèi)采用金黃色葡萄球菌肺部感染模型，初步探討，毒力因子OatA在金黃色葡萄球菌感染宿主過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 腦心浸出液肉湯 (BHI) 購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司；瓊脂粉 (agar) 購(gòu)自Santacruze 公司；細(xì)菌平板購(gòu)自NEST公司；RPMI Medium 1640 購(gòu)自Gibco公司；胎牛血清 (FBS) 購(gòu)自Hyclone公司；雙抗和慶大霉素購(gòu)自Amresco公司；溶菌酶 (Lysozyme)、溴化丙啶(Propidium iodide,PI) 購(gòu)自Sigma公司；F4/80流式染料購(gòu)自Biolegend公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌及培養(yǎng)條件 金黃色葡萄球菌 USA300-TCH1516 本實(shí)驗(yàn)室保存、OatA基因缺失菌株和回補(bǔ)菌株由本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建[21]， BHI培養(yǎng)基37℃、200 r/min培養(yǎng)至OD≈0.9(約為3.6×107CFU/ml)，調(diào)整至2×109CFU/ml (3 ml OD=0.9細(xì)菌培養(yǎng)液，PBS洗2次，300 μl重懸，10倍稀釋測(cè)OD，計(jì)算原液CFU濃度，調(diào)整至2×109CFU/ml)， 用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 小鼠 C57BL/6J 小鼠購(gòu)自北京華阜康生物技術(shù)股份有限公司，本實(shí)驗(yàn)所用小鼠均為雌鼠，6～8周齡，體重為18～22 g，SPF (Specific pathogen free)級(jí)別，飼養(yǎng)于本實(shí)驗(yàn)小鼠獨(dú)立通風(fēng)式正壓/負(fù)壓飼養(yǎng)系統(tǒng)中。

1.2.3 溶菌酶抗性實(shí)驗(yàn) 取100 μl上述三株菌種(100 μl/1.5 tube，2×109CFU/ml)，均勻涂布于BHI瓊脂糖平板中；直徑為5 mm打孔器高壓滅菌后在BHI瓊脂糖平板中央打孔；向孔內(nèi)加入50 μl 100 mg/ml溶菌酶；培養(yǎng)約16 h，測(cè)量抑菌環(huán)直徑。

1.2.4 細(xì)菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定 取30 μl保存菌種，接種于3 ml BHI 培養(yǎng)基中，每種細(xì)菌接3支。按實(shí)驗(yàn)設(shè)置時(shí)間點(diǎn)，取50 μl，加入96孔板，使用酶標(biāo)儀，在波長(zhǎng)600 nm下，測(cè)定細(xì)菌OD值。

1.2.5 BMDM分離與培養(yǎng) 頸椎脫臼處死小鼠，75%酒精消毒；無菌分離小鼠后腿后，剝離后腿股骨和脛骨；每根骨頭用5 ml含0.1%雙抗的1640(RPMI medium 1640)不完全培養(yǎng)液沖洗骨髓；收集沖洗液，1 000 r/min離心10 min后，用1 ml 1640不完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，靜置幾分鐘，待骨頭碎片沉淀，吸取上清。配置MGM條件培養(yǎng)基，即含10% FBS，0.1% 雙抗，25% L929細(xì)胞制備的條件培養(yǎng)液(LCCM)的1640完全培養(yǎng)液。一只小鼠分離的細(xì)胞平均分入10個(gè)90 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，加8 ml 1640完全培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)4 d換液。繼續(xù)培養(yǎng)至第6天，用1%胰酶消化細(xì)胞，計(jì)數(shù)。

1.2.6 細(xì)菌感染實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞準(zhǔn)備：BMDM計(jì)數(shù)后，6孔板每孔接入1 ml含3×106個(gè)細(xì)胞的10% FBS 1640培養(yǎng)液，24孔板接入含0.5×106個(gè)細(xì)胞的0.5 ml 培養(yǎng)液，培養(yǎng)過夜；用不含血清的1640洗滌1次并加入對(duì)應(yīng)培養(yǎng)液。

細(xì)菌準(zhǔn)備：取30 μl上述三種菌種(100 μl/1.5 tube，2×109CFU/ml)接入3 ml BHI液體培養(yǎng)基中；37℃，200 r/min培養(yǎng)2.5 h至細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)數(shù)早期(OD≈0.9)；1640不完全培養(yǎng)液洗滌2次，并調(diào)整至2×109CFU/ml (過程見1.2.1)，備用。

感染過程：細(xì)菌按MOI=20感染細(xì)胞1 h，用無菌PBS洗2次，換成含10% FBS ，0.2%雙抗，0.2%慶大的1640(注：若做LDH實(shí)驗(yàn)，血清含量不超過5%)，繼續(xù)培養(yǎng)5 h。

1.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞死亡情況 實(shí)驗(yàn)分組: 空白組(Blank)、陽(yáng)性對(duì)照組(Positive Control)、未處理組(NT組)、野生菌株感染組(WT組)、基因缺失菌株感染組(ΔoatA組)、回補(bǔ)株感染組(Δ::OatA組)(處理方式見下文)。6孔板內(nèi)巨噬細(xì)胞感染后，每孔加入1 ml不含EDTA的胰酶37℃消化3～5 min；每孔加入100 μl血清終止消化，輕柔吹下細(xì)胞，1 500 r/min離心5 min；500 μl PBS 洗滌1次，100 μl結(jié)合液(10 mmol/L HEPES、pH7.4；140 mmol/L NaCl；1 mmol/L MgCl2；5 mmol/L KCl；2.5 mmol/L CaCl2)重懸。 Positive control組60℃水浴5 min后10 μl PI染色10 min，空白組不做任何處理，其他每組加100 μl結(jié)合液重懸細(xì)胞，避光加入10 μl PI，染色10 min。染色后，每組加入200 μl PBS，經(jīng)200目銅網(wǎng)過濾，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.8 LDH檢測(cè)細(xì)胞死亡 實(shí)驗(yàn)分組：空白組，無細(xì)胞實(shí)驗(yàn)孔，在相同培養(yǎng)條件下，收集培養(yǎng)液；最大LDH釋放組，未感染實(shí)驗(yàn)孔細(xì)胞反復(fù)凍融3次，收集培養(yǎng)上清；陰性組：未感染實(shí)驗(yàn)組；實(shí)驗(yàn)組：細(xì)菌感染實(shí)驗(yàn)孔。按上述細(xì)菌感染實(shí)驗(yàn)方法，于24孔板中感染細(xì)胞，感染1 h后，用無菌PBS洗2次，換成含1640完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)5 h，收集培養(yǎng)上清。

于96孔板中，每孔加入50 μl上述培養(yǎng)上清，再避光加入50 μl DH作用底物(詳見試劑盒)，室溫避光靜置30 min，加入50 μl終止液(詳見試劑盒)，酶標(biāo)儀590 nm波長(zhǎng)測(cè)OD值。LDH試劑盒購(gòu)自普邁格Promega公司，詳細(xì)方法參考說明書。

1.2.9 小鼠肺部感染模型構(gòu)建 培養(yǎng)細(xì)菌至OD≈0.9，PBS洗2次，調(diào)整至1×109CFU/ml；小鼠 (每組n=3) 麻醉后，滴鼻感染，每只小鼠滴20 μl細(xì)菌加10 μl PBS，即2×107CFU/只。感染48 h后，每只小鼠均用1 ml PBS 灌洗肺泡2次，共計(jì)2 ml小鼠肺泡灌洗液，1 000 r/min離心5 min收集細(xì)胞，用F4/80抗體和PI雙染計(jì)數(shù)各組巨噬細(xì)胞死亡數(shù)量比例[22]。

1.2.10 肺部感染組織荷菌情況測(cè)定 C57BL/6J 雌鼠(n=5)，6～8周齡，體重為18～22 g，按上述實(shí)驗(yàn)方法，麻醉后，以每只小鼠滴CFU=2×107劑量，滴鼻感染。感染48 h后，取肺泡灌洗液、血液和灌洗后的肺臟勻漿液，進(jìn)行平板菌落數(shù)統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 溶菌酶抗性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)金黃色葡萄球菌毒力因子OatA具有抗溶菌酶特性 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)前期工作，利用同源重組， 成功構(gòu)建金黃色葡萄球菌USA300毒力因子OatA基因缺失菌株；利用過表達(dá)載體pLI50成功回補(bǔ)OatA基因[21]。金黃色葡萄球菌毒力因子OatA 是金黃色葡萄球菌具有溶菌酶抗性的分子基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)通過溶菌酶平板擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)證明，金黃色葡萄球菌OatA基因使金黃色葡萄球菌具有溶菌酶抗性，圖1A、B所示。同時(shí)，PCR擴(kuò)增OatA基因結(jié)果證實(shí)實(shí)驗(yàn)使用的三種菌株的基因型正確(圖1C)，且經(jīng)測(cè)定，三株菌生長(zhǎng)曲線一致(圖1D )。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為接下來的實(shí)驗(yàn)提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

2.2 在體外OatA基因缺失菌株引起巨噬細(xì)胞大量死亡 為了探討在金黃色葡萄球菌感染巨噬細(xì)胞中OatA是否存在作用，本實(shí)驗(yàn)首先在體外以MOI=20劑量的野生菌株、OatA基因缺失菌株和OatA基因回補(bǔ)菌株分別感染BMDMs 6 h，檢測(cè)細(xì)胞LDH釋放量。LDH為乳酸脫氫酶，當(dāng)細(xì)胞死亡細(xì)胞膜破裂時(shí)，會(huì)釋放到細(xì)胞外，LDH釋放量即能說明細(xì)胞死亡情況。如圖2A所示，與野生菌株比，金黃色葡萄球菌OatA基因缺失株感染引起B(yǎng)MDMs大量死亡，而OatA基因回補(bǔ)株感染細(xì)胞，細(xì)胞死亡情況與野生株相似。進(jìn)一步流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞死亡情況，如圖2B、C所示，得到與圖2A相一致的結(jié)果。綜上所述，在體外實(shí)驗(yàn)中， OatA基因與金黃色葡萄球菌感染引起的細(xì)胞死亡有關(guān)。

2.3 在體內(nèi)OatA基因缺失菌株不利于細(xì)菌在體內(nèi)生存 為了進(jìn)一步驗(yàn)證OatA基因缺失菌株在體內(nèi)是否也同樣能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞大量死亡，本實(shí)驗(yàn)采用滴鼻的方式構(gòu)建金黃色葡萄球菌肺部感染模型，在體內(nèi)探討OatA的作用。在小鼠麻醉后，每只小鼠緩慢滴入20 μl菌液，CFU為2×107，然后再滴10 μl BS，感染后2 d取小鼠肺泡灌洗液，PI和F480雙染后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨細(xì)胞死亡情況。如圖3所示，相比野生菌株，感染后，OatA基因缺失菌株能誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞大量死亡，而OatA回補(bǔ)引起的細(xì)胞死亡的數(shù)量與野生菌株無差異(圖3A、B)，與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。為了進(jìn)一步探究OatA基因?qū)?xì)菌在體內(nèi)生存的影響，在小鼠肺部感染金黃色葡萄球菌后，分析了血液、肺泡灌洗液和灌洗后肺臟的細(xì)菌負(fù)荷情況。結(jié)果顯示， 相比野生株和OatA基因回補(bǔ)株，OatA基因缺失株在血液和肺泡灌洗液中的負(fù)荷量顯著降低(圖3C～E)。該結(jié)果表明OatA基因缺失不利于金黃色葡萄球菌在體內(nèi)生存。

圖1 OatA基因使金黃色葡萄球菌USA300具有溶菌酶抗性Fig.1 OatA makes S.aureus resistant against lysozymeNote: A.Lysozyme resistance assay;B.Statistics of diameter of lysozyme bacteriostatic ring (n=3);C.Identification of OatA gene of three used bacteria in research by PCR;D.Bacterial growh curve.WT.Wild type of S.aureus USA300;ΔoatA(or Δ),OatA gene deletion strain;Δ::OatA(or Δ::),OatA gene complemented strain.

圖2 體外檢測(cè)巨噬細(xì)胞死亡Fig.2 Detection of macrophages death in vitroNote: A.Macrophages death was detected by lactate dehydrogenase (LDH) release assay;B.Macrophages death was detected by flow cytometry;C.Statistics of the data of flow cytometry.WT,wild type of S.aureus USA300;ΔoatA,OatA gene deletion strain;Δ::OatA,OatA gene complemented strain.**.P<0.01.

圖3 體內(nèi)檢測(cè)巨噬細(xì)胞死亡Fig.3 Detection of macrophages death in vivoNote: A.Alveolar macrophages death was detected by flow cytometry;B.Statistics of the data of flow cytometry.C-E.Bacterial burden in the model of pulmonary infection with S.aureus.WT,wild type of S.aureus USA300;ΔoatA,OatA gene deletion strain;Δ::OatA,OatA gene complemented strain.*.P<0.05;***.P<0.001.

3 討論

病原菌入侵宿主后，巨噬細(xì)胞吞噬消化是天然免疫防御系統(tǒng)的第一道防線。巨噬細(xì)胞通過吞噬溶酶體裂解細(xì)菌，使細(xì)菌表面配體完全暴露，細(xì)菌內(nèi)部配體大量釋放，有利于模式識(shí)別受體 (Pattern recognition receptor，PRRs)對(duì)細(xì)菌的識(shí)別，從而啟動(dòng)全面的免疫反應(yīng)，加快宿主對(duì)病原菌的清除或殺傷[23]。然而，為了在宿主中完成必要的生命周期，細(xì)菌如金黃色葡萄球菌已經(jīng)具有許多逃避宿主免疫系統(tǒng)的機(jī)制，如摧毀白細(xì)胞、改變白細(xì)胞募集或功能及抑制補(bǔ)體系統(tǒng)和抗菌肽等[24,25]，從而利于其定殖、感染、擴(kuò)散。細(xì)菌毒力因子是其逃避機(jī)制的分子基礎(chǔ)。金黃色葡萄球菌成功建立感染是對(duì)抗巨噬細(xì)胞是必經(jīng)之路。在眾多毒力因子中，乙酰轉(zhuǎn)移酶OatA在細(xì)菌逃避宿主免疫反應(yīng)中具有重要[14,20,26]。本實(shí)驗(yàn)和文獻(xiàn)[10]證明，在金黃色葡萄球菌感染中，毒力因子OatA使細(xì)菌具有抗溶菌酶能力，抗溶菌酶和巨噬細(xì)胞功能有直接關(guān)系嗎？從而，提高金黃色葡萄球菌在宿主中的存活能力(圖2)。

逃逸巨噬細(xì)胞殺傷不一定要?dú)⑺谰奘杉?xì)胞，巨噬細(xì)胞死亡對(duì)細(xì)菌生存并不有利。如在沙門菌感染宿主細(xì)胞中，沙門菌外膜蛋白能夠維持SCVs (Salmonella-containing vacuoles) 的穩(wěn)定性，持續(xù)活化Akt信號(hào)從而維持宿主細(xì)胞存活，利于細(xì)菌在胞內(nèi)生存[27]。最近有文獻(xiàn)報(bào)道，被吞噬的金黃色葡萄球菌能夠在巨噬細(xì)胞內(nèi)復(fù)制[28]。因此，在抑制巨噬細(xì)胞免疫反應(yīng)的同時(shí)，維持巨噬細(xì)胞存活對(duì)于細(xì)菌是最好的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌能夠通過毒力因子OatA抑制巨噬細(xì)胞死亡。預(yù)示在金黃色葡萄球菌感染中，OatA參與維持巨噬細(xì)胞存活，而具體機(jī)制仍需要進(jìn)一步闡明。但是，OatA是通過怎么樣的方式抑制巨噬細(xì)胞死亡，是直接還是間接，需要進(jìn)一步證明。

在臨床應(yīng)用方面，有文獻(xiàn)報(bào)道，OatA有望成為治療單核細(xì)胞增生性李斯特菌感染的候選靶點(diǎn)，通過某些物質(zhì)靶向OatA提高單核細(xì)胞增生性李斯特菌對(duì)某些抗菌藥物(不局限于溶菌酶)的敏感性，從而治療細(xì)菌感染[29]。目前此方法只在治療單增李斯特菌感染中提出，在金黃色葡萄球菌感染中是否可行仍然未知。本實(shí)驗(yàn)表明，缺失OatA能使金黃色葡萄球菌喪失溶菌酶抗性，誘導(dǎo)更多的巨噬細(xì)胞死亡，從而并破壞復(fù)制場(chǎng)所，加強(qiáng)機(jī)體對(duì)細(xì)菌的清除。因此，OatA有可能作為治療金黃色葡萄球菌感染的靶點(diǎn)，但仍需要進(jìn)一步研究。

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[收稿2016-11-08 修回2017-01-22]

(編輯 許四平)

Virulence factor O-acetyltransferase A inhibits Staphylococcus aureus infection-induced macrophage death

FENGShi-Yuan，LIUZhen-Zhen,HUGui-Qiu,YUShui-Xing,YANGYong-Jun,DUChong-Tao,CHENWei.

CollegeofVeterinaryMedicine,JilinUniversity,Changchun130062,China

Objective:To explore the effect of the virulence factor OatA during Staphylococcus aureus infection.Methods: In vitro,wild type of Staphylococcus aureus USA300,OatA gene deletion strain or OatA gene complemented strain were used to infect mice bone marrow divided macrophages (BMDMs).Subsequently BMDMs were separated and the case of cell death were detected.In vivo,mice pulmonary infection model was constructed with nasal inhalation of Staphylococcus aureus.Alveolar macrophages were isolated and the case of cell death were detected.Results: In contrast to wild type and OatA gene complemented strain,OatA gene deletion strain induced severer macrophage death both in vitro and in vivo.Conclusion: The virulence factor OatA inhibits Staphylococcus aureus infection-induced macrophage death.

Staphylococcus aureus;OatA;Macrophages;Cell death

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.05.009

馮世源(1991年-)， 男，在讀碩士，主要從事病原微生物與免疫方面的研究。

及指導(dǎo)教師：陳 巍(1972年-)，女，碩士，碩士生導(dǎo)師，主要從事動(dòng)物生理學(xué)和免疫學(xué)方面的研究，E-mail：chew-cc@jiu.edu.cn.

R378.11

A

1000-484X(2017)05-0679-05