孫耀，賈云宏

（錦州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 錦州 121000）

硫化氫減輕糖尿病小鼠胰島素抵抗的作用機(jī)制研究

孫耀，賈云宏

（錦州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 錦州 121000）

目的探究硫化氫（H2S）對糖尿病小鼠胰島素抵抗的作用和可能的分子機(jī)制。方法C57Bl/6J小鼠隨機(jī)分為正常對照組、糖尿病組、低劑量治療組、高劑量治療組及陽性對照組，四氧嘧啶聯(lián)合高脂飲食復(fù)制糖尿病小鼠模型，檢測各組小鼠脂肪組織中Caspase-3的活性、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl2）、Bcl-2相關(guān)X（Bax）蛋白的表達(dá)水平，以及空腹血糖、空腹血清胰島素和血漿H2S濃度，并計算胰島素敏感指數(shù)。結(jié)果糖尿病小鼠Caspase-3活性和Bax表達(dá)水平下調(diào)，而Bcl2蛋白表達(dá)水平上調(diào)，治療組各指標(biāo)得到緩解。結(jié)論H2S可以減輕胰島素抵抗，其機(jī)制可能為減輕脂肪組織的細(xì)胞凋亡。

硫化氫；糖尿病；胰島素抵抗；脂肪組織；凋亡

硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）是繼一氧化氮NO后發(fā)現(xiàn)的又一重要氣體信號分子，在疾病發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。硫氫化鈉（sodium hydrosulfide，NaHS）口服給藥進(jìn)入體內(nèi)后，可以在各組織釋放出H2S，該作用已經(jīng)廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究。近年來糖尿病發(fā)病率不斷升高，調(diào)查顯示我國成人糖尿病的患病率達(dá)9.7%，更為嚴(yán)重的是處于糖尿病前期的比例達(dá)15.5%[1]。糖尿病的研究和治療已成為當(dāng)務(wù)之急。有研究認(rèn)為，H2S可以緩解多種細(xì)胞的凋亡[2]。也有研究認(rèn)為，脂肪組織細(xì)胞的凋亡和胰島素抵抗相關(guān)，Caspase 3是與細(xì)胞凋亡相關(guān)的重要蛋白分子，而其作用可以被B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl2）和BCL-2相關(guān)X蛋白（B-cell lymphoma-2 associated X protein，Bax）形成的異源二聚體阻斷[3]。本實驗檢測正常小鼠、糖尿病小鼠及各治療組小鼠的胰島素抵抗情況、反映脂肪組織細(xì)胞凋亡的Caspase-3活性，以及Bcl2和Bax的表達(dá)量，進(jìn)而探究糖尿病小鼠胰島素抵抗與脂肪組織細(xì)胞凋亡的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

無特定病原體（specefic pathogen free，SPF）級4周齡C57BL/6J小鼠75只[北京華阜康公司，編號：SCXK（京）2009-0015]，體重（12±1）g，均為雄性，隨機(jī)分為正常對照組（NC組）（8只）和模型組（67只）。自由飲水、攝食，動物房內(nèi)12 h晝夜循環(huán)，室溫（22± 2）℃。四氧嘧啶（美國SIGMA公司，120 mg/kg，2次腹腔注射）復(fù)制糖尿病小鼠模型，專用高能量飼料（10%蔗糖、10%脂肪）（北京華阜康公司）用于模型組小鼠喂養(yǎng)，小鼠全價營養(yǎng)顆?；A(chǔ)飼料（北京華阜康公司）用于正常C57BL/6J小鼠喂養(yǎng)。入組的糖尿病小鼠連續(xù)2次隨機(jī)血糖≥13.9 mmol/L。將復(fù)制成功的39只小鼠分為糖尿病組（DM組）（12只）、低劑量治療組（LT組）（9只）、高劑量治療組（HT組）（9只）及陽性對照組（PC組）（9只）。對照組和糖尿病組自由飲取無菌水，低劑量治療組和高劑量治療組分別飲用0.003和0.009 g/L NaHS無菌水溶液，陽性對照組小鼠給予吡格列酮1.95 mg/kg灌胃，自由飲取無菌水。8周后，糖尿病小鼠死亡3只，低劑量治療組和陽性對照組小鼠各死亡1只，將糖尿病組小鼠和高劑量治療組小鼠各隨機(jī)剔除1只，其余用于實驗。所有動物實驗過程按照錦州醫(yī)科大學(xué)倫理委員會規(guī)定進(jìn)行。

1.2 生化指標(biāo)檢測

用藥8周后，各組小鼠禁食6 h，斷頭取血，留取血清測定空腹血糖（fasting plasma glucose，F(xiàn)PG），用放射免疫分析（radio immunoprecipitation assay，RIPA）法測定空腹血清胰島素（fasting serum insulin，F(xiàn)INS），根據(jù)公式計算胰島素敏感指數(shù)（insulin sen sitive index，ISI），ISI=1/（FPG×FINS），取自然對數(shù)正態(tài)化后進(jìn)行分析。

1.3 血漿硫化氫濃度測定

新鮮血分離血漿，立即采用1.5 ml離心管儲存，封口膜封存以防止硫化氫損失，100 μl血漿和350 μl磷酸鹽緩沖溶液（pH=7.4）加入200 μl 1%無水醋酸鋅，立即封存。將20 mmol N，N二甲基硫酸鹽（7.2 mol/L，133 μl）和30 mmol Fecl3（1.2 mol/L，133μl）的鹽酸溶液混合，37℃孵育45 min，三氯乙酸溶液（10%W/V，250 μl）終止反應(yīng)，離心5 min，取200 μl上清液移入96孔板，測670 nm處吸光度值，根據(jù)已知濃度的NaHS（0.01～100.00 μmol/l）做標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算硫化氫濃度。

1.4 Caspase-3活性檢測

1.4.1 組織總蛋白提取及定量 用藥8周后處死小鼠，速取部分腹腔脂肪組織，置入-80℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?。取少量小鼠脂肪組織剪碎后加細(xì)胞裂解液[RIPA∶蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）為100∶1，體積約為組織體積的5倍]，勻漿機(jī)勻漿30 s，12 000 r/min離心10min，取中層液體，聚氰基丙烯酸正丁酯蛋白定量試劑盒（北京博奧森公司）測總濃度，并調(diào)整各蛋白濃度2 mg/ml，置入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 Caspase-3活性檢測 Caspase-3分光光度法檢測試劑盒（沈陽萬類公司）檢測Caspase-3活性，結(jié)果以試劑盒中相同吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)品濃度表示。1.5 Western blot檢測

1.5.1 取材及蛋白定量 取材及蛋白定量同1.4.1，取備用樣本、6×上樣緩沖液，三羥甲基氨基甲烷緩沖鹽溶液（tris buffered saline and tween 20，TBST）調(diào)整蛋白濃度均為2 mg/ml，95℃水浴5 min，置入-80℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳 12%分離膠和5%濃縮膠，20μl/孔的樣本及小分子Maker（上海賽默飛公司）上樣進(jìn)行電泳，1×上樣緩沖液防止邊緣效應(yīng)。采用濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)蛋白至聚偏氟乙烯膜，Bcl2和Bax多克隆抗體（北京博奧森公司）4℃過夜，過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗孵育2 h。用GISt 020凝膠圖像分析儀及成像。

1.6 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

Trizol提取總 mRNA，Nandrop 2000檢測總mRNA量，RNeasy Plus Mini試劑盒（大連TaKaRa生物科技公司）將mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，QIAGEN Fast Cycling聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒（日本TaKaRa公司）。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 s，95℃變性5 s，60℃退火15 s，70℃延伸15 s，共45個循環(huán)。引物由上海生工生物工程股份有限公司設(shè)計并合成，Bcl2正向引物：5'-CCCCTCGCATCTTCTCCTTCC-3'，反向引物：5'-C CACCACCTCCTTGAGAAGTCC-3'；Bax正向引物：5'-CCAGGATGCGTCCACCAA-3'，反向引物：5'-CAC CAACGGGAGAAGATGAAACG-3'；甘油醛-3-磷酸脫氫酶正向引物：5'-TTGTCAAGCTCATTTCCTGGTA TG-3'，反向引物：5'-GGATAGGGCCTCTCTTGCTCA-3'，所得數(shù)據(jù)以甘油醛-3-磷酸脫氫酶作為參照，計算Bax和Bcl2基因的相對拷貝數(shù)，相對拷貝數(shù)用2-△△ct表示。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用方差分析，兩兩比較用LSD-t法，Bax mRNA/Bcl2 mRNA比值部分資料，方差不齊，采用Tamhane’s T2法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 生化指標(biāo)

各組小鼠FPG、FINS、ISI比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=21.923、75.311和55.873，P=0.000）。糖尿病組小鼠FPG、FINS及ISI與正常對照組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P< 0.05），糖尿病組小鼠FINS較高，而ISI較低；低劑量治療組、高劑量治療組小鼠FPG、FINS及ISI與糖尿病組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P< 0.05），低劑量治療組和高劑量治療組小鼠各指標(biāo)得到改善。高劑量治療組小鼠FPG、FINS及ISI與低劑量治療組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖1～3。

2.2 血漿硫化氫濃度

各組小鼠血漿硫化氫濃度比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=48.506，P=0.000）。糖尿病組血漿硫化氫濃度與正常對照組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），糖尿病組血漿硫化氫濃度較低；低劑量治療組、高劑量治療組血漿硫化氫濃度與糖尿病組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），低劑量治療組、高劑量治療組血漿硫化氫濃度較高；高劑量治療組小血漿硫化氫濃度與低劑量治療組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），高劑量治療組小鼠血漿硫化氫濃度高于低劑量治療組。見圖4。

2.3 Caspase-3活性

圖3 各組小鼠ISI水平 （±s）

圖4 各組小鼠血漿硫化氫濃度 （±s）

各組小鼠脂肪組織Caspase-3活性比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=221.887，P= 0.000）。糖尿病組小鼠脂肪組織Caspase-3活性與正常對照組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），糖尿病組小鼠脂肪組織Caspase-3活性較高；低劑量治療組小鼠Caspase-3活性與糖尿病組小鼠比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P< 0.05），Caspase-3活性有所降低；高劑量治療組小鼠Caspase-3活性與低劑量治療組小鼠比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），Caspase-3活性進(jìn)一步降低。見圖5。

圖5 各組小鼠脂肪組織Caspase-3活性 （±s）

2.4 Bax、Bcl2蛋白表達(dá)水平變化

各組小鼠Bax、Bcl2蛋白表達(dá)水平及Bax/Bcl2比值比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F= 34.711、11.658和18.232，P=0.000、0.001和0.000）。糖尿病組小鼠脂肪組織Bax蛋白表達(dá)水平與正常對照組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P< 0.05），糖尿病組小鼠脂肪組織Bax蛋白表達(dá)增加；糖尿病組小鼠Bcl2蛋白表達(dá)水平與正常對照組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），糖尿病組小鼠Bcl2蛋白表達(dá)水平降低；糖尿病組小鼠Bax/Bcl2比值與正常對照組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），糖尿病組小鼠Bax/Bcl2比值升高；低劑量治療組糖尿病小鼠脂肪組織Bax蛋白與高劑量治療組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），糖尿病小鼠脂肪組織Bax蛋白表達(dá)降低，而低劑量治療組小鼠Bcl2蛋白與高劑量治療組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），低劑量治療組小鼠Bcl2表達(dá)增加；低劑量治療組小鼠Bax/Bcl2比值與高劑量治療組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），低劑量治療組小鼠Bax/Bcl2比值降低；高劑量治療組小鼠Bax/Bcl2比值與低劑量治療組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），高劑量治療組小鼠Bax/Bcl2比值低于低劑量治療組。見圖6～9。

圖6 Western blot檢測各組小鼠脂肪組織Bax、Bcl2蛋白表達(dá)

圖7 各組小鼠脂肪組織Bax蛋白相對表達(dá)量 （±s）

圖8 各組小鼠脂肪組織Bcl2蛋白相對表達(dá)量 （±s）

圖9 各組小鼠脂肪組織Bax/Bcl2蛋白比值 （±s）

圖10 各組小鼠脂肪組織Bax mRNA相對表達(dá)量 （±s）

2.5 Bax、Bcl2 mRNA表達(dá)水平變化

各組小鼠Bax mRNA、Bcl2 mRNA及Bax mRNA/ Bcl2 mRNA比值比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=164705.306、303 239.562和20 008.636，P=0.000）。兩兩比較用LSD法或Tamhane’s T2法，結(jié)果表明，糖尿病組小鼠脂肪組織Bax mRNA、Bcl2 mRNA表達(dá)水平與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），糖尿病組小鼠脂肪組織Bax mRNA表達(dá)增加，Bcl2 mRNA表達(dá)水平降低；糖尿病組小鼠脂肪組織Bax mRNA/Bcl2 mRNA比值與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），糖尿病組小鼠脂肪組織Bax mRNA/Bcl2 mRNA比值較高；低劑量治療組、高劑量治療組小鼠Bax mRNA、Bcl2 mRNA及Bax mRNA/Bcl2 mRNA比值與糖尿病組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），低劑量治療組和高劑量治療組脂肪組織Bax mRNA表達(dá)降低，Bcl2 mRNA表達(dá)增加，Bax mRNA/Bcl2 mRNA比值降低；高劑量治療組Bax mRNA/Bcl2 mRNA比值與低劑量治療組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），高劑量治療組Bax mRNA/Bcl2 mRNA比值低于低劑量治療組。見圖10～12。

圖11 各組小鼠脂肪組織Bcl2 mRNA相對表達(dá)量（±s）

圖12 各組小鼠脂肪組織Bax mRNA/Bcl2 mRNA比值（±s）

3 討論

糖尿病胰島素抵抗是糖尿病治療的重要難題之一。有報道顯示，糖尿病患病率高達(dá)9.7%，而糖尿病前期更是高達(dá)15.5%[1]。無論是糖尿病患者，還是糖尿病前期患者，普遍存在胰島素抵抗，嚴(yán)重影響患者的治療和預(yù)后，硫化氫近年來被證實是一種新型氣體信號分子，參與機(jī)體內(nèi)許多生理功能的調(diào)控[4]。JIAN等[5]首次報道，2型糖尿病患者血漿H2S水平比正常人降低。有研究證實，硫化氫與肥胖小鼠胰島素抵抗相關(guān)[6]。筆者猜想外源性補充硫化氫可能減輕糖尿病小鼠的胰島素抵抗。NaHS作為一種常見的硫化氫供體已廣泛用于科學(xué)研究，故低劑量治療組和高劑量治療組采用NaHS作為硫化氫供體，用于糖尿病小鼠的治療，同時使用能提高胰島素敏感性的吡格列酮用于陽性對照組小鼠治療。本實驗結(jié)果顯示，NaHS在實驗中達(dá)到相應(yīng)穩(wěn)定的硫化氫血藥濃度。本實驗檢測糖尿病小鼠血糖和FINS發(fā)現(xiàn)，與正常對照組小鼠相比，糖尿病組小鼠FPG和FINS升高，ISI下降，在硫化氫治療后，F(xiàn)PG和FINS下降，ISI升高。說明外源性補充硫化氫可以減輕糖尿病小鼠胰島素抵抗。硫化氫也被報道其在心臟和腎臟缺血再灌注模型中具有明顯的抗凋亡生物學(xué)效應(yīng)[7]。目前，發(fā)現(xiàn)外源性補充H2S的供體NaHS可以明顯改善心肌細(xì)胞凋亡[8-9]。然而糖尿病小鼠脂肪組織中是否有明顯的細(xì)胞凋亡，以及外源性補充硫化氫是否可以緩解脂肪組織的凋亡還沒有相關(guān)報道。

Caspase家族在凋亡過程中起重要作用，當(dāng)Caspase家族基因?qū)訉蛹せ詈?，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，Caspase-3在Caspase家族中處于關(guān)鍵位置，因此Caspase-3常作為凋亡發(fā)生的標(biāo)志酶。筆者檢測小鼠脂肪組織中Caspase-3的活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對照組小鼠相比，糖尿病小鼠脂肪組織Caspase-3活性增加，而在硫化氫治療后，其活性降低且存在劑量依賴性[10]。這提示硫化氫減輕糖尿病小鼠胰島素抵抗可能與減輕脂肪組織的細(xì)胞凋亡有關(guān)。

胰島素抵抗Bcl-2家族蛋白在細(xì)胞凋亡中的作用分為兩類：①以Bcl-2為代表的抗凋亡蛋白；②以Bax為代表的促凋亡蛋白。Bcl-2和Bax可以形成異源二聚體，阻斷細(xì)胞色素C的釋放，繼而抑制Caspase-3蛋白的活化，有效抑制細(xì)胞凋亡[11]。當(dāng)Bcl-2/ Bax比值增高時，提示抑制細(xì)胞凋亡的作用增強；反之，提示促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用增強，因此Bax/Bcl-2蛋白比值決定細(xì)胞的生存和死亡[12-13]。為進(jìn)一步確認(rèn)糖尿病小鼠脂肪組織細(xì)胞凋亡增加，而在硫化氫治療后減少，筆者采用Western blot和實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測小鼠脂肪組織Bcl2、Bax蛋白及mRNA的表達(dá)量。筆者發(fā)現(xiàn)和對照組相比，糖尿病組小鼠脂肪組織的Bax和Bcl2表達(dá)增加，在硫化氫治療后減少。該結(jié)果進(jìn)一步確認(rèn)筆者的發(fā)現(xiàn)，與治療組相比，糖尿病小鼠脂肪組織細(xì)胞凋亡增加，硫化氫治療后凋亡減少。

綜上所述，硫化氫減輕糖尿病小鼠胰島素抵抗，這可能與其緩解脂肪組織的細(xì)胞凋亡有關(guān)。但是該結(jié)果有待進(jìn)一步利用基因沉默和過表達(dá)等方法調(diào)節(jié)Bax和/或Bcl2的表達(dá)來進(jìn)一步研究。

[1]YANG W,LU J,WENG J,et al.Prevalence of diabetes among men and women in China[J].N Engl J Med,2010,362(12): 1090-1101.

[2]LEI Y,ZHEN Y,ZHANG W,et al.Exogenous hydrogen sulfide exerts proliferation,anti-apoptosis angiopoiesis and migration effects via activating HSP90 pathway in EC109 cells[J].Oncol Rep,2016,35(6):3714-3720.

[3]LI L,LI M,LI Y,et al.Exogenous H2S contributes to recovery ofischemic post-conditioning-induced cardioprotection by decrease of ROS level via down regulation of NF-κB and JAK2-STAT3 pathways in the aging cardiomyocytes[J].Cell Biosci, 2016,6:26.

[4]JIN H F,DU J B,TANG C S.Waste gas is not waste:advance in the research of hydrogen sulfide[J].Acta Physiologica Sinica, 2010,62(6):495-504.

[5]JAIN S K,BULL R,RAINS J L,et al.Low levels of hydrogen sulfide in the blood of diabetes patients and streptozotocin-treated rats causes vascular inflammation[J].Antioxid Redox Signal, 2010,12(11):1333-1337.

[6]GENG B,CAI B,LIAO F,et al.Increase or decrease hydrogen sulfide exert opposite lipolysis,but reduce global insulin resistance in high fatty diet induced obese mice[J].PLoS One,2013, 8(9):DOI:10.1371/journal.pone.0073892.

[7]JHA S,CALVERT J W,DURANSKI M R,et al.Hydrogen sulfide attenuates hepatic ischemia-reperfusion injury:role ofantioxidant and antiapoptotic signaling[J].Am J Physiol Heart Cire Physiol,2008,295(2):801-806.

[8]SU Y W,LIANG C,JIN H F,et al.Hydrogen sulfide regulates cardiac function and structure in adriamycin-induced cardiomyopathy[J].Circ J,2009,73(4):741-749.

[9]JIA Q,YANG R,MA S F,et al.Anti-apoptotic role of hydrogen sulfide on cardioprotection in diabetic rats[J].Acta Universitatis Medicinalis Anhui,2014,49(2):172-176.

[10]BERNARDI P,RASOLA A.Calcium and cell death:the mitochondrial connection[J].Subcell Biochem,2007,45(1):481-506.

[11]LEE Y,GUSTAFSSON A B.Role of apoptosis in cardiovascular disease[J].Apoptosis,2009,14(4):536-548.

[12]BOUILLET P,PURTON J F,GODFREY D I,et al.BH3-only Bcl-2 familly member Bim is required for apoptosis of autoreactive thymocytes[J].Nature,2002,415(6874):922-926.

[13]ANTONSSON B.Mitochondria and the Bcl-2 family proteins in apoptosis signaling pathways[J].Mol Cell Biochem,2004,256(1/2): 141-155.

（童穎丹 編輯）

Hydrogen sulfide alleviates insulin resistance by reducing apoptosis of adipose cells in diabetic mice

Yao Sun,Yun-hong Jia
(College of Pharmacy,Jinzhou Medical University,Jinzhou,Liaoning 121000,China)

ObjectiveTo investigate the effect of hydrogen sulfide on insulin resistance and its mechanism in mice with diabetes mellitus.MethodsC57Bl6/J mice were randomly divided into normal control group,diabetes mellitus group,low-dose therapy group,high-dose therapy group and positive control group.Diabetes mellitus models were established by high-fat diet and tetraoxypyrimidine.Caspase-3 activity,Bcl-2 and Bax expressions in adipose tissue were measured,as well as fasting plasma glucose,fasting serum insulin and hydrogen sulfide in plasma.Then,insulin sensitivity index was calculated.ResultsCaspase-3 activity and Bax level were down-regulated,while Bcl2 was up-regulated in mice with diabetes mellitus,and all the indexes recovered after therapy with sodium hydrosulfide.ConclusionsHydrogen sulfide could alleviate insulin resistance by reducing the apoptosis of adipose cells.

hydrogen sulfide;diabetes mellitus;insulin resistance;adipose tissue;apoptosis

R587.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.09.003

1005-8982（2017）09-0013-06

2016-08-18

賈云宏，E-mail：Jiayunhong2012@163.com；Tel：18104068238