蔣妮 陳乾平 馮世鑫 韋樹根 繆劍華 宋利莎

摘 要 對廣西三七灰霉病的典型病斑進行分離培養(yǎng)、致病性檢測，通過形態(tài)學(xué)觀察并結(jié)合rDNA-ITS序列分析鑒定病原菌；通過室內(nèi)及田間試驗研究了溫濕度對菌絲生長、孢子萌發(fā)的影響，以及病害的病程和病斑顯癥率，并對不同立地條件、不同生長年限三七灰霉病的發(fā)生規(guī)律進行調(diào)查；最后采用菌絲生長速率法研究了15種殺菌劑對病原菌的抑制作用。結(jié)果表明，三七灰霉病病原菌為灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）；菌絲生長、孢子形成及萌發(fā)的最適溫度為20 ℃，孢子萌發(fā)需要高濕度，低于100%濕度不萌發(fā)；不同季節(jié)、不同生長年限三七的病程為5～13 d，病斑在田間的持續(xù)顯癥期為6 d；三七灰霉病在三七生長期都能發(fā)生，10～11月份為發(fā)生高峰期，其中不同立地條件下的發(fā)病嚴重度順序為旱地>坡地>林下，不同生長年限下的順序為3年生三七>2年生三七>1年生三七；咯菌腈、嘧菌環(huán)胺與嘧菌酯、氟硅唑?qū)Σ≡木z生長抑制率達100%。

關(guān)鍵詞 三七 灰霉病 灰葡萄孢 發(fā)生規(guī)律 藥劑篩選

中圖分類號 S567.23+6 文獻標識碼 A

Occurrence of Panax notoginseng Grey Mould and Selection

of Funficides in Guangxi

JIANG Ni， CHEN Qianping， FENG Shixin， WEI Shugen， MIU Jianhua， SONG Lisha

Guangxi Botanical Garden of Medicine Plant， Nanning， Guangxi 530023， China

Abstract In the study， the pathogen of Panax notoginseng Grey was isolated and cultured. Moreover， single spore isolates， morphological observation， pathogenicity test， and combined with molecular biology methods were used to identify the pathogen. Mycelium growth， spore germination， the course of the disease and the lesion appearance rate were studied in the laboratory and field；The disease occurrence was studied in the P. notoginseng gardens of different site conditions and different growing years. The inhibitory rates of 15 fungicides were tested using the mycelium growth rate method. The results indicaded that the pathogen was Botrytis cinerea. The proper temperature for mycelium growth， spore formation and germination was 20 ℃； Conidia did not germinate in the condition of relative humidity bellow 100%； The development of the disease was different for P. notoginseng of different age and different season， and the period of symptomatic appearance of the disease was about 6 d； The disease occurred during the whole growth period of the host plants， and the disease peak was from October to November； The disease severity was dryland>slope>under forest， and that for growing ages was three years>two years>one year； Four kinds of fungicides including fludioxonil， cyprodinil， azoxystrobin， and flusilazole showed high inhibitory rates of 100% on B. cinerea.

Key words Panax notoginseng； grey mould； Botrytis cinerea； occurrence； screening of fungicides

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.09.022

中藥材三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H. Chen]又稱田七，為五加科人參屬植物三七的干燥根莖，主產(chǎn)于云南、廣西，號稱“南人參之王”，具有散瘀止血、消腫定痛等功效，被《本草綱目》、歷版《藥典》等經(jīng)典文獻收錄[1-2]。三七性喜溫涼、陰濕的生長環(huán)境，易誘發(fā)根腐病、黑斑病、炭疽病、灰霉病等多種病害，給三七的栽培生產(chǎn)造成嚴重影響[3]。隨著三七市場價格的調(diào)整，2010年始廣西百色市靖西、那坡等多地普種三七，上述病害頻繁發(fā)生，特別是2012～2015年期間在靖西縣祿峒鄉(xiāng)、新靖鄉(xiāng)曾兩度流行三七灰霉病，造成葉片大量脫落，植株枯死，藥農(nóng)損失慘重。

灰霉病是一種普遍的世界性病害，在蔬菜、水果、花卉等作物上普遍發(fā)生，對此相關(guān)學(xué)者已開展了深入的研究[4-5]，但關(guān)于三七灰霉病的研究報道甚少，陳樹旋[6]于1990年首次對云南文山州三七上發(fā)生的新病害——灰霉病進行了報道，直至2014年齊善厚[7]對三七灰霉病的藥劑防治進行報道，而關(guān)于病原菌的分子鑒定、侵染特性及病害的發(fā)生流行規(guī)律等諸多方面的研究尚屬空白。特別是在廣西，三七大面積種植停滯二十多年后，種植環(huán)境、氣候條件、種質(zhì)等方面都發(fā)生了變化，之前只是零星發(fā)生的病害現(xiàn)在突然在田間流行，急需了解和掌握灰霉病菌在三七上的侵染特性及發(fā)生流行規(guī)律，為安全、有效地預(yù)防和控制該病害提供科學(xué)依據(jù)。

目前防治灰霉病菌主要以化學(xué)防治為主，輔以生物防治和農(nóng)業(yè)防治[8]。已報道的防治灰霉病菌的主要殺菌劑有苯并咪唑類、二甲酰亞胺類、嘧啶胺類、氨基甲酸酯類、苯胺類、環(huán)己基酰殺菌劑等，在一定時期內(nèi)也都取得較好的防效[9]。但是，灰葡萄孢菌（灰霉病致病菌）因其具有高的基因漂移潛力和較大的種群尺度，是一類高風(fēng)險病菌，很容易產(chǎn)生抗藥性[10]，如繼續(xù)頻繁使用同類藥劑，不但會增加經(jīng)濟和環(huán)境成本，也無法獲得滿意的防治效果。為此，本研究對歷來在防治灰霉病上使用的藥劑以及一些在其他病害上使用的藥劑進行篩選，旨在為田間防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試典型三七灰霉病病葉及健康三七植株均取自廣西靖西祿峒三七種植地，將三七植株盆栽于實驗室待用。

供試藥劑：50%多菌靈可濕性粉劑（四川國光農(nóng)化有限公司）；70%甲基托布津可濕性粉劑（日本曹達株式會社）；50%腐霉利可濕性粉劑（霍州市綠洲農(nóng)藥有限公司）；50%異菌脲懸浮劑[拜耳作物科學(xué)（中國）有限公司]；40%嘧霉胺懸浮劑[拜耳作物科學(xué)（中國）有限公司]；25%咯菌腈懸浮劑（瑞士先正達作物保護有限公司）；50%嘧菌環(huán)胺水分散粒劑（瑞士先正達作物保護有限公司）；75%百菌清可濕性粉劑（江蘇省天星農(nóng)化公司）；50%福美雙可濕性粉（河北贊峰農(nóng)化有限公司）；80%代森錳鋅可濕性粉劑（利民化工有限公司）；25%嘧菌酯懸浮液（瑞士先正達作物保護有限公司）；40%氟硅唑乳油（標正作物科學(xué)有限公司）；30%戊唑醇可濕性粉劑（常州沃富斯化工有限公司）；45%敵磺鈉可濕性粉劑（丹東市農(nóng)藥總廠）；15%咪鮮胺乳油（海南博士威）。

1.2 方法

1.2.1 田間癥狀及病原菌的分離鑒定 田間觀察、記錄病害發(fā)生初期、中期、后期的癥狀，并將典型灰霉病葉采回實驗室，采用常規(guī)的組織分離法對病原菌進行分離、純化，并根據(jù)柯赫氏法則將分離到的真菌進行回接再分離試驗，確定致病菌，觀察病原菌菌落、菌絲、孢子的形態(tài)特征，初步鑒定病原菌種類[11]。

采用SDS法提取病原菌菌株的基因組DNA[12]。采用真菌核糖體基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）通用引物ITS4和ITS5（上海捷瑞生物工程有限公司合成）擴增該菌的rDNA-ITS序列，擴增產(chǎn)物的純化和序列測定委托北京諾賽生物科技有限公司進行；將所得到的核苷酸序列與GenBank中相關(guān)菌株進行同源性比較[13]，結(jié)合形態(tài)鑒定結(jié)果，確定病原菌種類。

1.2.2 病原菌的生物學(xué)特性 具體研究方法參考袁高慶等[14]。（1）菌絲生長、孢子萌發(fā)對溫度的要求。設(shè)置8個試驗溫度：5、10、15、20、25、28、30、35 ℃；用直徑為5 mm的滅過菌的打孔器，在預(yù)先培養(yǎng)好的灰葡萄孢病原菌菌落邊緣打取菌餅并移植到PDA平板中央，分別放置于上述的8個處理溫度下培養(yǎng)，每處理3個重復(fù)，每2 d觀察1次菌落生長情況，直至第一個菌絲長滿皿為止；用十字交叉法測量菌落直徑，計算菌絲生長速率。

待上述病原菌培養(yǎng)7 d后，在每個培養(yǎng)皿中加入10 mL滅菌水，過濾菌絲后用紐鮑爾（Neubauer）血球計數(shù)板統(tǒng)計孢子量，每處理3個重復(fù)。

待上述病原菌培養(yǎng)14 d后，加1%葡萄糖溶液于大量產(chǎn)孢的菌落上將孢子洗下，配置成孢子懸浮液（10×10倍顯微鏡下每視野約50～80個孢子），滴于凹玻片上，并分別放置于上述8個試驗溫度下培養(yǎng)，48 h后觀察、統(tǒng)計100個孢子的萌發(fā)率，每處理重復(fù)3次。

生長速率（mm/d）=[處理后菌落直徑（mm）-5 mm]/生長時間（d）

（2）孢子萌發(fā)對濕度的要求。用不同濃度的硫酸將干燥器分別調(diào)制成相對濕度為100%+水滴、100%、90%、80%、70%、60%、50%，共7個處理；用膠頭滴管取一滴1.2.2-（1）中配置的孢子懸浮液（10×10倍顯微鏡下每視野約50～80個孢子）于潔凈的載玻片上并均勻涂布，快速風(fēng)干后分別放置于上述不同相對濕度的干燥器中，以20 ℃恒溫培養(yǎng)，48 h后觀察孢子萌發(fā)率，每處理重復(fù)3次。

1.2.3 病程及病斑顯癥率 （1）不同生長年限三七對灰霉病病程的影響。將培養(yǎng)好的三七灰霉病病原孢子制成孢子懸浮液（10×10倍顯微鏡下每視野約50～80個孢子），2015年于不同時間噴霧接種至健康的不同生長年限（1年生、2年生、3年生）的三七葉片上，保持日常管理；每個處理選5株，每天定時定點觀察所有葉片的發(fā)病情況，從接種當日起算至典型病斑形成，所需的時間（d）即為病害的病程。

（2）不同保濕時間對三七灰霉病病程的影響。于2015年3月25日將培養(yǎng)好的三七灰霉病病原孢子懸浮液（同上）噴霧接種至健康的2年生三七葉片上，并分別用塑料袋保濕8、12、24、36、48 h，以接種后不保濕為對照（CK），每個處理5株；每天觀察發(fā)病情況，記錄發(fā)病日期，比較不同保濕時間與病程的關(guān)系。

（3）田間病斑顯癥率。于2015年3月25日將三七灰霉病病原孢子懸浮液噴霧接種至健康的2年生三七葉片；在三七灰霉病典型病斑出現(xiàn)后，選取10張葉片，每天記載葉片上的病斑總數(shù)，直到病斑總數(shù)不再增加為止；計算逐日顯癥率、累計顯癥率。

逐日顯癥率=每天病斑增長數(shù)/最后病斑總數(shù)×100%

累計顯癥率=每天病斑總數(shù)/最后病斑總數(shù)×100%

1.2.4 病害的田間發(fā)生規(guī)律 （1）三七灰霉病分級標準。在對三七灰霉病病葉觀測的基礎(chǔ)上，并參考人參等同科屬植物灰霉病的分級標準，將該病害的發(fā)生程度分為0～5個級別[15]：

0級，葉片無病斑；

1級，有少量針眼大小的黃色小斑，病斑面積占葉片面積的5%以下；

2級，形成中等數(shù)量不規(guī)則灰褐色水漬狀病斑，病斑面積占葉片面積的5%～10%以下；

3級，病斑擴大呈透明至灰褐色，水漬狀軟腐狀，占葉片面積的10%～20%以下；

4級，病斑透明至灰褐色，少數(shù)聚集成塊，病斑面積占葉片面積的20%～50%；

5級，病斑灰褐色，多數(shù)聯(lián)成大斑塊，病斑面積占葉片面積的50%以上。

（2）不同立地條件、不同生長年限三七灰霉病發(fā)生規(guī)律。2015年3月～12月份上旬三七生長季節(jié)，在靖西縣的祿垌、武平、新靖3地，在海拔及種植密度一致的條件下，調(diào)查旱地（農(nóng)田改造）、坡地（坡度約為15～200的杉木林改造）、林下（八角+杉木的混交林）3種立地條件下病害發(fā)生情況；并在立地條件一致的七園，調(diào)查不同生長年限三七（1年生、2年生、3年生）灰霉病的發(fā)生情況。具體做法是，2015年3月～12月份上旬每個月的10日分別在上述不同類型七園內(nèi)五點取樣，每點調(diào)查10株三七所有葉片灰霉病發(fā)生情況，根據(jù)上述分級標準，觀察、統(tǒng)計發(fā)生級別，計算病情指數(shù)；并根據(jù)靖西縣氣象局提供的數(shù)據(jù)，分析氣象因素與病害發(fā)生的關(guān)系。

病情指數(shù)=∑（各級病級代表值×該級病葉數(shù)）/（調(diào)查總?cè)~片數(shù)×發(fā)病最重級代表值）×100

1.2.5 室內(nèi)藥劑篩選 采用菌絲生長速率測定法[16]：根據(jù)各藥劑稀釋濃度的要求，稱取適量的藥劑加入到100 mL已融化并冷卻至50 ℃左右的PDA培養(yǎng)基中，制成帶毒平板，以不加藥劑的等量PDA平板為對照；用直徑為5 mm的打孔器在預(yù)培養(yǎng)的三七灰霉病病原菌落邊緣的同一圓周上打取菌餅，分別接種到上述培養(yǎng)基（PDA）平板中央，置于25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每處理3次重復(fù)；7、14 d后，分別用十字交叉法測量各處理的菌落直徑，并求出3次重復(fù)的平均值，得出各處理的平均菌落擴展直徑。用下述公式計算抑制率。

菌落擴展直徑（mm）= 菌落的平均擴展直徑（mm）-5菌餅直徑（mm）

相對抑制率=

■×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 田間癥狀及病原菌鑒定

該病害早期主要為害三七葉片，多始于葉尖，病斑最初為淡黃色針眼大小斑點，2～3 d后發(fā)展為淡褐色不規(guī)則水浸狀病斑，后呈“V”形向內(nèi)擴展。為害中期，受害葉主脈褪綠黃化，感病部位的葉綠素亦退去，呈水漬透明狀軟腐披垂（圖1-a）。隨著為害的加重，病葉隨之不斷向內(nèi)軟腐縮縊，發(fā)病整齊的田塊，葉片似被剪刀統(tǒng)一剪掉了1/3，容易脫落。發(fā)展至末期，整張葉片變成黑褐色，呈線條狀脫落。發(fā)病期間如遇到連續(xù)陰雨天氣，或田間濕度過大時，病斑上布滿灰色霉狀物，觸及便會呈現(xiàn)煙霧狀分散。三七的葉柄、莖桿亦受害，主要表現(xiàn)為黑褐色病斑且縊縮。9～11月份為三七花果期，此時氣候條件適宜灰霉病的發(fā)生，三七花序易受害，病部通常先呈水浸狀再逐漸變?yōu)榛液谏⑴で?，并使花軸容易脫落，受害果實先表現(xiàn)出淡黃色斑點，后期擴大成黑褐色病斑，濕度大也時常會出現(xiàn)灰黑色霉層。

經(jīng)分離、純化、回接、再分離，得致病菌株H-1，該病原菌在PDA上生長良好，菌落致密，灰色、絮狀，菌絲茂盛但較短，產(chǎn)孢后菌落表面呈粉狀（圖1-b）。分生孢子梗細長、直立、淡褐色，大小為（70.00～180.00）μm×（5.8～14.5）μm，有1～2次分枝，頂端膨大成球形，上面有許多小梗，分生孢子聚生成葡萄穗狀；分生孢子呈卵圓形或橢圓形，無色至灰色，單胞，大小為（6.0～11.5）μm×（6.2～12.0）μm（圖1-c）。結(jié)合病害癥狀、病原形態(tài)，參考有關(guān)資料，初步將其鑒定為灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea Pers.ex Fr.）。

采用通用引物ITS1/ITS4對H-1菌株的rDNA-ITS序列進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，得到1個大小約為500 bp的片段，經(jīng)序列測定，確定該片段全長451 bp（圖2）；將測序結(jié)果在GenBank中進行同源性分析可知，該病原菌株與（Botrytis cinerea）同源性達99%，結(jié)合形態(tài)鑒定結(jié)果確定該病原菌為灰葡萄孢菌（B. cinerea）[17]。

2.2 病原菌的生物學(xué)特性

2.2.1 不同溫度對菌絲生長、孢子萌發(fā)的影響

表1數(shù)據(jù)表明，三七灰霉病菌絲在5～28 ℃均可生長，適宜溫度為15～25 ℃，最適溫度為20 ℃；5～28 ℃溫度范圍內(nèi)均可產(chǎn)生孢子，適宜產(chǎn)孢溫度為15～20 ℃，最適產(chǎn)孢溫度為20 ℃；5～20 ℃溫度范圍內(nèi)孢子均可萌發(fā)，適宜的萌發(fā)溫度為20～25 ℃，最適萌發(fā)溫度為20 ℃。從研究結(jié)果來看，該菌株喜溫涼的環(huán)境，氣溫20 ℃左右利于菌絲生長、孢子的形成及萌發(fā)。

2.2.2 不同濕度對孢子萌發(fā)的影響 由表2可知，廣西三七灰霉病病原菌孢子在相對濕度為100%+水滴條件下，萌發(fā)率最高，為100.0%；相對濕度100%，萌發(fā)率為98.5%；90%的相對濕度條件下孢子不萌發(fā)?？梢?，該病原菌孢子的萌發(fā)需要較高的濕度條件。

2.3 病程及病斑顯癥率

2.3.1 不同生長年限三七對灰霉病菌病程的影響

從表3數(shù)據(jù)來看，灰霉病菌在廣西不同季節(jié)、不同生長年限三七的病程為5～13 d不等，但有一定的規(guī)律。首先相同種植年限的三七，10-11月份的病程短于其他調(diào)查月份，主要是因為此季節(jié)廣西西部山區(qū)氣溫冷涼，且時有降雨，適宜孢子的萌發(fā)侵染，故從孢子侵染到田間癥狀的表現(xiàn)所需時間較短。其次在相同季節(jié)，1年生三七的病程要短于2年生和3年生，2年生、3年生三七的病程基本相同，原因可能是幼齡的三七葉片對灰霉病菌的抵抗能力稍差，在溫濕度一致的情況下，病原菌從接觸、侵入到癥狀表現(xiàn)的過程較快。

2.3.2 不同保濕時間對三七灰霉病菌病程的影響

結(jié)果顯示（表4），在試驗時間2015年3月25日，正常情況下接種灰霉病菌到2年生三七，病程為10 d（CK）；接種后保濕8～12 h，病程為8 d；保濕24～36 h，病程為6 d；保濕48 h，病程為4 d。上述結(jié)果表明，接種后保濕時間越長，病程越短。分析原因是高濕度利于病原菌孢子的萌發(fā)侵染，這與2.2.2所述的結(jié)論一致，即該病原菌孢子的萌發(fā)需要較高的濕度條件。

2.3.3 田間病斑顯癥率 2015年4月5日起田間表現(xiàn)灰霉病典型病斑，2015年4月10日止病斑不再增加，可見，灰霉病的田間持續(xù)顯癥總共需要6 d。具體的逐日顯癥率、累計顯癥率見表5。顯癥前4 d，顯癥病斑數(shù)約占了80%；顯癥后2 d，病斑數(shù)約占20%。

2.4 三七灰霉病田間發(fā)生規(guī)律

從三七灰霉病季節(jié)發(fā)展曲線來看（圖3），3月～5月份各調(diào)查點病害病情指數(shù)為上升趨勢。3月份時，旱地、坡地、林下灰霉病的病情指數(shù)分別為18.4、13.5、8.5 ，5月份病情指數(shù)分別升至20.1、15.1、10.3；從曲線走勢來看，6月～8月份病情指數(shù)值均較低，處于曲線谷底部分，為全年田間發(fā)病較輕的季節(jié)；9月份，病情指數(shù)開始緩慢升高；10～11月份，病情指數(shù)較其他月份都要高，特別是11月份處于曲線峰面水平，為全年發(fā)生較嚴重的季節(jié)；12月份隨著氣溫的走低，且三七進入倒苗休眠期，病情指數(shù)呈下降趨勢。

針對病害周年發(fā)生情況，結(jié)合靖西縣氣象局提供的數(shù)據(jù)進行比較分析。結(jié)果顯示，靖西縣近3年（2013～2015年）9～12月份平均氣溫分別為24～27 ℃、20～25 ℃、16～20 ℃、10～15 ℃，氣溫冷涼，適宜灰霉病的發(fā)生，特別是10～11月份，平均氣溫16～25 ℃是灰霉病病菌最適宜的生長溫度，而且此時降水量為91～46 mm，遠遠高于1～4月份26～48 mm的降水量，溫度、降水均適宜灰霉病的發(fā)生，所以10～11月份為廣西灰霉病發(fā)病高峰期。2014年11月，廣西靖西化垌三七灰霉病大爆發(fā)，經(jīng)查看可知2014年該地區(qū)氣溫偏低（15～17 ℃），且連續(xù)14 d陰雨綿綿，所以在灰霉病易發(fā)期，要特別關(guān)注降雨情況，做好預(yù)防工作。

從圖3、4、5還可知，三七灰霉病的發(fā)生與立地條件、生長年限有一定的聯(lián)系。各調(diào)查點海拔基本一致，立地條件不同，病害發(fā)生程度有差異，旱地七園灰霉病的病情指數(shù)變化曲線在坡地和林下之上，即病害嚴重度要大于坡地和林下，而林下種植的三七病情指數(shù)曲線在三者中處于最低水平，即病害發(fā)生相對要輕，整體上表現(xiàn)為旱地>坡地>林下（圖3）。此外，同一調(diào)查點的三七園，七園邊緣的發(fā)病程度要輕于園內(nèi)（圖4），原因主要是在發(fā)病期七農(nóng)通常會掀開四周的帷帳，邊緣四周的通氣性要好，所以病害發(fā)生程度稍輕。圖5表明，生長年限越大的七園病害發(fā)生越嚴重，3年生>2年生>1年生，除了老園子存在病原積累的問題外，經(jīng)實地調(diào)查，認為原因主要是隨著植株生長年限的增加，枝條及葉片量增加，田間葉片茂密，通透性差，從而利于病害的傳播流行。而林下三七病害的發(fā)生要輕于旱地和坡地，一部分原因就是林下三七四周無帷帳圈蓋，通透性好?？梢?，通風(fēng)透氣對于灰霉病的發(fā)生有一定的控制作用。

2.5 室內(nèi)藥劑篩選

各供試藥劑對病原菌絲的生長抑制效果如表6所示。甲基托布津、多菌靈、腐霉利、異菌脲為早中期防治灰霉病的主打藥劑，從表中數(shù)據(jù)看，腐霉利藥后7 d的抑制率為97.50%、藥后14 d為96.31%，表現(xiàn)出較好的抑制作用，而其他3種藥劑的抑制率較低，約為50.00%～80.00%?？┚?、嘧菌環(huán)胺、嘧霉胺是近期用于防治灰霉病的3種主要藥劑，對廣西三七灰霉病菌絲生長具有較好的抑制效果，但有一定的差異，其中咯菌腈懸浮劑、嘧菌環(huán)胺對菌絲的生長抑制率達100.00%；嘧霉胺的抑制效果有所偏低，藥后7 d，抑制率為82.50%，14 d后，抑制率為92.11%。福美雙、代森錳鋅、百菌清是廣西七農(nóng)常用來防治三七灰霉病的藥劑，從表中試驗數(shù)據(jù)來看，福美雙藥后14 d抑制率為89.47%，有一定的抑制作用，而代森錳鋅、百菌清的抑制作用不佳。嘧菌酯、氟硅唑?qū)θ呋颐共”憩F(xiàn)出強的抑制作用且持效久，藥后7、14 d 抑制率均為100.00%。綜上試驗數(shù)據(jù)表明，在不同時期用于防治灰霉病的7種供試藥劑中，除了咯菌腈、嘧菌環(huán)胺仍具有較強的抑制作用外，三七灰霉病株對其他5種藥劑都產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，特別是對多菌靈、甲基在托布津表現(xiàn)出較強的抗藥性，藥后14 d室內(nèi)抑制率僅為56.84%和73.16%?？紤]到灰葡萄孢菌易產(chǎn)生抗藥性的特點，建議將咯菌腈、嘧菌環(huán)胺與嘧菌酯、氟硅唑等4種室內(nèi)抑制率達100.00%的藥劑輪換使用。

3 討論

經(jīng)形態(tài)鑒定并結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)可知，廣西三七灰霉病病原菌為灰葡萄孢菌（B. cinerea Pers.ex Fr.），與已有的報道結(jié)果一致[6]。該病原菌喜冷涼潮濕的生長環(huán)境，菌絲生長及孢子萌發(fā)的適宜溫度為15～20 ℃，100%的濕度條件利于孢子萌發(fā)。三七灰霉病在三七生長的各個階段都有不同程度的發(fā)生，3～8月份病害發(fā)生較輕，7～8月份發(fā)生最輕，而10～11月份為病害發(fā)生高峰期，此時，桂西北地區(qū)，氣候冷涼，如遇到降水過多或濕度過大，利于病害流行。

三七灰霉病的發(fā)生除了與外界溫濕度有密切相關(guān)性外，與立地條件及三七種植年限也有一定的聯(lián)系，旱地的發(fā)病程度要高于坡地和林下。旱地種植通常以遮陰網(wǎng)密封四周，除了通透性的原因外，還有就是靖西多地傳統(tǒng)種植煙草和蔬菜，煙草灰霉病和番茄灰霉病歷來就是2種嚴重的病害，本課題組將煙草及番茄灰霉病病株接種至健康三七上，都能成功侵染。筆者在調(diào)查中也發(fā)現(xiàn)，如果前茬或鄰作物為煙草、番茄、蔬菜等，三七灰霉病的發(fā)生則會更嚴重；而坡地和林下種植能大大減少病原的這一來源，所以發(fā)病相對較輕。

藥劑篩選試驗結(jié)果表明，三七灰霉病株對灰霉病防治藥劑存在不同程度的抗性，咯菌腈、嘧菌環(huán)胺與嘧菌酯、氟硅唑等藥劑對目前三七灰霉病具有較強的抑制作用，可作為田間防治的備選藥劑。但是灰霉病菌由于寄主范圍廣，繁殖快，遺傳變異大，適合度高，非常容易產(chǎn)生抗藥性[18]。為降低防治風(fēng)險，延長化學(xué)藥劑的使用壽命，一方面應(yīng)將不同類型的藥劑輪換使用，另外也可將不同類型農(nóng)藥合理混用，形成多位點作用機制，從而降低灰霉病抗藥性。另外，根據(jù)本研究結(jié)果優(yōu)化的立地條件，加強田間管理也能減輕病害的發(fā)生，如在有條件的地方可選擇林下或坡地種植，旱地種植盡量避開前茬或鄰作是煙草或蔬菜；加強園內(nèi)通風(fēng)，特別是在連續(xù)陰雨的天氣，應(yīng)掀開四周遮陰網(wǎng)以便通風(fēng)，并適當加強光照；最后應(yīng)加強三七灰霉病生防菌的研究和應(yīng)用，加強農(nóng)業(yè)防治、生物防治等多措施的綜合防治措施的應(yīng)用，避免單一措施導(dǎo)致的病菌抗藥性、農(nóng)藥殘留和環(huán)境污染等系列問題。

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