呂松琴，黃山，李曉非，資敏，張娟，施金麗(昆明市第三人民醫(yī)院檢驗科，昆明 650041)

·調(diào)查研究·

昆明地區(qū)健康成年人外周血T淋巴細胞亞群參考區(qū)間調(diào)查*

呂松琴，黃山，李曉非，資敏，張娟，施金麗
(昆明市第三人民醫(yī)院檢驗科，昆明 650041)

目的 建立昆明地區(qū)健康成年人的T淋巴細胞亞群參考區(qū)間。方法 用流式細胞術檢測昆明地區(qū)1 180例健康成年人外周血T淋巴細胞亞群并分析結果。結果 昆明市不同城區(qū)健康成年人外周血T淋巴細胞亞群分布差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。女性的CD3+/淋巴細胞(68.6±8.0)%、CD3+CD4+/淋巴細胞(36.6±6.8)%均高于男性CD3+/淋巴細胞(65.4±9.6)%、CD3+CD4+/淋巴細胞(33.8±7.8)%，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。各年齡組間除CD3+CD4+計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)外，其余6項T淋巴細胞亞群差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)；青年組CD3+、CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞高于中年組和老年組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但年齡的變化與CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞、CD3+CD4+/淋巴細胞、CD3+CD8+/淋巴細胞、CD4+/CD8+的相關性均無統(tǒng)計學意義(r=-0.173、0.206、0.154、0.219、0.02、0.077、0.234，P=0.000)。按性別或年齡段分別制定了相應的參考區(qū)間。結論 建立了昆明地區(qū)健康成年人外周血T淋巴細胞亞群參考區(qū)間，為今后云南省艾滋病及相關疾病的診斷、治療以及療效評價提供依據(jù)。

流式細胞術；T淋巴細胞亞群；參考區(qū)間

T淋巴細胞亞群分析是檢測細胞免疫和體液免疫功能的重要指標，能客觀反映機體當前的免疫功能和平衡水平，在自身免疫病、惡性腫瘤、病毒感染、免疫缺陷以及移植免疫等疾病的輔助診斷、發(fā)病機制分析、療效觀察及預后判斷方面具有重要的意義。國內(nèi)外學者研究證明，T淋巴細胞亞群分布受生態(tài)環(huán)境、社會經(jīng)濟等多種因素影響，不同地域、種族和性別間存在差異[1-2]。目前國內(nèi)尚無統(tǒng)一的T淋巴細胞亞群參考值，昆明地區(qū)也無相應的調(diào)查研究。本研究擬建立昆明地區(qū)健康成年人外周血T淋巴細胞亞群參考區(qū)間，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016年6至12月到云南省第二人民醫(yī)院體檢中心進行單位體檢的健康成年人1 180例，均為昆明市四城區(qū)常住人口，官渡區(qū)295例、西山區(qū)295例、盤龍區(qū)295例、五華區(qū)295例；男性687名，女性493名；年齡(44.6±15.0)歲。根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生和計劃生育委員會分類方法(18～44歲為青年組，45～64歲為中年組，≥65歲為老年組)，青年組667例，中年組378例，老年組135例。參考人群必須符合如下條件：(1)無現(xiàn)病史，無吸煙史，沒有任何影響檢測結果的生理指征；(2)未使用過對免疫系統(tǒng)有影響的藥物；(3)實驗室檢查：血細胞計數(shù)正常，心、肝、腎功能(血清膽紅素、乳酸脫氫酶、肌酸激酶、門冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶、尿素、尿酸、肌酐)檢測正常；(4)無免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病，無過敏現(xiàn)癥，無HIV、HBV、HCV、梅毒和其他急性傳染性疾病；(5)3個月內(nèi)無輸血和手術史；(6)婦女不在月經(jīng)期、妊娠期或哺乳期；(7)無酗酒史。本研究經(jīng)昆明市第三人民醫(yī)院倫理委員會審核通過，研究前向參考個體講述本研究的目的和實施方案，征得同意后并簽署知情同意書。

1.2 主要儀器和試劑 單克隆熒光抗體CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3-PC5、溶血素OptiLyse C、Flow-Count計數(shù)微球、Lymphosure質控品、稀釋液、Flow-Check Fluorospheres流式細胞儀光路與流路校準物、Beckman NaviosTMFlow Cytometer流式細胞儀均購自美國Beckman Coulter公司。

1.3 流式細胞術檢測外周血T淋巴細胞亞群 參考人群清晨空腹無菌采集靜脈血4 mL，EDTA-K2抗凝,24 h內(nèi)檢測。取流式試管，用反向加樣法加入100 μL抗凝全血；加入相對應的四色抗體10 μL，渦旋混勻，室溫避光放置15～20 min；取出試管，每管加入500 μL OptiLyse C，渦旋混勻，室溫避光放置10 min；取出試管，每管加入500 μL PBS，室溫平衡5 min；取出Flow-Count熒光微球，渦旋震蕩混勻10～12 s；以反向加樣法在試管中加入100 μL熒光微球；充分渦旋混勻，2 h內(nèi)上機檢測。每次開機用Flow-Check Fluorospheres對流式細胞儀進行光路與流路校準，記錄前向散射光(FS)和各熒光信號的半峰變異系數(shù)(HPCV)值，追蹤一定時間內(nèi)HPCV的變化，要求變異系數(shù)(CV)值控制在2%～3%，以確保儀器處于穩(wěn)定狀態(tài)，保證實驗的一致性和穩(wěn)定性。每天用Lymphosure質控品進行一次室內(nèi)質控，操作與樣本相同，以保證檢測結果的可靠性。

2 結果

2.1 不同城區(qū)健康成年人外周血T淋巴細胞亞群檢測結果比較 各組數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，采用單因素方差分析比較昆明市四城區(qū)健康成年人外周血T淋巴細胞亞群顯示，各城區(qū)CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞、CD3+CD4+/淋巴細胞、CD3+CD8+/淋巴細胞、CD4+/CD8+之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同城區(qū)健康成年人T淋巴細胞亞群比較

2.2 不同性別健康成年人外周血T淋巴細胞亞群檢測結果比較 男性、女性T淋巴細胞亞群數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，不同性別CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD8+/淋巴細胞、CD4+/CD8+之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但女性CD3+/淋巴細胞、CD3+CD4+/淋巴細胞均高于男性，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。見表2。

表2 不同性別健康成年人T淋巴細胞亞群比較

2.3 不同年齡組健康成年人外周血T淋巴細胞亞群檢測結果比較 不同年齡組CD3+、CD3+CD4+亞群檢測結果采用單因素方差分析，CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞、CD3+CD4+/淋巴細胞、CD3+CD8+/淋巴細胞、CD4+/CD8+方差差異有統(tǒng)計學意義，采用非參數(shù)Kruskal Wallis 檢驗，結果顯示，各年齡組間除CD3+CD4+差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)外，其余6項T淋巴細胞亞群差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)，見表3。各年齡組間CD3+采用Tukey法進行多重比較，CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞、CD3+CD4+/淋巴細胞、CD3+CD8+/淋巴細胞、CD4+/CD8+采用Tamhane法進行多重比較，結果顯示，青年組CD3+、CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞、CD3+CD8+/淋巴細胞高于中年組和老年組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；中年組CD3+/淋巴細胞高于老年組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；中年組與老年組之間CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD8+/淋巴細胞差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。老年組和中年組CD4+/CD8+高于青年組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；中年和老年組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。中年組CD3+CD4+/淋巴細胞高于青年組和老年組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；青年組和老年組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

由于不同年齡組之間T淋巴細胞亞群存在差異性，進行相關性分析，結果顯示年齡與CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞、CD3+CD4+/淋巴細胞、CD3+CD8+/淋巴細胞、CD4+/CD8+均無統(tǒng)計學相關性(r=-0.173、0.206、0.154、0.219、0.02、0.077、0.234，P=0.000)。

表3 不同年齡組健康成年人T淋巴細胞亞群比較

2.4 昆明市健康成年人外周血T淋巴細胞亞群參考區(qū)間建立 由于不同性別、不同年齡組T淋巴細胞亞群部分指標差異有統(tǒng)計學意義，因此按性別或年齡段分別制定相應的95%參考值范圍。見表4。

表4 昆明市健康成年人外周血T淋巴細胞亞群參考區(qū)間

3 討論

T細胞產(chǎn)生于胸腺，骨髓造血干細胞的T細胞前體在胸腺基質細胞和細胞因子的作用下，分化成有功能的T淋巴細胞，按其功能可分為3個亞群：輔助性T細胞、抑制性T細胞和細胞毒性T細胞。臨床上很多免疫缺陷病、腫瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、器官移植、接受放療或化療、使用激素等均可出現(xiàn)T淋巴細胞數(shù)量及功能的變化[3]。

調(diào)查結果表明，T淋巴細胞亞群分布受地域、性別、年齡的影響[4]。本實驗納入的參考人群超過1 000例，覆蓋了昆明市4個城區(qū)，可能由于生活環(huán)境、生活方式、飲食習慣相似，昆明市4個城區(qū)健康成年人T淋巴細胞亞群的分布差異無統(tǒng)計學意義。本實驗中男女間CD3+、CD3+CD4+絕對數(shù)差異無統(tǒng)計學意義，這與云南德宏州傣族人的調(diào)查結果[5]相似，與貴陽、北京地區(qū)不同[6-7]；男女間CD3+CD8+絕對數(shù)差異無統(tǒng)計學意義，與云南德宏州傣族人、北京地區(qū)[5-6]等不同，但女性CD3+/淋巴細胞、CD3+CD4+/淋巴細胞均高于男性。

除CD3+CD4+絕對數(shù)差異無統(tǒng)計學意義外，各年齡組CD3+、CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞、CD3+CD4+/淋巴細胞、CD3+CD8+/淋巴細胞、CD4+/CD8+均存在差異，差異有統(tǒng)計學意義，這與蘇寶珍等調(diào)查結果相似[5]。研究發(fā)現(xiàn)青年組CD3+、CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞、CD3+CD8+/淋巴細胞均高于中年組和老年組，青年組CD4+/CD8+低于老年組和中年組，差異有統(tǒng)計學意義。人體免疫功能隨著年齡增長呈現(xiàn)一定的變化，中老年人隨著年齡的增長，機體各種機能及物質代謝均有明顯改變，T淋巴細胞功能也隨之下降[8]，從而造成免疫系統(tǒng)平衡失調(diào)。同時研究發(fā)現(xiàn)CD3+、CD3+CD8+、CD3+/淋巴細胞、CD3+CD8+/淋巴細胞雖然不同年齡組間存在差異，但與年齡并無統(tǒng)計學相關性。

云南省是我國艾滋病高流行區(qū)之一，也是從2003年開始最早啟動抗病毒治療的省份之一。本研究建立昆明地區(qū)健康成年人外周血T淋巴細胞亞群參考區(qū)間，為今后預防、診斷AIDS、抗病毒治療以及療效評價提供更為有效、準確的科學依據(jù)。

本研究存在不足之處。首先，由于經(jīng)費原因沒有納入未成年參考人群進行比較分析。第二，沒有運用建立的昆明地區(qū)健康成年人外周血T淋巴細胞亞群參考區(qū)間與結核病、病毒性肝炎、艾滋病等相關疾病患者的T淋巴細胞亞群進行比較分析，我們將在后續(xù)的研究中，擴展參考區(qū)間的運用領域，體現(xiàn)其價值。

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(本文編輯：劉群)

昆明市科技計劃項目(2016-2-S-06467)。

呂松琴，1975年生，女，副主任技師，大學本科，主要從事傳染病免疫檢驗研究。

李曉非，主任技師,碩士,E-mail：lixiaofeicute@126.com。

10.13602/j.cnki.jcls.2017.04.21

R446.6

A

2017-01-10)