占少華

摘要：目的 探討覆盆子中椴樹苷和山奈酚含量測定方法及效果。方法 采用兩種不同的藥物含量提取方法對覆盆子中椴樹苷和山奈酚含量進(jìn)行測定。結(jié)果 不同提取方法覆盆子椴樹苷和山奈酚含量差異明顯。結(jié)論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果為建立覆盆子藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

關(guān)鍵詞：覆盆子；高效液相色譜法；椴樹苷；山奈酚；測定方法

覆盆子屬于薔薇科植物華東覆盆子（Rubus chingii Hu）的干燥果實(shí)，性溫、味甘，具有益腎固精縮尿、養(yǎng)肝明目等功效。同時，藥物還具有抗誘變、抗氧化、改善記憶、延緩衰老及提高機(jī)體免疫活性、抗炎、抑菌等藥理作用，可用于遺精滑精等癥狀的治療，還具有降血脂、降血糖等作用。目前，中國藥典對于覆盆子藥材的質(zhì)量控制方法并不完善，尚缺乏檢查和含量的測定項(xiàng)。為了保證藥物臨床使用的安全性，完善藥典相關(guān)空缺，本文對覆盆子中進(jìn)一步完善藥典，保證臨床用藥安全有效，對覆盆子中椴樹苷和山奈酚含量進(jìn)行測定，建立高效液相色譜法測定覆盆子中椴樹苷和山萘酚含量方法，報告如下。

1.儀器與材料

1.1實(shí)驗(yàn)儀器 SSI PC2000型高效液相色譜儀（美國科學(xué)系統(tǒng)公司）；EZChrom Elite Client/Server色譜工作站，ALl04電子天平（梅特勒一托利多儀器有限公司）。510二元汞，996二極管陣列檢測器。使用智能藥物檢測儀。純凈水、金黃膏（由我院自主研制）、甲醇一水（27：23）；色譜柱：Kromasfl C18柱流動相，色譜純、硫酸二化鈉、硫酸鈉，分析純。

1.2材料 覆盆子：江西德興，對照品：椴樹苷對照品（上海永恒生物科技有限公司）；山奈酚對照品（上海永恒生物科技有限公司）。

1.3方法

1.3.1供試品溶液制 備精確稱取定量覆盆子，采用粉碎機(jī)粉碎成細(xì)粉，并過60目篩。同時，稱取精密稱定1.5 g，置于圓底燒瓶中，精密加入已配制好的80%的甲醇30 ml，回流提取1h。放冷后稱定質(zhì)量，采用濃度為80%的甲醇補(bǔ)充減少質(zhì)量，混合均勻、濾過。

1.3.2對照品溶液的制備

1.3.2.1椴樹苷和山奈酚對照溶液的制備 精密稱取椴樹苷對照品9.98mg和山奈酚對照品11.84mg置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得含椴樹苷0.3992 mg/ml的對照品溶液。

1.3.3HPLC測定操作 前期準(zhǔn)備：開啟高效液相色譜儀后，排氣，排氣完成后，關(guān)上排氣閥，先用純甲醇沖洗色譜柱再用流動相沖洗色譜柱，待柱子平衡后開始進(jìn)樣；進(jìn)樣測定：逐一精密吸取對照品溶液及不同提取方案所得到的供試品溶液50 ul（定量環(huán)20 ul），注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖。

1.4色譜條件的選擇

1.4.1檢測波長的選擇 將上述獲得溶液等進(jìn)行全波長圖譜掃描，確定最大吸收波長。本次研究中，進(jìn)行三次全波長掃描，且最大波長為316 nm，最大吸收值為2.8，見表1。

色譜柱：Apollo C18（4.6 mmx250 mm，5 um），流動相：A相為乙腈，B相為0.1%磷酸水溶液，檢測過程中采用梯度洗脫程序進(jìn)行?？刂屏魉贋?.0 ml/min，檢測波長為346 nm，柱溫控制在30℃。進(jìn)樣量均為10 uL。

1.4.2色譜流動相比例的選擇 采用流動相甲醇-0.1%的磷酸水比例為55：45、52：48、50：50按進(jìn)行高效液相檢測，見圖1。

由此看出：當(dāng)甲醇濃度為0.1%的磷酸水=55：45時，分離效果不好，適當(dāng)調(diào)低甲醇的比例，保留時間延長，分離度增大；當(dāng)甲醇：0.1%的磷酸水=52：48時分離效果較好，再減小甲醇比例，分離效果變化不大，但保留時間延長較大。因此，選用甲醇：0.1%的磷酸水=52：48作為流動相。

1.4.3色譜條件的確定 覆盆子的HPLC含量測定條件為：高效液相色譜儀（Agflentl260，uv檢測器）；色譜柱（C18，5 um，200×4.6 mm）；流動相：甲醇-0.1%的磷酸水=52：48；檢測波長：366 nm；柱溫：25℃；流速1 ml/min。

1.5提取工藝的考察

1.5.1提取溶媒的考察 精密稱取覆盆子粉末（過60目篩）1.5 g兩份，置錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入80%甲醇25 ml、80%乙醇25 m1，稱重，回流提取1 h，取出，放至室溫后，再稱定重量，用所用的溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾。取續(xù)濾液用0.45um微孔濾膜過濾，制得供試品溶液，吸取20ul測定峰面積。

由此看出：乙醇的回流提取效果不如甲醇回流提取效果好，故采用甲醇作為提取溶劑。用甲醇回流方法提取的峰面積比超聲方法大，故選用回流提取方法。

1.6含量測定 標(biāo)準(zhǔn)品測定：取混合標(biāo)準(zhǔn)品椴樹苷（0.11976mg/m1）山奈酚（0.02368 mg/m1）進(jìn)行峰面積的測定，見圖3。平均峰面積分別為椴樹苷2388.4，山奈酚2188.2。

樣品測定：取德興覆盆子粉末，過60目篩。取約1.5 g，精密稱定。置于圓底燒瓶中，精密加入已配制好的80%的甲醇30 ml，稱定質(zhì)量，回流提取1 h。放冷后稱定質(zhì)量，用80%的甲醇補(bǔ)充減少的質(zhì)量，混勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品的溶液，見圖4。

由此看出：平均峰面積分別為椴樹苷493.8，山奈酚141.5。得出：德興覆盆子中椴樹苷和山奈酚的含量分別為0.4933 mg/g，0.0302 mg/g。

3.討論

覆盆子是臨床上常用的一線中藥，藥物作用相對較多，但是對于其質(zhì)量控制尚缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。本次研究中，采用甲醇-0.1%的磷酸水（55：45）時，分離度并不是很好，所以嘗試減小甲醇的比例，發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲醇-0.1%的磷酸水（52：48）時，椴樹苷和山奈酚的分離度都較好，故選用甲醇-0.1%的磷酸水（52：48）作為流動相。通過全波長掃描確定最佳波長366nm。由上述單因素實(shí)驗(yàn)選定，覆盆子的提取條件為：30 ml80%甲醇在80℃條件下回流提取1 h。通過上述研究測定，最終得出以下結(jié)果：德興覆盆子中椴樹苷和山奈酚的含量分別為0.4933 mg/g，0.0302 mg/g。

高效液相色譜法測定結(jié)果顯示：不同地區(qū)生長的覆盆子中椴樹苷和山奈酚含量差異較大，其中以德興地區(qū)的覆盆子中椴樹苷、山奈酚含量最高。所以有必要對覆盆子的種植進(jìn)行規(guī)范化處理，完善質(zhì)量監(jiān)管機(jī)制。