周嫚 米海峰 劉文斌 王凱周 蔣廣震

摘要：探討甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴脂肪代謝的調(diào)控作用，開(kāi)發(fā)魚(yú)類(lèi)適用的脂肪調(diào)控劑。在尾質(zhì)量為（100.55±021）g的團(tuán)頭魴飼料中添加甘草提取物，以考察其對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)、體組成、脂肪沉積的影響。采用水提醇沉法從甘草根中提取甘草提取物。選取240尾團(tuán)頭魴1齡魚(yú)，隨機(jī)置于12個(gè)網(wǎng)箱中，每箱20尾。分別將甘草提取物以0、0.3、06 g/kg（以甘草次酸含量計(jì)分別為0、6.42、12.84 mg/kg）加入到3組飼料中，飼喂8周。結(jié)果顯示，飼料添加甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴的增質(zhì)量率、特定生長(zhǎng)率、餌料系數(shù)均沒(méi)有顯著影響（P>0.05）。甘草提取物可降低試驗(yàn)魚(yú)的臟體比、肝體比、腹脂率，可顯著降低肝臟和肌肉的脂肪含量（P<0.05），但對(duì)胴體率、全魚(yú)體組成無(wú)顯著影響（P>0.05）。各試驗(yàn)組的血漿甘油三酯TG、總膽固醇TC、游離脂肪酸NEFA、高密度脂蛋白膽固醇HDL-C含量均顯著低于對(duì)照組（P<0.05），但各添加組之間無(wú)顯著差異（P>0.05），低密度脂蛋白膽固醇LDL-C的含量隨著甘草提取物添加量的增加而顯著升高（P<0.05）。研究結(jié)果表明，甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，在魚(yú)體的血液、肝臟、肌肉中均體現(xiàn)出一定的降脂作用，這可能與甘草提取物中降脂活性成分有關(guān)。

關(guān)鍵詞：團(tuán)頭魴；甘草提取物；生長(zhǎng)性能；體組成；脂肪沉積

中圖分類(lèi)號(hào)： S963.73文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2017）06-0147-04

脂肪作為一種能量來(lái)源，在魚(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)中起著重要作用，可提供必需脂肪酸和磷脂[1]。隨著集約化養(yǎng)殖的發(fā)展，脂肪節(jié)約蛋白效應(yīng)得到了廣泛應(yīng)用。生產(chǎn)上往往通過(guò)適當(dāng)提高飼料中的脂肪水平來(lái)滿足魚(yú)類(lèi)對(duì)能量的需求，從而增加產(chǎn)量并降低養(yǎng)殖成本。然而，脂肪等能量物質(zhì)的過(guò)度攝入可能導(dǎo)致肝臟及其他組織中脂肪的過(guò)度沉積，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)發(fā)展為脂肪肝，繼而影響魚(yú)體的健康。養(yǎng)殖密度增加、水體環(huán)境惡化、飼料營(yíng)養(yǎng)水平不均衡等均易導(dǎo)致團(tuán)頭魴養(yǎng)殖過(guò)程中肝臟脂肪化、內(nèi)臟脂肪沉積量增加，造成生產(chǎn)中營(yíng)養(yǎng)性肝膽綜合征等的多發(fā)[2-4]。

傳統(tǒng)中草藥在改善動(dòng)物生理代謝過(guò)程中扮演著較為重要的角色。甘草作為我國(guó)重要的中草藥藥材，被廣泛應(yīng)用于煙草、食品、化妝品、制藥工業(yè)等，且遍布全球[5]。甘草性平味甘，在臨床上具有多種藥理功效，如抗炎癥、抗氧化、抗過(guò)敏、保肝等作用[6-7]。甘草酸是甘草的主要活性物質(zhì)，其在體內(nèi)代謝為甘草次酸而發(fā)揮作用。He等研究發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬飼料中添加甘草次酸可顯著改善仔豬的生產(chǎn)性能[8]。Xu等研究表明，甘草酸可增強(qiáng)大黃魚(yú)（Larimichthys crocea）的免疫能力，并改善其生長(zhǎng)[9]。王文博等研究發(fā)現(xiàn)，甘草提取物對(duì)鯽的免疫功能和抗應(yīng)激能力具有良好的調(diào)節(jié)作用[10-11]。Jiang等研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加甘草次酸可降低斑點(diǎn)叉尾（Ictalurus punctatus）腹腔內(nèi)臟團(tuán)的脂肪沉積[12-13]。筆者所在實(shí)驗(yàn)室前期針對(duì)團(tuán)頭魴的研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加甘草次酸純品（98%）可降低團(tuán)頭魴肝臟、腹脂、肌肉等組織中的脂肪沉積[14]。甘草次酸對(duì)動(dòng)物體脂肪代謝的調(diào)控作用越來(lái)越受到重視。然而，藥用甘草次酸純品的價(jià)格無(wú)優(yōu)勢(shì)，導(dǎo)致其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的直接應(yīng)用受到了限制，而甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴的相關(guān)作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)擬采用傳統(tǒng)水提醇沉法，從甘草根中提取粗提物，應(yīng)用經(jīng)典營(yíng)養(yǎng)學(xué)理論研究其在團(tuán)頭魴上的應(yīng)用效果，為魚(yú)類(lèi)脂肪代謝調(diào)控劑的開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）別稱武昌魚(yú)，屬于草食性淡水魚(yú)，在中國(guó)被廣泛養(yǎng)殖。與其他養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)相比，養(yǎng)殖過(guò)程中團(tuán)頭魴常出現(xiàn)肝臟、腹腔脂肪過(guò)度沉積，導(dǎo)致抗應(yīng)激能力下降，從而影響其生長(zhǎng)與健康，也為團(tuán)頭魴的起捕和運(yùn)輸帶來(lái)巨大困擾。鑒于以上原因，本試驗(yàn)對(duì)甘草根進(jìn)行提取，并將甘草提取物添加到飼料中進(jìn)行投喂，以探究甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴脂代謝的影響。

1材料與方法

1.1甘草提取物的制備

本試驗(yàn)采用水提醇沉法對(duì)甘草進(jìn)行提取，參照文獻(xiàn)[15]并加以改進(jìn)。將甘草片（購(gòu)于藥房）置于8倍體積含氨 0.50% 的10%乙醇溶液中，于80 ℃下水浴回流提取，然后進(jìn)行抽濾取濾液，并將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中真空濃縮至原體積的12.5%。在磁力攪拌器劇烈攪拌的條件下滴加稀釋過(guò)的硫酸（濃硫酸 ∶超純水體積比1 ∶1），并用pH計(jì)將溶液pH值調(diào)節(jié)至1.5～2.0，靜置3 h，減壓過(guò)濾，用水洗滌濾餅使其pH值達(dá)到3.5～4.0，真空干燥得到甘草提取物，研磨成粉，于 4 ℃ 下保存。參考劉翠哲等的方法[16]，采用全自動(dòng)高效液相色譜法檢測(cè)得到甘草提取物中甘草次酸的含量為2.14%。

1.2試驗(yàn)飼料

本試驗(yàn)以魚(yú)粉、豆粕、棉粕、菜粕、魚(yú)油、豆油、面粉、麩皮、復(fù)合預(yù)混料、磷酸二氫鈣配制成等氮等能的基礎(chǔ)飼料（表1）。分別在基礎(chǔ)飼料中添加0、0.3、0.6 g/kg的甘草提取物，折算成甘草次酸含量分別為0、6.42、12.84 mg/kg。將各種原料按配方所需進(jìn)行稱質(zhì)量、粉碎，逐級(jí)混勻后采用小型制粒機(jī)制成粒徑約為2 mm的沉性顆粒料，常溫晾干后置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3飼養(yǎng)管理

本試驗(yàn)于南京農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)教學(xué)科研基地進(jìn)行，試驗(yàn)開(kāi)始前將團(tuán)頭魴暫養(yǎng)于池塘大網(wǎng)箱中，并用商品飼料進(jìn)行馴化。暫養(yǎng)1周后，選擇活力穩(wěn)定、規(guī)格整齊、質(zhì)量為（100.55±0.21）g的團(tuán)頭魴240尾，并將其隨機(jī)分為3組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾。試驗(yàn)于12個(gè)網(wǎng)箱中開(kāi)展，網(wǎng)箱規(guī)格為2.0 m×1.0 m×1.2 m。分別用添加了0、0.3、0.6 g/kg甘草提取物的3組飼料投喂8周。每天分別于07：00、11：30、16：00 投喂3次，根據(jù)各網(wǎng)箱全部魚(yú)體質(zhì)量的3%～5%確定日投喂量。每天測(cè)定網(wǎng)箱內(nèi)的水溫、溶解氧、pH值。保持池塘內(nèi)有微流水，定期清洗網(wǎng)箱以確保網(wǎng)箱內(nèi)外水質(zhì)良好。養(yǎng)殖期間將條件保持在水溫（29±2）℃、溶解氧大于3.9 mg/L、pH值7.1～7.6。

1.4樣品制備

飼養(yǎng)8周后，以網(wǎng)箱為單位統(tǒng)計(jì)每個(gè)網(wǎng)箱中魚(yú)的尾數(shù)，并稱量魚(yú)的總質(zhì)量。每箱隨機(jī)取魚(yú)5尾，分別稱量個(gè)體質(zhì)量并測(cè)量體長(zhǎng)，用質(zhì)量濃度為100 mg/L的MS-222麻醉。尾靜脈采血并置于預(yù)先制備好的肝素抗凝管中，靜置，于4 ℃、3 000 r/min 條件下離心10 min，取上清血漿樣品。取3尾魚(yú)，在冰盤(pán)上解剖并分離出肝胰臟、腹脂，另取3尾分離得到內(nèi)臟團(tuán)和胴體。采用4 ℃預(yù)冷的生理鹽水分別清洗各組織，用濾紙吸干水分，稱量?jī)?nèi)臟團(tuán)質(zhì)量、肝胰臟質(zhì)量、腹脂質(zhì)量、胴體質(zhì)量，計(jì)算臟體比、肝體比、腹脂率、胴體率。將所得肝臟、腹脂、肌肉樣品均置于-20 ℃冰箱中保存待測(cè)。

1.5測(cè)定指標(biāo)及方法

生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)的計(jì)算公式如下。增質(zhì)量率=（末均質(zhì)量-初始均質(zhì)量）/初始均質(zhì)量×100%；特定生長(zhǎng)率=（ln末均質(zhì)量-ln初始均質(zhì)量）/養(yǎng)殖天數(shù)×100%；飼料系數(shù)=投餌量/（末均質(zhì)量-初始均質(zhì)量）；臟體比=內(nèi)臟質(zhì)量/全魚(yú)質(zhì)量×100%；肝體比=肝臟質(zhì)量/全魚(yú)質(zhì)量×100%；腹脂率=腹脂質(zhì)量/全魚(yú)質(zhì)量×100%；胴體率=胴體質(zhì)量/全魚(yú)質(zhì)量×100%；肥滿度（g/cm3）=魚(yú)體質(zhì)量/魚(yú)體長(zhǎng)3。

飼料、全魚(yú)水分含量采用105 ℃烘干法測(cè)定，粗蛋白質(zhì)含量采用FOSS KT260型凱氏定氮儀測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏抽提法測(cè)定，粗灰分含量采用550 ℃灼燒法測(cè)定，總能采用Parr 1281型氧彈測(cè)熱儀測(cè)定。肌肉、肝臟的脂肪含量參照Folch等的氯仿-甲醇抽提法[17]進(jìn)行測(cè)定。

1.6數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA），并用Duncans多重比較法分析試驗(yàn)結(jié)果間的差異，差異顯著水平設(shè)定為α=0.05。

2結(jié)果與分析

2.1甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)性能和形體指標(biāo)的影響

飼料中添加甘草提取物后，各試驗(yàn)組之間的初始均質(zhì)量、末均質(zhì)量、增質(zhì)量率、餌料系數(shù)、特定生長(zhǎng)率均無(wú)顯著差異（P>0.05）（表2）。各添加組的臟體比、肝體比、腹脂率、肥滿度均低于對(duì)照組，添加0.3、0.6 g/kg甘草提取物組的肝體比、臟體比顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；添加0.6 g/kg甘草提取物組的肥滿度顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；各組之間的胴體率均無(wú)顯著差異（P>0.05）（表3）。

2.2甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴體組成及肝臟、肌肉脂肪含量的影響

飼料中添加甘草提取物后，全魚(yú)粗脂肪含量有所下降，但整體來(lái)看對(duì)全魚(yú)體組成無(wú)顯著影響（P>0.05）。試驗(yàn)組飼料

中添加甘草提取物后，肝臟脂肪含量與對(duì)照組相比顯著下降（P<0.05），其他各組間的肝臟脂肪含量沒(méi)有顯著差異（P>0.05）（表4）。各添加組的肌肉脂肪含量均顯著低于對(duì)照組（P<0.05），但各添加組之間無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.3甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴血脂的影響

飼料中添加甘草提取物后，各組的血漿甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、游離脂肪酸（NEFA）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量均顯著低于對(duì)照組（P<0.05），但各添加組之間的TG、TC、NEFA含量無(wú)顯著差異（P>0.05）。低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量隨著甘草提取物添加量的增加而顯著升高（P<0.05）（表5）。

3結(jié)論與討論

3.1甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)性能、體組成的影響

甘草及其提取物作為中草藥免疫調(diào)控劑被廣泛應(yīng)用于人和動(dòng)物。He等在仔豬飼料中添加甘草次酸，顯著提高了仔豬的增質(zhì)量率[8]。在水產(chǎn)動(dòng)物中，甘草提取物可提高凡納濱對(duì)蝦[18]、鱖[19]、刺參[20]的生產(chǎn)性能。但Xu等在大黃魚(yú)飼料中添加甘草酸后，增質(zhì)量率無(wú)顯著差異[9]。Jiang等在斑點(diǎn)叉尾的研究中發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加0.3～0.6 mg/kg甘草次酸顯著提高了采食量，但對(duì)生長(zhǎng)無(wú)顯著影響；0.9 mg/kg甘草次酸使試驗(yàn)魚(yú)的增質(zhì)量率下降[12-13]。肖文權(quán)研究表明，在番鴨飼糧中添加甘草提取物能夠極顯著提高番鴨的平均日增質(zhì)量[21]。張瑞等研究發(fā)現(xiàn)，將甘草殘?jiān)鳛轱暳咸砑觿┛娠@著提高番鴨的生產(chǎn)性能[22]。陳效儒等研究表明，飼料中添加甘草酸可提高刺參養(yǎng)殖的產(chǎn)量[23]。張洪玉等研究表明，飼料中添加甘草能夠促進(jìn)鱘生長(zhǎng)[24]。本研究結(jié)果表明，在飼料中添加甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)沒(méi)有促進(jìn)作用，但也不會(huì)影響其生長(zhǎng)，此結(jié)論與Xu等[9]、Jiang等[12-13]、蔡?hào)|森等[14]的研究結(jié)論相似。這可能是甘草次酸的促進(jìn)氨基酸代謝[25]、增強(qiáng)免疫[20]、降低脂肪沉積[26]、調(diào)節(jié)激素分泌[27]等多種作用共同發(fā)生所導(dǎo)致，可能與試驗(yàn)環(huán)境、試驗(yàn)動(dòng)物、添加劑量等有關(guān)。

3.2甘草提取物對(duì)團(tuán)頭魴魚(yú)體脂肪沉積的影響

脂肪是魚(yú)體內(nèi)的重要貯能物質(zhì)，其吸收、合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存、分解供能處于平衡狀態(tài)。過(guò)多脂類(lèi)、糖類(lèi)等能量物質(zhì)的攝入以及環(huán)境因子的變化均會(huì)導(dǎo)致肝臟中的過(guò)度沉積，不利于水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)，并降低魚(yú)類(lèi)的抗應(yīng)激能力。在人體上的研究表明，外敷甘草次酸能夠有效促進(jìn)脂肪分解并降低脂肪沉積[20，25]。Wu等對(duì)試驗(yàn)大鼠飼喂甘草次酸，結(jié)果顯示，添加甘草次酸組的肝臟脂肪含量顯著低于未添加甘草次酸的對(duì)照組，并推測(cè)該作用可能是由于甘草次酸促進(jìn)了線粒體中脂肪酸的氧化過(guò)程[28]。蔡?hào)|森等研究表明，飼料中添加0.30～0.45 g/kg 的甘草次酸可降低團(tuán)頭魴內(nèi)臟中脂肪的沉積[14]。Jiang等對(duì)斑點(diǎn)叉尾的研究發(fā)現(xiàn)，甘草次酸通過(guò)調(diào)控魚(yú)體皮質(zhì)醇含量促進(jìn)脂肪分解[13]。本研究結(jié)果表明，在飼料中添加甘草提取物可顯著降低團(tuán)頭魴肝臟及肌肉的脂肪含量，這與上述已有研究相符合，表明使用甘草提取物取代甘草次酸純品同樣能夠達(dá)到降脂效果。然而甘草中活性成分能夠降低肝臟脂肪含量的機(jī)制尚不明確，可能的原因有：甘草次酸促進(jìn)了肝臟脂肪酸在線粒體中的氧化分解[28]，從而增加了脂肪分解功能的消耗；甘草次酸通過(guò)提高動(dòng)物體內(nèi)皮質(zhì)醇水平，增強(qiáng)了動(dòng)物體的分解代謝，最終促使脂肪含量降低[29-30]。此外，本研究結(jié)果還表明，甘草提取物可降低團(tuán)頭魴的臟體比、肝體比、腹脂率；在對(duì)斑點(diǎn)叉尾的研究中也發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加甘草次酸顯著降低了魚(yú)體的肝體比、臟體比、腹脂率[12]，這可能與內(nèi)臟團(tuán)整體脂肪含量的降低有關(guān)?；谝陨辖Y(jié)果推測(cè)，甘草提取物因含有效成分甘草次酸而具有減少魚(yú)體脂肪沉積的作用。

血液是魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及代謝產(chǎn)物的運(yùn)輸載體，血脂水平可反映機(jī)體脂肪的代謝情況。動(dòng)物體內(nèi)血脂的異常在脂肪肝早期具有重要診斷意義，而魚(yú)類(lèi)血脂水平的變化也與魚(yú)類(lèi)肝臟脂肪化具有極大的相關(guān)性[31]。高密度脂蛋白（HDL）是血液中膽固醇的清理者，攜帶膽固醇后形成HDL-C；低密度脂蛋白（LDL）則以與前者相反的方向輸送膽固醇，攜帶后形成LDL-C，血液中的LDL-C是血漿中主要攜帶總膽固醇（TC）的載脂蛋白[32]。本試驗(yàn)在飼料中添加甘草提取物后，試驗(yàn)組的甘油三酯、總膽固醇、游離脂肪酸、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量均顯著降低，低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量則顯著升高。根據(jù)2種脂蛋白的作用，血液中HDL-C含量降低、LDL-C含量升高意味著膽固醇從血液進(jìn)入到肝臟中的量減少，與此同時(shí)由肝臟向血液輸送的膽固醇增多，因此LDL攜帶膽固醇形成LDL-C的含量增多，最后通過(guò)二者的相互調(diào)節(jié)，導(dǎo)致血液中的總膽固醇含量降低。孟富敏等研究表明，甘草次酸鈉可使動(dòng)物血脂明顯降低[33]?？梢?jiàn)，甘草提取物具有較強(qiáng)烈的降血脂作用，甘草次酸可能通過(guò)這種作用降低了血漿脂肪含量，抑制了脂肪的轉(zhuǎn)運(yùn)，減少了脂肪在內(nèi)臟組織中的沉積。

甘草提取物能夠起到調(diào)節(jié)脂肪代謝的作用，對(duì)團(tuán)頭魴的生長(zhǎng)無(wú)顯著影響，但可通過(guò)調(diào)節(jié)血脂來(lái)影響團(tuán)頭魴體內(nèi)的脂肪代謝，從而起到一定的降脂作用。

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doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2017.06.039