朱萬燕++徐文遠(yuǎn)++楊曉玉

摘 要：建立了食品中7類獸藥殘留的定性篩查檢測(cè)方法。樣品采用QuEChERS方法進(jìn)行前處理（乙腈提取，Al2O3吸附劑凈化），采用超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（UPLC-Q-TOF MS）檢測(cè)，以化合物的色譜保留時(shí)間和精確質(zhì)量數(shù)定性，在Target MS/MS采集模式下，通過碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)進(jìn)一步確證化合物。該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏，適用于食品中多種獸藥殘留的同時(shí)定性篩查。

關(guān)鍵詞：食品 多類獸藥殘留 數(shù)據(jù)譜庫 篩查 確證 QuEChERS UPLC-Q-TOF MS

中圖分類號(hào)：S859.84 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-098X（2017）02（a）-0051-02

近年來，獸藥的過量和違禁使用不可避免地引起動(dòng)物源性食品中獸藥殘留，危害消費(fèi)者身體健康，這使得人們對(duì)于食品中獸藥殘留這一問題越來越關(guān)注?，F(xiàn)在的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)主要是分種類檢測(cè)[1-3]，方法費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，現(xiàn)在分析人員開始嘗試多類獸藥同時(shí)檢測(cè)分析[4，5]。該文擬建立目前常用的7類獸藥殘留（磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、硝基咪唑類、大環(huán)內(nèi)酯類、β-內(nèi)酰胺類、三苯甲烷類）的同時(shí)檢測(cè)方法。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 6530B Accurate-mass Q-TOF LC/MS；分離柱：ZORBAX SB-C18；凈化粉：C18、PSA、NH2、中性Al2O3、PAX、PCX、PEP、GCB；純水機(jī)：美國(guó)Millipore。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確稱取適量的標(biāo)準(zhǔn)品于容量瓶中，用甲醇溶解定容，得到1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，待用。上機(jī)標(biāo)準(zhǔn)溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3 樣品前處理

稱取上述制備好的樣品4.0 g，于50 mL離心管中，加入提取液（12 mL乙腈），超聲波振蕩提取2 min，9 000 r/min均質(zhì)提取1 min，9 000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中；另取一50 mL離心管加入15 mL乙腈，洗滌勻漿刀頭10 s，洗滌液移入前一離心管中，用玻璃棒搗碎離心管中的沉淀，超聲波振蕩提取2 min，9 000 r/min離心5 min，上清液合并至50 mL離心管中，待凈化。在上清液中加入500 mg中性氧化鋁粉，充分振蕩，以盡可能多得除去提取液中的干擾性雜質(zhì)，最后取上清液濃縮、定容，待上機(jī)測(cè)定。

1.4 儀器工作條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18，3.5 μm，100×2.1 mm；流動(dòng)相：有機(jī)相為乙腈，水相為0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL。

Ion Source：ESI+；Capillary：4 000 V；Nebulizer：35 psi；Drying Gas Temp：325 ℃；Drying Gas：10 L/min；Sheath Gas Temp：325 ℃；Sheath Gas：11 L/min。

2 結(jié)果與討論

2.1 定性測(cè)定

在上述色譜、質(zhì)譜條件下測(cè)定待測(cè)樣液，LC-Q-TOF-MS在MS模式下進(jìn)行一級(jí)全掃描，獲得MS全掃描數(shù)據(jù)。通過樣品中化合物的實(shí)測(cè)分子量、保留時(shí)間與TOF數(shù)據(jù)庫中的精確質(zhì)量數(shù)及保留時(shí)間匹配，在質(zhì)量精確度絕對(duì)值小于10 ppm，保留時(shí)間偏差在0.3 min之內(nèi)，且得分≥70時(shí)，可初步確定為疑似獸藥，待由Q-TOF進(jìn)一步確證。

對(duì)于TOF數(shù)據(jù)庫偵測(cè)疑似獸藥，需要進(jìn)行Q-TOF數(shù)據(jù)庫的核查確證。在Q-TOF方法條件下，對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行再次測(cè)定，獲得樣品碎片離子全掃描信息，經(jīng)過與Q-TOF數(shù)據(jù)譜庫中的碎片離子信息檢索比對(duì)，得到二級(jí)檢索得分和對(duì)應(yīng)的化合物，對(duì)于檢索得分≥70的化合物被確證為目標(biāo)獸藥。對(duì)于檢索得分<70的化合物通過背景扣除來降低雜質(zhì)離子對(duì)檢索的影響；對(duì)于仍不能達(dá)到得分要求的化合物需對(duì)比其主要碎片離子，若有兩個(gè)或兩個(gè)以上的主要碎片離子匹配，則可確證為目標(biāo)獸藥。

2.2 提取方式的選擇

實(shí)驗(yàn)比較了振蕩、超聲和均質(zhì)三種提取方式對(duì)提取效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，均質(zhì)提取取得了最好結(jié)果，所有待測(cè)化合物的平均回收率為85.6%，振蕩和超聲都不利于動(dòng)物組織樣品的充分分散，其回收率結(jié)果均低于均質(zhì)提取。

2.3 凈化時(shí)間和凈化方式的選擇

對(duì)樣品凈化所需的振蕩時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化，比較5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min的凈化效果及目標(biāo)化合物的平均回收率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，幾個(gè)不同的振蕩時(shí)間對(duì)提取液的凈化效果及目標(biāo)化合物的平均回收率無明顯影響，從縮短分析時(shí)間和提高分析效率方面考慮，初步確定振蕩時(shí)間為5 min。

比較振蕩和渦旋兩種凈化方式的凈化效果，具體方法如下：比較渦旋1 min、2 min、3 min、4 min與振蕩5 min的凈化效果及目標(biāo)化合物的回收率。結(jié)果表明，除渦旋1 min的樣品凈化效果差，回收率較低外，其余凈化方式的凈化效果與目標(biāo)化合物的回收率無明顯差別?？紤]到批量樣品量的測(cè)定，樣品單獨(dú)進(jìn)行渦旋凈化反而增加總的分析時(shí)間，將所有樣品提取液同時(shí)進(jìn)行振蕩凈化可以節(jié)約時(shí)間。因此，最終確定凈化方式為振蕩凈化5 min。

2.4 方法的線性和檢出限

采用不含待測(cè)物質(zhì)的空白基質(zhì)溶液稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，根據(jù)化合物的性質(zhì)配制成不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，上LC-Q-TOF-MS儀測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。當(dāng)信噪比等于3（S/N=3）時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，即為化合物的檢出限（LOD）。實(shí)驗(yàn)表明，待測(cè)物質(zhì)的線性范圍為0.25～2 000 μg/kg，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，LOQ為0.5～100 μg/kg。

2.5 方法的回收率和精密度

采用空白樣品做基質(zhì)，添加高、中、低3個(gè)濃度水平進(jìn)行回收率和精密度實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度水平平行做6次，計(jì)算所測(cè)化合物的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。實(shí)驗(yàn)表明，7類化合物的回收率均在66.2%～104.3%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.2%～15.1%，說明方法的準(zhǔn)確度好。

3 結(jié)語

該文建立的用于獸藥殘留分析的QuEChERS-超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)，相較于傳統(tǒng)的檢測(cè)技術(shù)，具有經(jīng)濟(jì)、環(huán)保、簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)，適用于食品中多種獸藥殘留的同時(shí)檢測(cè)分析，可以滿足批量樣品快速分析的需求。

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