孫 峰 張 靜 張永娟 梅 倩 昝麗娜 劉廣印

慢性阻塞性肺疾病急性加重患者中病原體的檢測(cè)分析

孫 峰 張 靜 張永娟 梅 倩 昝麗娜 劉廣印

目的 探究呼吸道病原體在慢性阻塞性肺疾病急性加重患者中的感染情況。方法 回顧性分析2015年5月～2016年4月住院478例慢性阻塞性肺疾病急性加重患者，應(yīng)用間接免疫熒光法（IFA）檢測(cè)病毒（流感病毒A/B、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒）和非典型病原體（嗜肺軍團(tuán)菌、肺炎支原體、肺炎衣原體）8種呼吸道病原體IgM抗體，并進(jìn)行痰培養(yǎng)細(xì)菌學(xué)鑒定。結(jié)果 患者呼吸道病原體檢測(cè)總感染率為78.0%（373/478），病原體分類感染組合以單類病原體感染為主占41.2%（197/478），病毒類感染居多（占58.4%），病原體多重感染占58.7%（219/373），較單一感染多，其中流感病毒B、肺炎支原體、嗜肺軍團(tuán)菌、流感病毒A和念珠菌位于總陽(yáng)性率和單一病原體感染者的前列；感染者中男性占54.7%（204/478），男性以單一感染為主63.0%（97/154），女性以2個(gè)或以上病原體的多重感染為主51.1%（112/219），病毒和非典型病原體的感染在性別間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.7，P=0.03；χ2=19.83，P=0）；真菌在不同季度間感染率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.85，P=0.008），其余病原體在不同季度間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 本研究中慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）患者的病原體感染主要由病毒和非典型病原體引起，以流感病毒B、肺炎支原體、流感病毒A、嗜肺軍團(tuán)菌和念珠菌的單一或混合感染常見(jiàn)。

慢性阻塞性肺疾病急性加重 呼吸道 感染 病原體

慢性阻塞性肺疾?。–hronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD）是一種常見(jiàn)的危害人類健康的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，隨著人口老齡化及環(huán)境污染的加重，其患病率逐年增高。慢性阻塞性肺疾病急性加重（Acute Exacerbation of Chronic Obstructive Pulmonary Disease，AECOPD）是指COPD患者發(fā)生的急性狀況，急性變化會(huì)損害肺功能，加速病情進(jìn)展，其特征是患者呼吸道癥狀較平日惡化，且需要改變?cè)幬镏委煼桨?；減少AECOPD的發(fā)生，成為延緩COPD病情進(jìn)展、改善患者生活質(zhì)量的重要措施。AECOPD可由多種因素引起，最常見(jiàn)的為呼吸道感染，及時(shí)控制感染能縮短康復(fù)時(shí)間，減少治療失敗的危險(xiǎn)和縮短住院時(shí)間。隨著新檢測(cè)技術(shù)的出現(xiàn)與推廣，引起呼吸道感染的病原體檢測(cè)為臨床精準(zhǔn)治療提供參考，常見(jiàn)病原體主要有細(xì)菌、真菌、病毒、非典型病原體等，目前間接免疫熒光法（immunofluorescence assay IFA）具有檢測(cè)方便快捷，成本低廉的優(yōu)勢(shì)，可進(jìn)行定性檢測(cè)，可檢測(cè)患者血清中病毒的抗體如：流感病毒A/B （Influenzavirus A/B，F(xiàn)1uA / B ）、副流感病毒（Para Influenzavirus，PIV）、呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）、腺病毒（Adenovirus，ADV）和非典型病原體如：嗜肺軍團(tuán)菌（Legionella Pneumophila，LP）、肺炎支原體（Mycoplasma Pneumonia，MP）、肺炎衣原體（Chlamydia Pneumonia，CP）等8種呼吸道病原體IgM抗體，可作為臨床診斷病毒和非典型病原體的依據(jù)，常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)鑒定是診斷細(xì)菌和真菌感染的常用方法。為了解AECOPD患者中病原體的感染狀況，現(xiàn)對(duì)2015年5月～2016年4月478例臨床診斷為AECOPD患者的病原體（F1uA /B、PIV、RSV、ADV、LP、MP、CP）IgM檢測(cè)結(jié)果和痰培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，報(bào)道如下。

資料與方法

1 一般資料 2015年5月～2016年4月診斷為慢性阻塞性肺疾病急性加重的本院住院患者478例，所有入選對(duì)象均符合慢性阻塞性肺疾病全球倡議（GOLD，2013修訂版）中COPD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，符合慢性阻塞性肺疾病急性加重診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除近期接種流感疫苗患者。其中男性273例，女性205例；年齡25～94歲，平均年齡（71.9±10.1）歲。本研究經(jīng)亳州市人民醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，涉及的臨床資料均經(jīng)過(guò)患者知情同意。

2 標(biāo)本采集 抽取患者空腹靜脈血3 ml，立即送檢，3 000 r/min離心10 min取血清進(jìn)行檢測(cè)。痰培養(yǎng)要求患者清晨用清水漱口3次以上，用力咳出氣管深部痰液至無(wú)菌標(biāo)本盒內(nèi)，立即送檢。

3 儀器與試劑 奧林巴斯熒光顯微鏡；德國(guó)歐蒙8種呼吸道病原體IgM抗體檢測(cè)試劑盒。嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行操作和結(jié)果判讀。細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)儀器檢測(cè)采用法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的VITEK-2COMPACT全自動(dòng)細(xì)菌分析儀及配套耗材，血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、念珠菌顯色平板均購(gòu)自梅里埃（上海）生物制品有限公司。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用IBM SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 病原體感染狀況 478例慢性阻塞性肺疾病急性加重的患者呼吸道病原體檢測(cè)總感染率為78.0%（373/478），病原體分類感染組合以單類病原體感染為主（41.2%），病毒類感染居多（占58.4%），復(fù)合感染中以病毒和非典型病原體的混合感染為主（占23.2%）；病原體的多重感染（占58.7%）較單一感染者多，其中流感病毒B、肺炎支原體、嗜肺軍團(tuán)菌、流感病毒A和念珠菌位于總陽(yáng)性率和單一病原體感染者的前列，見(jiàn)表1、2。

2 性別分布 478例病原體感染者中男性占54.7%，感染類型在不同性別間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.28，P=0.007），其中男性以單一感染

為主63.0%（97/154），女性以2個(gè)或以上病原體的多重感染為主（51.1%），病毒和非典型病原體的感染在性別間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.7，P＜0.05；χ2=19.83，P＜0.05），見(jiàn)表3。

表1 478例AECOPD患者病原體分類感染組合分布

表2 373例AECOPD病原體感染者檢測(cè)結(jié)果

3 時(shí)間分布 不同季度間4類病原體只有真菌感染率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.85，P＜0.05），真菌以第三季度感染率較高（18.92%，7/37），本地區(qū)第三季度為夏季；其余3類病原體在不同季度間感染率的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，任一病原體在不同季度的感染率的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表4。

表3 不同性別間AECOPD患者感染情況分布表

表4 AECOPD患者病原體感染季度分布表

討 論

感染是COPD反復(fù)急性加重的誘發(fā)因素之一，COPD患者大多每年會(huì)出現(xiàn)急性加重，發(fā)病患者肺功能受到損害，嚴(yán)重者危及生命，居死因構(gòu)成第4位，給社會(huì)、家庭、醫(yī)療衛(wèi)生體系帶來(lái)負(fù)擔(dān)和壓力[2]。AECOPD作為一種呼吸系統(tǒng)病原體感染高發(fā)疾病，在以往的診療中往往局限以細(xì)菌類感染作為診斷，隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，快速、便捷、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法使病毒和非典型病原體進(jìn)入臨床診斷關(guān)注的視野。

病原體感染是COPD患者急性發(fā)作的重要誘因，本研究中78%的患者有各種不同的病原體感染，但仍有22%未發(fā)現(xiàn)病原體感染因素，或許與其他非感染因素有關(guān)，如霧霾、油煙、吸煙等[3]；或與使用的病原體檢測(cè)方法的局限性有關(guān)。14%～40%的AECOPD與病毒感染相關(guān)[4]，本研究采用IFA技術(shù)對(duì)AECOPD患者血清中呼吸道病毒IgM抗體行定性檢測(cè)，結(jié)果病毒類感染陽(yáng)性率占52.6%，居首位，其中以FluB居多，F(xiàn)luB為主的感染在國(guó)內(nèi)有報(bào)道[5，6]，與以往認(rèn)為的流感病毒以FluA感染為主的觀點(diǎn)不符，尚待進(jìn)一步大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)。AECOPD患者病原體感染無(wú)論是單類或復(fù)合感染，病毒均為重要病原體。復(fù)合感染中以病毒與非典型病原體合并感染占優(yōu)勢(shì)，其中MP和LP在本研究中扮演非典型病原體的重要角色，近期國(guó)外研究報(bào)道MP與流感病毒共同感染具有重要意義[7]。本次檢測(cè)中LP檢出率21.8%，較文獻(xiàn)偏高[8]，或許與空調(diào)、加濕器等設(shè)施的使用、本研究人群免疫力較低和長(zhǎng)期患病活動(dòng)范圍有限有關(guān)。本研究中男性感染率高于女性，或與本研究人群年齡屬于老齡（71.9±10.1歲）相關(guān)，老齡男性患者大多有抽煙習(xí)慣，而抽煙是公認(rèn)的呼吸道感染的重要高危因素之一，因此戒煙是減少COPD患者呼吸道感染的有效途徑[9]；女性COPD患者多重感染率高于男性，或與老齡女性常年從事家庭烹飪工作，長(zhǎng)期接觸油煙和燃料廢氣，在身體素質(zhì)相當(dāng)?shù)那闆r下，女性肺功能下降較男性更明顯[10]，易造成病原體的混合交叉感染，通過(guò)加強(qiáng)居室通風(fēng)，減少有害氣體及煙霧排放與暴露，對(duì)減輕女性COPD患者病情大有裨益。

高齡、基礎(chǔ)疾病、并發(fā)癥、長(zhǎng)期應(yīng)用激素等導(dǎo)致COPD患者機(jī)體免疫力差，本研究人群真菌感染率比有關(guān)文獻(xiàn)高[11]。夏季氣候濕熱是真菌繁殖的良好環(huán)境，使得真菌感染呈本季節(jié)高發(fā)，應(yīng)注意COPD患者環(huán)境的清潔衛(wèi)生，減少感染機(jī)會(huì)。潮濕環(huán)境也是銅綠假單胞菌繁殖的沃土，作為AECOPD感染的最常見(jiàn)細(xì)菌之一，本次感染率居其他細(xì)菌之首。體弱或免疫低下的COPD患者作為高風(fēng)險(xiǎn)對(duì)象要注意混合感染的預(yù)防，本次有3例是單一感染，14例為多重感染。在流感流行季節(jié)COPD患者較易感染多種呼吸道病毒，導(dǎo)致病情急性加重，接種流感病毒疫苗成為當(dāng)前尚無(wú)有效抗病毒藥物時(shí)的預(yù)防AECOPD的重要手段[12]。呼吸道病毒及非典型病原體尤其是流感病毒與MP、LP等病原體的混合感染與AECOPD關(guān)系密切，可能與FluB感染時(shí)，分泌的酶和細(xì)胞因子有利于病毒和細(xì)菌在呼吸道黏膜繁殖，破壞呼吸道防御能力有關(guān)[13]，復(fù)合感染不容忽視。同時(shí)提醒COPD患者在呼吸道病毒及非典型病原體流行季節(jié)應(yīng)做好如：避免接觸相關(guān)病原體的傳染源、疫苗接種、減少人口密集區(qū)活動(dòng)等預(yù)防工作。

本研究為本地區(qū)AECOPD防治提供了病原學(xué)和流行病學(xué)的寶貴數(shù)據(jù)和理論依據(jù)，對(duì)于臨床開展針對(duì)性治療用藥起到積極導(dǎo)向作用，為COPD患者預(yù)防感染導(dǎo)致的病情急性加重提供了診斷依據(jù)。由于個(gè)體差異，用IFA方法檢測(cè)IgM時(shí)會(huì)出現(xiàn)IgM持續(xù)陽(yáng)性；COPD患者長(zhǎng)期應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)藥物導(dǎo)致機(jī)體免疫功能低下，致血清IgM 類抗體延遲產(chǎn)生及病原體交叉反應(yīng)的干擾，病原體特異性IgM抗體作為病原感染疾病的確診依據(jù)尚有一定局限性，COPD患者常反復(fù)應(yīng)用抗感染藥物使得痰培養(yǎng)不能生長(zhǎng)出滿意菌落，對(duì)細(xì)菌檢出也有一定局限性。在以后臨床檢測(cè)中可適時(shí)引入敏感性、特異性較高，檢測(cè)用時(shí)短但價(jià)格較貴的分子生物學(xué)檢測(cè)方法，檢測(cè)呼吸道分泌物中的細(xì)菌、肺炎支原體、肺炎衣原體和流感病毒等病原體[14]（如PCR法、基因芯片法、基因測(cè)序法、質(zhì)譜分析法等），以滿足臨床診斷的需求。

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Detection and Analysis of Pathogens in Patients with Acute Exacerbation Underlying Chronic Obstructive Pulmonary Disease

SUN Feng，ZHANG Jing，ZHANG Yong-juan，et al.
The people's Hospital of Bozhou 236800

Objective To detect respiratory pathogens in patients with acute exacerbation underlying chronic obstructive pulmonary disease （AECOPD） so as to provide evidences for clinical treatments. Methods A retrospective analysis was performed in the hospital from May 2015 to April 2016. 478 cases of AECOPD were examined for IgM antibodies by IFA，and pathogens by sputum culture for influenza virus A/B，para influenza virus，respiratory syncytial virus，adenovirus and atypical pathogens （Legionella pneumophila，Mycoplasma pneumonia，and Chlamydia pneumonia）. Results The overall positive rate of pathogens was 78.0% （373/478），single species infection accounted for 41.2% （197/478），viral infection accounted for 58.4%，and multiple pathogen infections accounted for 58.7%（219/373）. Among them，influenza virus B，M. pneumonia and L. pneumophilia，influenza virus A and Candidainfection dominates both in total prevalence and single species pathogen infection. Males had a higher positive rate of 54.7% （204/478） than females （45.3%，169/478） （χ2=4.06，P=0.044） Virus and atypical pathogen infections varied in gender （χ2=4.7，P=0.03，χ2=19.83，P=0）; fungus infection rate changedwith seasons （χ2=11.85，P=0.008）. Conclusions The causative agents in AE-COPD mainly are comprised of viruses and atypical pathogens，influenza virus B，M. pneumonia，influenza virus A，L. pneumophila and Candida，single species or mixed infections are common.

Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease Respiratory Infection Pathogen

R563 R373

A

1671-2587（2017）02-0162-05

2016-10-18）

（本文編輯：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.020

236800 安徽省亳州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

孫峰（1984–）男，安徽亳州人，主管技師，碩士，主要從事臨床免疫及分子生物學(xué)研究工作，（E-mail）sfbbmc@163.com。