何衛(wèi)社 梁俊杰 劉建嶺 劉樂霞 王德平 馮麗娜 張 燕 曹立敏
罕見患者Ael04亞型1例及其家系調(diào)查
何衛(wèi)社 梁俊杰 劉建嶺 劉樂霞 王德平 馮麗娜 張 燕 曹立敏
Ael04亞型 家系調(diào)查 分子生物學(xué)
Ael亞型在人群中罕見[1],最近在患者中發(fā)現(xiàn)1例Ael亞型,現(xiàn)將家系調(diào)查及分子生物學(xué)鑒定結(jié)果報(bào)道如下。
1 材料 患者,女,26歲,足月待產(chǎn),無輸血史、妊娠史,常規(guī)查血型為正定O、反定A,經(jīng)家系調(diào)查,其母親正定O、反定A,進(jìn)一步做血型血清學(xué)鑒定,并送上海血液中心血型參比室做分子生物學(xué)鑒定。
2 試劑 單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑(長春博訊生物有限公司),人源抗-A和抗-B及Ac、Bc、Oc、A2c和自身紅細(xì)胞(本站制備),抗-H、抗-A1(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司),均在有效期內(nèi)使用。
3 方法
3.1 血型血清學(xué)檢查
3.1.1 血型鑒定:按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作[2],見表1。
3.1.2 吸收、放散試驗(yàn):被檢者紅細(xì)胞、陽性對照A型紅細(xì)胞、陰性對照O型紅細(xì)胞分別與效價(jià)64的人源抗-A血清做吸收放散試驗(yàn)。按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程操作[2]。
3.1.3 血型物質(zhì)檢測:取被檢者唾液1~2 ml,沸水煮10 min,離心后取上清。 抗-A、抗-B單克隆抗體試劑用生理鹽水稀釋至效價(jià)為1∶16,抗-H抗體不用稀釋。分別將100 μl血型物質(zhì)與制備后的試劑100 μl等體積混合,室溫放置10 min。 用Ac檢測中和后的抗-A抗體,Bc檢測中和后的抗-B抗體,Oc檢測中和后的抗-H抗體。
3.2 家系調(diào)查:對家系共3代進(jìn)行調(diào)查。
3.3 分子生物學(xué)鑒定:患者及其母親標(biāo)本送上海市血液中心國家血型參比室進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。
1 血型血清學(xué)檢查結(jié)果 該患者及其母親的紅細(xì)胞與抗-A、抗-B、抗-AB在室溫、4℃時(shí)均不凝集,與抗-H出現(xiàn)強(qiáng)凝集。2人的血清中除有正常抗-B外,在4℃與A2c、自身c、Oc均不反應(yīng),與Ac有弱凝集,證明血清中有抗-A1;吸收放散試驗(yàn)效價(jià)為64的人源抗-A經(jīng)被檢者紅細(xì)胞和對照A型紅細(xì)胞吸收后,被檢者抗-A的效價(jià)降為16,對照A型紅細(xì)胞抗-A效價(jià)降為0,被檢者放散抗-A的效價(jià)為32,對照A型紅細(xì)胞放散抗-A效價(jià)為0,陰性對照O型紅細(xì)胞放散液為陰性,證明被檢者的A抗原比正常A型的A抗原吸收能力弱,放散能力強(qiáng),紅細(xì)胞上有弱的A抗原;血型物質(zhì)測定顯示患者為分泌型,分泌H型物質(zhì),不分泌A型、B型物質(zhì)。見表1。
2 家系調(diào)查結(jié)果 家系3代中有2人為Ael亞型。見圖1。
3 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果 患者及其母親基因型分別為Ael04/ O201、Ael04/O101。見表1。
表1 血型血清學(xué)、分子生物學(xué)檢測結(jié)果
圖1 Ael04家系血型遺傳圖
Ael在人群中罕見,有學(xué)者在法國150 000名獻(xiàn)血者中未查到Ael,而在400 000名中國人群中檢測到5例Ael[1],提示Ael在人群中頻率較低且存在差異。本研究的血型血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示患者及其母親均為A細(xì)胞不被抗-A、抗-AB凝集,但經(jīng)吸收放散試驗(yàn)可證實(shí)紅細(xì)胞上有極弱的A抗原,唾液中含H物質(zhì),不含A物質(zhì),符合Ael血型血清學(xué)特點(diǎn)[3]。而Ael亞型的血清中是否含有抗-A1尚不肯定;許先國等[4]報(bào)道先證者不含有抗-A1,但其母親含有;宿軍[5]、王成輝[6]、呂杭軍等[7]報(bào)道兩者均含抗-A1;本例患者及其母親血清中均有抗-A1,肯定了某些Ael個(gè)體血清中含抗-A1。Ael與Ax、Am的區(qū)別主要在于Ax血清中常有抗-A1抗體,而Am唾液血型物質(zhì)有A、H物質(zhì)[8,9]。
采用分子生物學(xué)方法進(jìn)行基因定型,本例患者及其母親均為Intron 6 5G>A突變,對照血型抗原基因突變數(shù)據(jù)庫[10],其等位基因均為Ael04。Soloman及Sturgeon于 1964年報(bào)道,Ael具有遺傳性[11],家系調(diào)查及分子生物學(xué)鑒定發(fā)現(xiàn)此患者Ael04血型從母親遺傳所得,其家族目前已遺傳了2代,本例證實(shí)了Ael的遺傳性。由此可見,血清學(xué)方法無法對亞型正確定型,通過分子生物學(xué)技術(shù),結(jié)合家系調(diào)查揭示血型遺傳方式,可得到準(zhǔn)確的血型結(jié)果,因此,分子生物學(xué)技術(shù)及家系調(diào)查是血型血清學(xué)方法的重要輔助手段。
Ael亞型紅細(xì)胞上的A抗原極弱,一般情況下不易檢出,患者及其母親血清中不但含有抗-B,還有抗-A1,易將其誤定為“O”型。該Ael亞型患者由于其血清中有抗-A1,不能接受A型紅細(xì)胞,而應(yīng)輸注O型紅細(xì)胞,作為獻(xiàn)血者,血漿不應(yīng)輸給A型患者。
(感謝上海市血液中心血型參比室向東老師的大力支持!)
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R457.1+1
B
1671-2587(2017)02-0203-02
2016-08-22)
(本文編輯:姚萍)
10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.033
065000 河北省廊坊市人民醫(yī)院(何衛(wèi)社,王德平);滄州市中心血站(梁俊杰,劉建嶺,劉樂霞,馮麗娜,張燕);廊坊廣安醫(yī)院(曹立敏)
何衛(wèi)社(1966–),男,河北廊坊人,副主任技師,主要從事臨床輸血工作,(Tel)18003368990(E-mail)tianwaiyoutian8270@sina.com。
劉樂霞,女,主任技師,主要從事免疫血液學(xué)及質(zhì)量管理工作,(Tel)13582728982(E-mail)liulexia@163.com。