張瑛瑛，李季泓

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，沈陽110032）

甘草對高脂血癥大鼠模型洛伐他汀藥代動力學(xué)的影響

張瑛瑛，李季泓

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，沈陽110032）

目的研究高脂血癥大鼠模型中甘草對洛伐他汀藥代動力學(xué)過程的影響。方法將18只SD大鼠隨機分為對照組（n=6）和實驗組（n=12）。實驗組采用高脂飼料喂養(yǎng)大鼠，構(gòu)建高脂血癥大鼠模型，隨機分為洛伐他汀單獨給藥組（n=6）和洛伐他汀與甘草聯(lián)合給藥組（n=6）。聯(lián)合給藥組給予甘草顆粒，單獨給藥組給予相應(yīng)體積的生理鹽水，連續(xù)7 d后，2組大鼠單劑量灌胃給予洛伐他汀膠囊（20 mg/kg，0.5%CMC?Na溶液）。分別于給藥前和給藥后不同時間點采集血漿樣品，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測定血藥濃度，計算藥代動力學(xué)參數(shù)，并進行組間比較。結(jié)果長期給予甘草導(dǎo)致洛伐他汀代謝產(chǎn)物洛伐他汀酸在高脂血癥大鼠中血漿暴露水平顯著升高，聯(lián)合給藥組平均Cmax較單獨給藥組升高約80%（P<0.05），而AUC0?t和AUC0?∞分別升高115%和109%（P=0.005和P=0.027）。聯(lián)合給藥組與單獨給藥組比較，洛伐他汀的Cmax和AUC增加，但無統(tǒng)計學(xué)差異（P> 0.05）。結(jié)論甘草可抑制洛伐他汀在高脂血癥大鼠體內(nèi)的代謝，增加其體內(nèi)暴露水平。

洛伐他汀；洛伐他汀酸；甘草；藥代動力學(xué)；高脂血癥大鼠；藥物相互作用

高脂血癥是由于脂質(zhì)代謝紊亂或轉(zhuǎn)運異常使血清或血漿中一種或多種脂質(zhì)的水平高于正常的疾病，它是動脈粥樣硬化、冠心病、胰腺炎等疾病的重要發(fā)病因素［1］。他汀類藥物是臨床最常用的降脂藥物，通過抑制羥甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制肝細胞內(nèi)的膽固醇合成及刺激干細胞合成低密度脂蛋白受體等途徑來降低血脂［2?3］。他汀類藥物的調(diào)脂療效與藥物劑量密切相關(guān)，其不良反應(yīng)發(fā)生率也隨著藥物體內(nèi)暴露水平的增加而呈幾何倍數(shù)增加，可累及全身各個系統(tǒng)［4?5］。他汀類藥物的代謝主要由肝臟藥物代謝酶CYP3A介導(dǎo)，如辛伐他汀、洛伐他汀和阿托伐他汀主要通過CYP3A4/5代謝［6］，容易發(fā)生由CYP450酶抑制或誘導(dǎo)而介導(dǎo)的藥物相互作用，從而導(dǎo)致嚴重的藥物不良反應(yīng)。

甘草是一味常用的中藥材，具有抗炎、解痙、抗氧化、抗病毒、保肝及抗癌等作用［7］。甘草在發(fā)揮治療作用的同時，可能改變聯(lián)合使用藥物的體內(nèi)代謝行為，導(dǎo)致療效降低或引起嚴重的不良反應(yīng)。MU等［8］的研究證實，甘草提取物可通過激活孕烷受體誘導(dǎo)CYP3A和CYP2C的表達，增加華法林的體內(nèi)清除；BUDZINSKI等［9］報道甘草中黃酮類成分能夠抑制CYP3A4活性；還有研究［10?11］報道甘草酸二銨可抑制包括CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4等在內(nèi)的肝臟藥物代謝酶的活性，上調(diào)雷公藤甲素誘導(dǎo)的肝細胞毒性。本課題組的早期研究證實，甘草成分甘草酸二銨在大鼠體內(nèi)可抑制辛伐他汀的代謝，增加其體內(nèi)暴露水平，有加重不良反應(yīng)的風(fēng)險［12］。本研究在高脂血癥大鼠模型中研究甘草對洛伐他汀藥代動力學(xué)過程的影響，為他汀類藥物的臨床合理應(yīng)用提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑：洛伐他汀、洛伐他汀酸和辛伐他?。▋?nèi)標）（中國藥品生物制品檢定所）；洛伐他汀膠囊（哈藥集團制藥總廠）；甘草配方顆粒（江陰天江藥業(yè)有限公司）；色譜純甲醇（美國Fisher公司）；其他試劑均為市售分析純。實驗用水為Milli?Q超純水；大鼠高脂飼料購自遼寧長生生物技術(shù)有限公司。

1.1.2 儀器：API 4000型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源及Analysis 1.4.2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（加拿大Applied Biosystem公司）；LC?20A液相色譜儀，包括二元輸液泵及自動進樣器（日本島津公司）；TurboVap LV全自動濃縮儀（美國Zymark公司）；Milli?Q Gradient A10超純水器（美國Millipore公司）；LX全自動血液生化分析儀（美國Beckman公司）；XS?225A電子分析天平（德國PRECISA公司）。

1.1.3 實驗動物：清潔級健康SD大鼠，雄性，體質(zhì)量（220±10.0）g，18只，購于遼寧長生生物技術(shù)有限公司，許可證號為SCXK（遼）2015?0001。

1.2 方法

1.2.1 動物模型的建立和分組：大鼠在標準溫度（25±2）℃和濕度（50±10）%環(huán)境中適應(yīng)1周后，隨機分為對照組和實驗組。對照組大鼠（n=6）給予普通飼料。實驗組（n=12）大鼠給予高脂飼料（0.2%膽酸鈉、1%膽固醇、10%豬油、10%蔗糖、10%蛋黃粉、68.8%基礎(chǔ)飼料），并根據(jù)膽固醇和甘油三酯值隨機分為洛伐他汀單獨給藥組（n=6）和洛伐他汀與甘草聯(lián)合給藥組（n=6）。聯(lián)合給藥組大鼠每天給予甘草顆粒（用生理鹽水溶解，0.5 g/kg，每日1次），單獨給藥組大鼠每天給予相應(yīng)體積的生理鹽水，連續(xù)6 d。第6日晚大鼠禁食12 h后，于第7日早晨，聯(lián)合給藥組和單獨給藥組大鼠分別灌胃給予甘草顆粒和生理鹽水后，單劑量灌胃給予洛伐他汀膠囊（20 mg/kg，0.5%CMC?Na溶液）。

1.2.2 血清生化指標測定：喂養(yǎng)4周后，大鼠眼眶靜脈采血，測定甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平。血清生化指標采用全血自動生化分析儀測得。

1.2.3 血漿樣品采集：于洛伐他汀給藥前和給藥后0.5、1.0、1.5、2、3、4、5、6、8、10、12、24和36 h于眼眶靜脈采血，4 000 r/min離心10 min分離血漿，-70℃保存待測。

1.2.4 血漿濃度測定：采用液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用方法測定大鼠血漿中洛伐他汀及其代謝產(chǎn)物洛伐他汀酸的濃度。使用Zorbax Elipse XDB C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm，美國Agilent公司）；流動相由甲醇和水（含10 mmol/L乙酸銨B）組成；流速為1.0 mL/min，梯度洗脫；柱溫30℃；進樣量為10 μL。采用電噴霧離子源，選擇性反應(yīng)監(jiān)測，正離子方式檢測；洛伐他汀、洛伐他汀酸和內(nèi)標的定量分析離子對分別為m/z427.1m/z325.3，m/z421.4m/z319.2和m/z441.3m/z325.1。向100 μL大鼠血漿樣品中加入10 μL內(nèi)標溶液，渦旋混勻后加入環(huán)己烷—二氯甲烷（3∶1）1 mL，渦旋混勻，振蕩10 min后，5 000 r/min離心5 min，取上清液，置另一干凈玻璃試管中，50℃水浴空氣流吹干，殘渣用100 μL甲醇復(fù)溶后，12 000 r/min離心2 min，取上清10 μL進樣分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 血清生化指標

造模4周后，與對照組大鼠相比，實驗組大鼠血清膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白含量均顯著升高（P<0.01），而高密度脂蛋白水平降低（P<0.05），證明高脂血癥大鼠模型造模成功。見表1。

2.2 實驗組藥代動力學(xué)比較

表1 血清生化測定結(jié)果（mmol/L）Tab.1 Serum biochemical results（mmol/L）

對實驗組中單獨給藥組和聯(lián)合給藥組大鼠的藥代動力學(xué)參數(shù)進行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示，長期給予甘草顆粒導(dǎo)致洛伐他汀代謝產(chǎn)物洛伐他汀酸在高脂血癥大鼠中血漿暴露水平顯著升高，聯(lián)合給藥組平均Cmax較單獨給藥組升高約80%（P<0.05），而AUC0?t和AUC0?∞分別升高115%和109%（P=0.005和P=0.027）。聯(lián)合給藥組與單獨給藥組比較，洛伐他汀的Cmax和AUC也均有增加，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。聯(lián)合給藥后甘草對洛伐他汀和洛伐他汀酸的消除半衰期和清除率均無顯著影響。見表2。

表2 高脂血癥大鼠模型中洛伐他汀及其代謝產(chǎn)物洛伐他汀酸的藥代動力學(xué)參數(shù)Tab.2 Pharmacokinetic parameters of lovastatin and its metabolite lovastatin acid in hyperlipidemia rats

3 討論

近年來高脂血癥的發(fā)生率呈逐年上升趨勢，基于高脂血癥所引發(fā)的一系列疾病的復(fù)雜性，在降脂治療的同時多合并使用其他藥物。隨著中藥使用量大大增加，尋找有效的治療高脂血癥的中西醫(yī)結(jié)合療法已成為當(dāng)今研究心腦血管疾病的重要課題?，F(xiàn)代研究證實甘草具有降脂、保肝等作用，其有效成分甘草酸二銨與他汀類藥物聯(lián)合對脂肪肝、高脂血癥有很好的療效［13］。

他汀類藥物是高脂血癥治療的基礎(chǔ)藥物，肌肉毒性和肝毒性是該類藥物的常見不良反應(yīng)，而橫紋肌溶解可能危及生命。他汀類藥物引起的不良反應(yīng)與劑量、藥物相互作用、患者耐受性、基因多態(tài)性密切相關(guān)。其中藥物相互作用是一項重要因素，一半以上的他汀類藥物不良反應(yīng)與藥物相互作用有關(guān)。甘草含黃酮類、皂苷類、香豆素類等多種化學(xué)成分，其在發(fā)揮藥效的同時，對肝臟藥物代謝酶系統(tǒng)有一定作用，且不同成分對藥物代謝酶的作用可能截然相反。由于甘草多作為飲片使用，因此本研究選擇甘草顆粒，在高脂血癥模型中研究其對洛伐他汀體內(nèi)過程的影響。洛伐他汀是一種前體藥物，在體內(nèi)主要轉(zhuǎn)化生成活性代謝產(chǎn)物洛伐他汀酸而發(fā)揮作用。本研究結(jié)果顯示，甘草降低了洛伐他汀在高脂血癥大鼠模型中的體內(nèi)代謝，導(dǎo)致洛伐他汀酸的血漿暴露水平顯著增加，而對洛伐他汀本身的體內(nèi)暴露水平?jīng)]有顯著影響。大量研究［14］顯示，CYP3A4/5以及轉(zhuǎn)運體，尤其是有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽1B1和外排轉(zhuǎn)運體乳腺癌抗性蛋白，在洛伐他汀及其活性代謝物的代謝過程中發(fā)揮重要作用。甘草降低洛伐他汀酸代謝水平的機制可能與其對大鼠CYP3A4酶活性的抑制有關(guān)。

綜上所述，本研究顯示甘草抑制了洛伐他汀在高脂血癥大鼠模型體內(nèi)的代謝過程，導(dǎo)致其主要活性代謝產(chǎn)物洛伐他汀酸的體內(nèi)暴露水平顯著增加。本研究結(jié)果提示，在臨床上應(yīng)避免洛伐他汀與甘草聯(lián)合應(yīng)用，若二者聯(lián)合則應(yīng)監(jiān)測肌酸激酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平，根據(jù)監(jiān)測結(jié)果及臨床情況調(diào)整劑量，以減少或避免相互作用所帶來的不良反應(yīng)。

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（編輯 陳姜）

Effects of Licorice on Pharmacokinetics of Lovastatin in Hyperlipidemic Rats

ZHANG Yingying，LI Jihong
（Department of Pharmacy，Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，China）

ObjectiveTo study the effect of licorice on the pharmacokinetics of lovastatin in hyperlipidemic rat model.MethodsEighteen rats were randomly divided into control group（n=6）and test group（n=12）.Rats in the test group were administered high fat diet to construct hy?perlipidemic rat model.The 12 hyperlipidemic rats were then randomly divided into two groups：lovastatin group（n=6）and lovastatin combined with licorice group（n=6）.The rats in both groups were administered lovastatin capsule（20 mg/kg，0.5%CMC?Na solution）after receiving lico?rice（for lovastatin combined with licorice group）or saline（for lovastatin group）for 7 days.Blood samples were collected at different time points before and after the administration of lovastatin capsule.The plasma concentrations of lovastatin and lovastatin acid（an active metabolite of lovas?tatin）were determined by LC?MS/MS method.Pharmacokinetics parameters were calculated using DAS 2.0 software，and the two groups were com?pared using SPSS 18.0 software.ResultsLong?term administration of licorice resulted in a significant increase in the plasma level of lovastatin ac?id in the hyperlipidemic rat，and the corresponding mean Cmaxwas approximately 80%higher than that of the lovastatin group（P<0.05），while AUC0?tand AUC0?∞increased by 115%and 109%，respectively（P=0.005 andP=0.027）.Cmaxand AUC of lovastatin also increased，but there was no statistical significance（P>0.05）.ConclusionLicorice can inhibit the metabolism of lovastatin in hyperlipidemic rats and increase its expo?sure in vivo.

lovastatin；lovastatin acid；licorice；pharmacokinetics；hyperlipidemic rat；drug interaction

R977

A

0258-4646（2017）04-0342-04

10.12007/j.issn.0258?4646.2017.04.014

遼寧省自然科學(xué)基金（2014020051）

張瑛瑛（1970-），女，主管藥師，本科. E-mail：2032059127@qq.com

2016-12-21

網(wǎng)絡(luò)出版時間：