滕金玲

（山東省莒南縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 276600）

孫家偉

（山東省臨沂市河?xùn)|區(qū)劉店子畜牧獸醫(yī)站）

譚善杰

（山東省臨沂市畜牧站）

一起仔豬豬瘟的診制體會(huì)

滕金玲

（山東省莒南縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 276600）

孫家偉

（山東省臨沂市河?xùn)|區(qū)劉店子畜牧獸醫(yī)站）

譚善杰

（山東省臨沂市畜牧站）

某豬場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬存欄30頭，所產(chǎn)仔豬在1～15日齡期間，臨床健康，哺乳正常，皮紅毛亮，生長(zhǎng)發(fā)育良好，15日齡后陸續(xù)開(kāi)始排黃色或深黃色稀便或糊狀便，體溫在39.5℃左右，任何藥物治療無(wú)效，同窩發(fā)病率、死亡率高達(dá)100%，維持3個(gè)月之久。曾在四家檢測(cè)診斷機(jī)構(gòu)做過(guò)豬瘟、偽狂犬、流行性腹瀉等病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。

1 診斷過(guò)程

1.1 第一次出診

1.1.1 臨床癥狀 母豬：被毛粗糙，皮膚泛黃，毛孔有鐵銹色出血點(diǎn)，重者脊背皮膚開(kāi)裂，表面有血樣滲出物，有些母豬淚斑嚴(yán)重，肌肉注射后針眼血流不止，血凝不良。仔豬：排黃色稀便或糊狀便，皮膚黃白色，哺乳次數(shù)減少直至停止，逐漸消瘦，最后衰竭死亡。

1.1.2 解剖癥狀 表現(xiàn)血液稀薄，凝固不良；小腸腸壁變薄，充氣，腸內(nèi)有黃色內(nèi)容物，腎臟表面有零星出血點(diǎn)，其他內(nèi)臟器官無(wú)異常。

1.1.3 診斷處置 疑似診斷為母豬患有附紅細(xì)胞體。母豬用磺胺氯噠嗪鈉+多西環(huán)素，補(bǔ)充VC、VAD3粉及有機(jī)鐵制劑等混飼2周，重者配合血蟲(chóng)凈(中牧集團(tuán))肌注，1支

/100～15kg體重，1次/d，連用2～3d，同時(shí)仔豬用抗生素保健，腹瀉日齡稍有延遲。但25日齡左右，仔豬又開(kāi)始腹瀉。

1.2 第二次出診

1.2.1 臨床癥狀 母豬：精神狀況、膘情良好，個(gè)別母豬皮膚蒼白，表面出血點(diǎn)減少，潔凈度提高。發(fā)病仔豬：初期排黃色稀便，皮膚蒼白，后期皮膚發(fā)黃，四肢末梢發(fā)紫，皮下有出血點(diǎn)或斑，腹瀉，排黃色或黃褐色稀便，骨瘦如柴，眼屎增多，體溫39.5～40.8℃，扎堆怕冷，食欲廢絕。

1.2.2 解剖癥狀 血凝不良，打開(kāi)胸腔、腹腔，內(nèi)臟漿膜出血嚴(yán)重，喉頭有出血點(diǎn)，扁桃體出血，腎臟土黃色，表面有大量出血點(diǎn)，腸道出血，膀胱出血，淋巴結(jié)周邊出血等，出現(xiàn)疑似豬瘟癥狀。

1.3 實(shí)驗(yàn)室診斷

采集發(fā)病仔豬血液12份，編號(hào)1-12，室溫靜置析出血清，然后經(jīng)2000r/5min離心，制備待檢血清。

1.3.1 豬瘟病毒抗體檢測(cè) 美國(guó)(IDEXX)豬瘟病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒：使用前，所有試劑和微量包被反應(yīng)板在22℃室溫下放置2h，并通過(guò)輕輕渦旋、旋轉(zhuǎn)混勻。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格操作程序，且不同的樣本和試劑使用不同的吸頭。取出微量反應(yīng)板，在原始記錄表上標(biāo)記好每個(gè)樣本的位置。分別將50ul樣品稀釋液加入每個(gè)檢測(cè)孔和對(duì)照孔中。分別將50ul陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照加入到相應(yīng)的對(duì)照孔中。分別將50ul的被檢樣品加入到剩余的檢測(cè)孔中。輕彈微量反應(yīng)板，將反應(yīng)板中的溶液混勻，然后將微量反應(yīng)板用封條封閉，在室溫(22℃)條件下孵育2h。用300ul洗滌液洗滌每個(gè)板孔3次。每次洗滌后，甩去每個(gè)板孔中的液體，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液體。在加入下一個(gè)試劑前，避免孔壁變干。在每孔中加入100ul的酶標(biāo)抗體，用封條封閉反應(yīng)板，在室溫(22℃)條件下孵育30min。重復(fù)步驟5。每個(gè)反應(yīng)孔中加入100ul的底物溶液，避光、室溫(22℃)條件下放置10min。加完第一孔后計(jì)時(shí)。在每個(gè)反應(yīng)孔中加入100ul的終止液終止反應(yīng)。加終止液的順序與底物的加入順序相同。酶標(biāo)儀空氣調(diào)零，以450nm單波長(zhǎng)測(cè)定樣本和對(duì)照的吸光度值。結(jié)果：陰性對(duì)照平均OD450=1.585大于0.500，陽(yáng)性對(duì)照阻斷率=91.6大于50%，檢測(cè)結(jié)果有效。計(jì)算被檢樣本阻斷率=(陰性對(duì)照平均OD450-樣本OD45)÷陰性對(duì)照平均OD450×100%。判斷：被檢樣本的阻斷率≤30%，該樣本被判為陰性，無(wú)CSF抗體存在,被檢樣本的阻斷率＞40%，該樣本被判為陽(yáng)性，有CSF抗體存在，如果被檢樣品阻斷率在30%～40%之間，該樣本判為可疑?？贵w檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1、圖1。

表1 豬瘟病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

圖1 豬瘟病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

1.3.2 豬瘟病毒抗原檢測(cè) 美國(guó)(IDEXX)豬瘟病毒抗原血清ELISA檢測(cè)試劑盒：使用前，所有試劑和微量包被反應(yīng)板在22℃室溫下放置2h，并通過(guò)輕輕渦旋、旋轉(zhuǎn)混勻。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格操作程序，且不同的樣本和試劑使用不同的吸頭。（1）操作過(guò)程基本同病毒抗體檢測(cè)步驟。（2）結(jié)果：陽(yáng)性對(duì)照OD的平均值與陰性對(duì)照OD的平均值之差=1.018，大于0.150，陰性對(duì)照OD的平均值=0.085，小于0.250，試驗(yàn)結(jié)果成立。計(jì)算S-N值：即樣品S(OD450)與陰性對(duì)照N(OD450)的平均值之差。判斷：被檢樣本S-N值≤0.100的，該樣本判為陰性；被檢樣本S-N值＞0.300，該樣本判為陽(yáng)性；被檢樣本S-N值＞0.100，≤0.300，判為可疑。判定結(jié)果見(jiàn)表2、圖2。

表2 豬瘟病毒抗原檢測(cè)結(jié)果

圖2 豬瘟病毒抗原檢測(cè)結(jié)果

1.4 結(jié)果分析

12份血清樣品，豬瘟病毒抗體水平參差不齊，最大92，最小-16，其中4份樣品為陽(yáng)性，1份可疑，7份陰性；豬瘟病毒抗原3份陰性，1份可疑，8份陽(yáng)性；且病毒抗體陽(yáng)性的，其病毒抗原為陰性或可疑，病毒抗體陰性的，其病毒抗原陽(yáng)性，符合率幾乎達(dá)到100%。根據(jù)臨床癥狀、解剖變化及實(shí)驗(yàn)室診斷，確診該豬群感染豬瘟病毒。

2 防控措施

（1）加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，淘汰豬瘟隱形帶毒豬、病豬，病死豬進(jìn)行無(wú)害化處理，徹底消滅傳染源。（2）加強(qiáng)場(chǎng)地及圈舍消毒，并適當(dāng)增加消毒次數(shù)，糞尿等排泄物和污染物進(jìn)行發(fā)酵、消毒、深埋、焚燒等無(wú)害化處理，人員定崗定位，器具專(zhuān)舍專(zhuān)用，減少外來(lái)人員及車(chē)輛流動(dòng)，切斷傳播途徑。（3）飼料配比得當(dāng)，營(yíng)養(yǎng)全面；圈舍結(jié)構(gòu)合理，干燥衛(wèi)生，舍溫適宜，通風(fēng)良好；減少應(yīng)激，環(huán)境舒適安靜，提高機(jī)體抵抗力。（4）根據(jù)檢測(cè)結(jié)果及豬場(chǎng)發(fā)病情況，調(diào)整豬瘟免疫程序，保證豬體持有較高的抗體水平，抵御野毒感染。（5）加強(qiáng)母豬配種前豬瘟免疫，所產(chǎn)仔豬用豬瘟傳代細(xì)胞苗1頭份/豬，實(shí)施豬瘟超前免疫。（6）嚴(yán)格執(zhí)行免疫程序，尤其注重免疫抑制性疾病的預(yù)防，合理驅(qū)蟲(chóng)，定期投藥，防止繼發(fā)或并發(fā)疾病。通過(guò)采取以上措施，豬場(chǎng)疫情得以控制。

3 體會(huì)

在畜牧業(yè)快速發(fā)展的今天，疾病的發(fā)展變化日新月異，望聞問(wèn)切的診斷手段已經(jīng)難以滿(mǎn)足疾病的診斷需求。獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室診斷雖然滯后于臨床感官診斷，但卻是確診疾病的唯一手段。根據(jù)臨床癥狀和尸體剖檢變化做出疑似診斷，采用抗體檢測(cè)和抗原檢測(cè)相結(jié)合的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，該病例得以確診。究其在四家檢測(cè)機(jī)構(gòu)診斷無(wú)果，筆者認(rèn)為樣本采集的時(shí)間、部位及樣本的保存、運(yùn)輸?shù)纫蛩赜绊懥藰颖镜馁|(zhì)量，從而影響到檢測(cè)結(jié)果，造成對(duì)該病例的誤診誤判。當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室要充分發(fā)揮檢測(cè)職能，建立完整的獸醫(yī)診斷體系，對(duì)疾病達(dá)到快速、精準(zhǔn)的判斷，以更好地服務(wù)于畜牧業(yè)。

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1007-1733(2017)03-0023-02

2016-01-13）