黃慶大

(廣西欽州農(nóng)業(yè)學(xué)校，廣西欽州 535000)

防治鴨傳染性漿膜炎中藥組方的篩選及應(yīng)用

黃慶大

(廣西欽州農(nóng)業(yè)學(xué)校，廣西欽州 535000)

目的：研究防治鴨傳染性漿膜炎的最佳組方。方法：按照鴨傳染性漿膜炎的防治原理，篩選11種能夠健脾、殺菌與解毒的中藥，測(cè)定各中藥和組方的抑菌圈直徑，然后對(duì)各組方經(jīng)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化與攻毒試驗(yàn)判斷治愈率最優(yōu)異的組方，分析血清生化指標(biāo)情況。結(jié)果：各中藥的抑菌圈直徑由大到小依次是黃連、訶子、黃芩、丹參、陳皮、大黃、金銀花、黃檗、蒲公英，其中黃連的抑菌圈直徑最高；在各中藥組方的抑菌圈直徑由大到小依次是Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅲ。Ⅳ組的死亡率比陽(yáng)性對(duì)照組明顯減少（P＜0.01），比Ⅱ組明顯減少（P＜0.05）；Ⅳ組的治愈率比陽(yáng)性對(duì)照組明顯增加（P＜0.01），比Ⅱ組明顯增加（P＜0.05），Ⅳ組的保護(hù)率比陽(yáng)性對(duì)照組與Ⅱ組明顯增加（P＜0.01）。陽(yáng)性對(duì)照組的血清總膽固醇含量比Ⅳ組和健康對(duì)照組的明顯增加（P＜0.01），Ⅳ組、陽(yáng)性對(duì)照組和健康對(duì)照組的血清總蛋白與谷丙轉(zhuǎn)氨酶均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異（P＞0.05）。結(jié)論：組方 Ⅳ的防治效率最優(yōu)異，服用中藥組方Ⅳ組可明顯減少鴨血清中的總膽固醇含量，可在養(yǎng)殖業(yè)中推行。

鴨傳染性漿膜炎 中藥防治 抑菌

鴨傳染性漿膜炎是一種因鴨感染鴨疫里默氏桿菌導(dǎo)致的傳染性疾病[1]，該病對(duì)鴨養(yǎng)殖業(yè)的危害嚴(yán)重，能夠?qū)е馒喰误w瘦弱、發(fā)育異常、殘鴨，甚至導(dǎo)致大量死亡[2]。鴨疫里默氏桿菌的種類(lèi)多樣，耐藥性較高，傳統(tǒng)的疫苗和抑菌西藥的防治方法的效果較差[3]，因此需要研究安全性和有效性均較高的中藥防治方法。本研究探討各類(lèi)中藥對(duì)鴨傳染性漿膜炎的抑菌作用，以便于為臨床防治奠定依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料和儀器

本研究的動(dòng)物是北京鴨，鴨飼料來(lái)自于欽州市漓源糧油飼料有限公司，各類(lèi)中藥來(lái)自于亳州市長(zhǎng)生中藥飲片有限公司，培養(yǎng)基包含胰酶大豆瓊脂與肉湯兩種。試劑包含胎牛血清（來(lái)自于江蘇恩莫阿賽生物技術(shù)有限公司），淋巴細(xì)胞分離液（來(lái)自于上海易佰聚經(jīng)貿(mào)有限公司），雙抗，噻唑藍(lán)，細(xì)胞板（96 孔，來(lái)自于上海艾研生物科技有限公司），試劑盒來(lái)自于南京建成公司。

研究?jī)x器包含生化分析儀、牛津杯、倒置顯微鏡、酶標(biāo)儀、細(xì)胞培養(yǎng)箱與細(xì)胞計(jì)數(shù)儀等。

1.2 方法

1.2.1 組方和制備藥液

按照各種中藥的抑菌與配伍情況組方如下，Ⅰ是黃檗、黃連、人參和黃芩，Ⅱ是黃芪、黃連、黃芩、蒲公英和黃檗，Ⅲ 是金銀花、黃芩和黃檗，Ⅳ是訶子、黃連、丹參、大蒜和黃芩。中藥磨粉并過(guò)177 μm篩后各稱(chēng)10g，將二十份的溫水浸泡藥粉十分鐘，然后對(duì)藥液加熱煮沸并濃縮，再用六層紗布進(jìn)行過(guò)濾，重復(fù)3次合并藥液，離心濃縮直到藥液的濃度是 1 g/mL，滅菌后備用。

1.2.2 試驗(yàn)方法

牛津杯中放入1×108cfu/mL的菌液與1 g/ml的各藥液 100μl，然后將無(wú)菌生理鹽水作對(duì)照組。全部牛津杯轉(zhuǎn)至燭缸并在培養(yǎng)箱中溫度37℃培養(yǎng)36h，記錄并比較抑菌圈的直徑。自20日齡的鴨子的腳掌靜脈采集十毫升血液離心搜集淋巴細(xì)胞。將5×106/ml淋巴細(xì)胞50 μl注入細(xì)胞板，然后分別注入濃度是 5 、2.5 、1.25 、0.625 、0.313 mg/ml的Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ組方，每個(gè)濃度有六個(gè)平行樣，將淋巴細(xì)胞50 μL與培養(yǎng)基作為對(duì)照組。培養(yǎng)后每孔加噻唑藍(lán)20μl培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束后，加酸性 SDS后混合均勻再培養(yǎng)兩小時(shí)，使用酶聯(lián)免疫分析儀檢測(cè)各組的 OD 570，計(jì)算刺激指數(shù)=研究組OD 570 /對(duì)照組OD 570。在14 日齡實(shí)施攻毒試驗(yàn)，首先用3×104CFU/ 只菌量攻毒，再選取0.5 g/ml的組方 Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ每只每次服用1.25ml，2次/d，服用五日，將單用菌的鴨子作為陽(yáng)性對(duì)照組，將健康鴨子作為健康對(duì)照組。在停止用藥后三天，每組抽選十只并自腳掌進(jìn)行靜脈采血，分別檢測(cè)其總膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶與血清總蛋白的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

全部研究數(shù)據(jù)都應(yīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0整理和分析，用（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）的形式表示，實(shí)施單因素方差分析，以P＜0.05表示比較差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 各組中藥的抑菌情況

各中藥的抑菌圈直徑由大到小依次是黃連、訶子、黃芩、丹參、陳皮、大黃、金銀花、黃檗、蒲公英，其中黃連的抑菌圈直徑最高，依次為34.0mm、33.0mm、25.0mm、23.0mm、22.0mm、21.0mm、17.0mm 、16.0mm、16.0mm；在各中藥組方的抑菌圈直徑由大到小依次是Ⅰ（36.0mm）、Ⅱ（31.0 mm）、Ⅳ（27.0 mm）和Ⅲ（21.0 mm）。

2.2 各組方的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)情況

各組方的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)刺激指數(shù)最高是組方 Ⅱ，其次是Ⅰ，各組方的刺激指數(shù)最高的藥液濃度是 1.250 mg/ml，詳見(jiàn)表1。

表1 各組方的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)情況

2.3 攻毒試驗(yàn)與血生化指標(biāo)情況

Ⅳ組的死亡率比陽(yáng)性對(duì)照組明顯減少（P＜0.01），比Ⅱ組明顯減少（P＜0.05）；Ⅱ 組和陽(yáng)性對(duì)照組的死亡率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異（P＞0.05）。Ⅳ組的治愈率比陽(yáng)性對(duì)照組明顯增加（P＜0.01），比Ⅱ組明顯增加（P＜0.05），而Ⅱ 組和陽(yáng)性對(duì)照組的治愈率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異（P＞0.05）。Ⅳ組的保護(hù)率比陽(yáng)性對(duì)照組與Ⅱ組明顯增加（P＜0.01），Ⅱ 組和陽(yáng)性對(duì)照組的保護(hù)率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異（P＞0.05），詳見(jiàn)表 2。

表2 各組的攻毒試驗(yàn)情況/%

陽(yáng)性對(duì)照組的血清總膽固醇含量比Ⅳ組和健康對(duì)照組的明顯增加（P＜0.01），Ⅳ組、陽(yáng)性對(duì)照組和健康對(duì)照組的血清總蛋白與谷丙轉(zhuǎn)氨酶均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異（P＞0.05），詳見(jiàn)表 3。

表3 各組的血生化指標(biāo)情況

3 討論

鴨疫里默氏桿菌屬于是一種革蘭氏陰性菌，而清熱解毒的中藥能夠抑菌，在本研究中，各中藥的抑菌圈直徑由大到小依次是黃連、訶子、黃芩、丹參、陳皮、大黃、金銀花、黃檗、蒲公英，其中黃連的抑菌圈直徑最高，這同容庭的研究相符，可為后期組方奠定基礎(chǔ)。

黃芩中的黃芩苷可促使機(jī)體形成一氧化氮，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的免疫作用，從而發(fā)揮其抑菌功效。

在本研究結(jié)果中，在各中藥組方的抑菌圈直徑由大到小依次是Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅲ，可知組方的合理配伍會(huì)增加抑菌效果，這同臧瑩安的研究相符，分析原因可能是共煎增加有效物質(zhì)的溶解率，并使各成分之間協(xié)同發(fā)揮作用，促使在增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的基礎(chǔ)上祛邪抑菌作用能夠更好地發(fā)揮。在本研究中，各組方都可刺激淋巴細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，分析原因是中藥成分促使 T 淋巴細(xì)胞的體積與細(xì)胞液含量增多。在本研究中，Ⅳ組、陽(yáng)性對(duì)照組和健康對(duì)照組的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異（P＞0.05），分析原因?yàn)殡m然患病鴨的肝臟細(xì)胞被破壞，但是隨著機(jī)體的細(xì)胞不斷自我修復(fù)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶可達(dá)到正常數(shù)值，而服用中藥組方Ⅳ可在一定程度上減少谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平，其中的丹參可增強(qiáng)肝臟細(xì)胞核酸的復(fù)制，減少過(guò)氧化作用，抑制細(xì)胞的壞死。在本研究中，陽(yáng)性對(duì)照組的血清總膽固醇含量比Ⅳ組和健康對(duì)照組的明顯增加（P＜0.01），分析原因可能為患病后機(jī)體的肝臟細(xì)胞的功能與結(jié)構(gòu)的損傷非常嚴(yán)重，肝臟細(xì)胞壞死，而因?yàn)榧?xì)胞中脂肪成分降解為膽固醇引起的，而組方Ⅳ中的大蒜與丹參可增強(qiáng)肝臟細(xì)胞的產(chǎn)生，防止細(xì)胞中的過(guò)氧化物質(zhì)破壞細(xì)胞膜，增強(qiáng)細(xì)胞的修復(fù)作用。

在本研究中，Ⅳ組的死亡率比陽(yáng)性對(duì)照組明顯減少（P＜0.01），比Ⅱ組明顯減少（P＜0.05）；Ⅳ組的治愈率比陽(yáng)性對(duì)照組明顯增加（P＜0.01），比Ⅱ組明顯增加（P＜0.05），Ⅳ組的保護(hù)率比陽(yáng)性對(duì)照組與Ⅱ組明顯增加（P＜0.01），可知組方 Ⅳ的防治效率最優(yōu)異，分析原因可能同各成分的協(xié)調(diào)作用導(dǎo)致的，但是具體的作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。本文雖研究各組方的抑菌作用和治愈情況，然而沒(méi)有分析應(yīng)用中藥治療的經(jīng)濟(jì)性，各組樣本量較少，還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，組方Ⅳ對(duì)鴨傳染性漿膜炎的防治效率優(yōu)異，服用中藥組方Ⅳ還可明顯減少鴨血清中的總膽固醇含量，可在養(yǎng)殖業(yè)中推廣。

[1] 柯楠，康雷，朱燕，等.重慶市近郊鴨傳染性漿膜炎病病原分離鑒定及防治[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，26（5）：2103-2107.

[2] 陳海峰，陳曉蘭，蔣春茂，等.江蘇省部分地區(qū)鴨疫里默氏桿菌病病例調(diào)查[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（9）：195-196.

[3] 陸興明.鴨傳染性漿膜炎防治[J].農(nóng)技服務(wù)，2014，31（7）：172.