李慧，吳繼周，吳健林，寧秋悅，胡蝶飛，劉若時(shí)

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021)

·臨床研究·

肝癌高發(fā)家族成員血清IL-23水平變化

李慧，吳繼周，吳健林，寧秋悅，胡蝶飛，劉若時(shí)

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021)

目的觀察肝癌高發(fā)家族成員血清白細(xì)胞介素23(IL-23)水平變化，并探討其臨床意義。方法在廣西肝癌高發(fā)區(qū)選取肝癌高發(fā)家族成員103例為觀察組，以生活環(huán)境、性別、民族、HBV攜帶狀況、年齡作為配對(duì)條件選取無(wú)癌家族成員103例為對(duì)照組。采用ELISA法檢測(cè)兩組受檢者血清IL-23。結(jié)果觀察組、對(duì)照組血清IL-23水平分別為3.980(2.350，9.504)、3.548(2.087，7.925)ng/mL，兩組相比，P<0.05。觀察組女性、HBsAg陽(yáng)性、年齡≤25歲、壯族成員血清IL-23水平均高于對(duì)照組(P均<0.05)。觀察組中先證者三級(jí)及以上親屬血清IL-23水平高于先證者一級(jí)親屬、二級(jí)親屬(P均<0.05)。觀察組中家族有2～3個(gè)先證者、4個(gè)以上先證者血清IL-23水平相比，P>0.05。結(jié)論肝癌高發(fā)家族成員血清IL-23水平高于無(wú)癌家族成員。

白細(xì)胞介素23；肝細(xì)胞肝癌；家族聚集性

原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(簡(jiǎn)稱(chēng)肝癌)是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，具有侵襲性強(qiáng)、病死率高、生存率低等特點(diǎn)。中國(guó)是肝癌大國(guó)，相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查資料顯示，中國(guó)肝癌高發(fā)地區(qū)主要為江蘇、福建、浙江、山東、廣西、廣東等東南沿海一帶[1～3]。前期本課題組前往廣西少數(shù)民族居住地深入調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在某些村子，同一個(gè)家族中可有數(shù)名成員罹患肝癌。肝癌發(fā)病呈現(xiàn)明顯的家族聚集性。目前相關(guān)研究表明，肝臟免疫微環(huán)境的變化參與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程。白細(xì)胞介素23(IL-23)是肝臟免疫微環(huán)境中的重要細(xì)胞因子。本研究觀察了肝癌高發(fā)家族成員血清IL-23水平變化，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇103例肝癌高發(fā)家族成員為觀察組，其中男61例、女42例。年齡2～78(27.1±10.4)歲，年齡≤25歲53例、>25歲50例。壯族74例、瑤族29例。HBsAg陽(yáng)性25例、陰性78例。均來(lái)自廣西肝癌高發(fā)地，未患肝癌，HCV抗體均為陰性。來(lái)自15個(gè)肝癌高發(fā)家族，每個(gè)家族中有兩例或兩例以上成員有肝癌病史。包含肝癌高發(fā)家族中先證者的一級(jí)親屬(父母、子女、兄弟姐妹)56例，二級(jí)親屬(叔伯、姑舅、姨、祖父母、外祖父母)16例，三級(jí)及以上親屬(表兄妹、堂兄妹等)31例；家族成員中有2～3個(gè)先證者46例，家族成員中有4個(gè)以上先證者57例。另根據(jù)生活環(huán)境相同、水源相同、性別相同、民族相同、HBV攜帶狀況相同、年齡±5歲的配對(duì)原則納入103例無(wú)癌家族成員為對(duì)照組。

1.2 血清IL-23檢測(cè)方法 抽取兩組受試者空腹外周靜脈血3 mL于肝素鈉抗凝管中。室溫靜置1 h后，3 000 r/min常溫離心5 min分離血清，用移液槍抽取上清液20 mL置入EP管內(nèi)進(jìn)行分裝、標(biāo)序號(hào)，放入-80 ℃低溫冰箱中保存待測(cè)。采用ELISA法檢測(cè)血清IL-23，試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。先對(duì)各組血清IL-23數(shù)據(jù)行正態(tài)性檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用中位數(shù)和四分位數(shù)[M(P25，P75)]表示。配對(duì)資料比較采用配對(duì)設(shè)計(jì)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，非配對(duì)資料比較采用獨(dú)立樣本Mann-WhitneyU秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組、對(duì)照組血清IL-23水平分別為3.980(2.350，9.504)、3.548(2.087，7.925)ng/mL,兩組相比，P<0.05。觀察組、對(duì)照組男性成員血清IL-23水平分別為3.428(2.086，8.086)、3.919(2.391，8.374)ng/mL，兩組男性成員血清IL-23水平相比，P>0.05。觀察組、對(duì)照組女性成員血清IL-23水平分別為5.775(2.759，11.401)、3.110(1.865，6.383)ng/mL，兩組女性成員血清IL-23水平相比，P<0.05。觀察組、對(duì)照組HBsAg陽(yáng)性成員血清IL-23水平分別為4.265(2.702,8.313)、3.251(2.481,6.202)ng/mL，兩組HBsAg陽(yáng)性成員血清IL-23水平相比，P<0.05。觀察組、對(duì)照組HBsAg陰性成員血清IL-23水平分別為3.945(2.209,10.942)、3.712(1.903,8.681)ng/mL，兩組HBsAg陰性成員血清IL-23水平相比，P>0.05。觀察組、對(duì)照組年齡>25歲成員血清IL-23水平分別為3.372(2.130,9.181)、3.203(1.852,7.468)ng/mL，兩組年齡>25歲成員血清IL-23水平相比，P>0.05。觀察組、對(duì)照組年齡≤25歲成員血清IL-23水平分別為4.715(2.847,11.183)、4.118(2.491,8.374)ng/mL，兩組年齡≤25歲成員血清IL-23水平相比，P<0.05。觀察組、對(duì)照組壯族成員血清IL-23水平分別為4.403(2.185,9.563)、3.426(1.878,8.243)ng/mL，兩組壯族成員血清IL-23水平相比，P<0.05。觀察組、對(duì)照組瑤族成員血清IL-23水平分別為3.827(2.807,10.414)、4.118(2.447,7.028)ng/mL，兩組瑤族成員血清IL-23水平相比，P>0.05。

觀察組中先證者一級(jí)親屬、二級(jí)親屬、三級(jí)及以上親屬血清IL-23水平分別為3.980(2.350,9.504)、3.436(2.132,14.073)、6.896(3.315,13.510)ng/mL。觀察組中先證者三級(jí)及以上親屬血清IL-23水平與先證者一級(jí)親屬、二級(jí)親屬相比，P均<0.05；先證者一級(jí)親屬血清IL-23水平與先證者二級(jí)親屬相比，P>0.05。

觀察組中家族有2～3個(gè)先證者、4個(gè)以上先證者血清IL-23水平分別為3.642(2.353 ,6.757)、5.587(2.281，11.183)ng/mL，P>0.05。

3 討論

Oppmann等[4]在搜索IL-6家族序列數(shù)據(jù)庫(kù)時(shí)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)類(lèi)似于IL-12的p35亞基的新序列，并命名為p19。p19本身無(wú)活性，但與IL-12的p40亞基通過(guò)二硫鍵連接后可結(jié)合形成具有生物活性的異源二聚體，即IL-23。IL-23是IL-12家族中的一員，主要由活化的巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞及單核細(xì)胞分泌。近年來(lái)多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)IL-23在腫瘤免疫、炎癥反應(yīng)、感染及自身免疫性疾病過(guò)程中發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，尤其在腫瘤免疫微環(huán)境中是一種重要的中介和調(diào)節(jié)器。有研究表明IL-23在結(jié)直腸癌[5]、黑色素瘤[6]、乳腺癌[7]和纖維肉瘤[8]中起到了抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用。但Langowski等[9]對(duì)人類(lèi)不同類(lèi)型腫瘤組織中IL-23 p19 mRNA的表達(dá)情況進(jìn)行了全面檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與正常組織相比，p19 mRNA在不同器官腫瘤組織樣本中的表達(dá)量均顯著上調(diào)，且其表達(dá)定位于腫瘤組織中，提示IL-23具有潛在的促腫瘤效應(yīng)。Ghilardi等[10]在對(duì)IL-23 p19缺失及IL-23 p40-/-小鼠的研究中證明IL-23可通過(guò)抑制殺傷性T細(xì)胞浸潤(rùn)來(lái)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。Jantschischi等[11]也發(fā)現(xiàn)暴露于紫外線下的IL-23 p19-/-的小鼠與野生小鼠相比，更易發(fā)生腫瘤。劉永浩等[12]報(bào)道IL-23能顯著促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖，IL-23在體內(nèi)外均能直接促進(jìn)肝癌的發(fā)展。由此充分說(shuō)明，IL-23具有促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的效應(yīng)，并且與肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系，但其與肝癌家族聚集性是否存在一定的相關(guān)性，國(guó)內(nèi)外均沒(méi)有相關(guān)報(bào)道。

CD4+T細(xì)胞對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答起著重要的輔助作用，可分為不同亞型，如Th1、Th2、Th17及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)；其中Th17/Treg失衡與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[13]，且Th17占比越高，肝癌的惡性程度也越大[14]。IL-17由Th17細(xì)胞分泌，且IL-17的升高與乙肝患者從慢性乙肝到肝纖維化的進(jìn)展有關(guān)[15]。Langrish等[16]研究發(fā)現(xiàn)IL-23可通過(guò)與受體IL-23R結(jié)合來(lái)誘導(dǎo)T細(xì)胞分化為T(mén)h17細(xì)胞，繼而分泌IL-17。鄭慧麗等[17]證明只有當(dāng)IL-23與啟動(dòng)因子TGF-β同時(shí)存在時(shí)才能進(jìn)一步使CD4+T細(xì)胞分化為T(mén)h17細(xì)胞，并分泌IL-17。進(jìn)一步說(shuō)明了IL-23可通過(guò)增強(qiáng)和刺激Th17細(xì)胞分泌IL-17來(lái)促進(jìn)肝癌的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，肝癌高發(fā)家族組中未患肝癌成員的IL-23表達(dá)水平高于無(wú)癌家族組，提示處于肝癌高發(fā)家族無(wú)癌成員血清中IL-23水平已升高，據(jù)此推測(cè)在癌變發(fā)生前，肝癌高發(fā)家族成員的免疫狀態(tài)發(fā)生了微弱變化，Th17與Treg的平衡被打破，增加了罹患肝癌的風(fēng)險(xiǎn)。分層比較中還發(fā)現(xiàn)IL-23表達(dá)水平升高者以女性、年齡≤25歲、壯族成員為主。這提示肝癌高發(fā)家族組中女性、年齡≤25歲、壯族成員血清中IL-23變化相對(duì)顯著。壯族成員IL-23明顯升高符合廣西壯族人群肝癌發(fā)病率較高的研究結(jié)論[18]，不過(guò)也可能是由于本次研究中壯族成員樣本量偏大所致，還需進(jìn)一步研究。

HBV感染是促使肝癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素[19]。本研究結(jié)果顯示，肝癌高發(fā)家族中HBsAg陽(yáng)性成員血清IL-23的表達(dá)水平高于無(wú)癌家族，兩組HBsAg陰性成員血清IL-23水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示感染HBV的成員體內(nèi)Th17/Treg已出現(xiàn)失衡，機(jī)體的免疫微環(huán)境穩(wěn)態(tài)遭到破壞；但HBV感染和Th17/Treg失衡的先后、因果關(guān)系并不清楚，究竟是HBV感染后出現(xiàn)機(jī)體免疫失衡，還是免疫平衡紊亂致使機(jī)體更易受到HBV感染，還需深入研究。

此外，我們將肝癌高發(fā)家族組中不同親屬級(jí)別成員的IL-23水平進(jìn)行兩兩比較，得出先證者三級(jí)及以上親屬血清IL-23水平顯著高于一、二級(jí)親屬血清IL-23水平，但可能由于二級(jí)親屬樣本量偏少，一級(jí)親屬與二級(jí)親屬血清IL-23水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí)，肝癌高發(fā)家族中伴隨著先證者例數(shù)的增加，血清IL-23水平有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，我們推測(cè)肝癌高發(fā)家族出現(xiàn)家族聚集性，可能與遺傳因素和先證者例數(shù)無(wú)關(guān)，需擴(kuò)大樣本量或延伸至基因?qū)用孢M(jìn)行更深一步的研究。

綜上所述，肝癌高發(fā)家族成員血清IL-23水平高于無(wú)癌家族，提示IL-23與肝癌高發(fā)家族聚集性存在著一定的相關(guān)性。推測(cè)在肝癌高發(fā)家族中，無(wú)癌成員的免疫系統(tǒng)已經(jīng)在癌前發(fā)生了微弱的變化，但具體的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)機(jī)制還需進(jìn)一步研究與討論。

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國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30960170)；廣西高等學(xué)校重點(diǎn)資助科研項(xiàng)目(桂教201202ZD021)。

吳繼周(E-mail： wjz925@163.com)

2017-05-31)