王愛民， 焦海濤， 吳建龍， 張?jiān)娡?花海洋， 王學(xué)文， 王利民， 李建輝

(1.河北省承德市中心醫(yī)院, 河北 承德 067000 2.承德醫(yī)學(xué)院, 河北 承德 067000)

胃癌脈管內(nèi)癌栓中EGFR c-Met和Ki-67的相關(guān)性分析

王愛民1， 焦海濤2， 吳建龍1， 張?jiān)娡?， 花海洋1， 王學(xué)文1， 王利民1， 李建輝1

(1.河北省承德市中心醫(yī)院, 河北 承德 067000 2.承德醫(yī)學(xué)院, 河北 承德 067000)

目的：分析胃癌患者脈管內(nèi)癌栓與EGFR、c-Met和Ki-67表達(dá)的關(guān)系及其對(duì)疾病預(yù)后影響。方法：檢測(cè)EGFR、c-Met和Ki-67在88例胃癌組織，其中包括脈管內(nèi)癌栓陽性者39例中的表達(dá)情況，分析脈管內(nèi)癌栓陽性組與陰性組患者1年及3年生存率的差異。結(jié)果：脈管內(nèi)癌栓陽性組中EGFR、c-Met和Ki-67的強(qiáng)陽性表達(dá)率均高于脈管內(nèi)癌栓陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脈管內(nèi)癌栓陰性患者1年、3年生存率高于同期陽性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：EGFR、c-Met和Ki-67的表達(dá)與脈管內(nèi)癌栓及患者預(yù)后密切相關(guān)，脈管內(nèi)癌栓是胃癌患者預(yù)后不良的標(biāo)志。

胃 癌； 脈管癌栓； EGFR

胃癌是消化道常見腫瘤,位列惡性腫瘤發(fā)病率的第2位、死亡率的第3位[1]。脈管癌栓已有研究證實(shí)是影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立因素[2]，但脈管癌栓與哪些病理因素相關(guān)的研究見報(bào)道。本文分析胃癌患者脈管內(nèi)癌栓與EGFR、c-Met和Ki-67表達(dá)的關(guān)系及其對(duì)疾病預(yù)后影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料:收集承德市中心醫(yī)院病理科2010年10月至2012年7月經(jīng)石蠟包埋的胃癌組織，所有標(biāo)本均按《中國胃癌診治規(guī)范》進(jìn)行處理，并按2010年美國癌癥聯(lián)合會(huì)(AJCC)發(fā)表的第7版《惡性腫瘤的TNM分期》為標(biāo)準(zhǔn)，選出Lauren分型為腸型、TNM分期為T2N1M0的胃癌標(biāo)本149例，經(jīng)隨訪選取其中生存時(shí)間≤1年及生存時(shí)間≥3年病例共88例進(jìn)行研究。所有標(biāo)本臨床病理資料及隨訪記錄齊全。胃癌病例中，男性52例，女性36例，平均年齡58.0±4.8歲，其中有脈管癌栓39例、無脈管癌栓49例，1年生存期36例，三年生存期52例。

1.2 主要試劑:甲醇、乙醇、二甲苯、3%雙氧水、PBS、氨水、枸櫞酸鈉緩沖液、蘇木素、中性樹膠等。即用型兔抗人EGFR單克隆IgG抗體、即用型兔抗人c-Met單克隆IgG抗體、即用型鼠抗人Ki-67單克隆IgG抗體均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。即用型快捷免疫組化試劑盒(鼠)及即用型DAB顯色試劑均購自福州邁新生物技術(shù)公司。

1.3 方 法

1.3.1 標(biāo)本的處理標(biāo)本離體后均立即用10%中性福爾馬林充分固定后，經(jīng)取材、脫水及石蠟包埋制成4μm厚度蠟塊，將蠟塊連續(xù)切片，準(zhǔn)備用于HE染色及免疫組織化學(xué)染色。

1.3.2 免疫組織化學(xué)方法將切片后的標(biāo)本用二甲苯脫蠟至水后，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法標(biāo)記胃癌組織及正常胃粘膜組織EGFR、c-Met和Ki-67的表達(dá)情況。一抗為兔抗人單克隆抗體，陰性結(jié)果對(duì)照組以PBS代替，以試劑公司所提供的陽性切片做為陽性對(duì)照。

1.3.3 免疫組化結(jié)果判定:EGFR和c-Met陽性表達(dá)部位在細(xì)胞胞膜和胞漿，呈棕黃色顆粒。采用陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分的Volm雙評(píng)分法[3]對(duì)EGFR、c-Met的陽性表達(dá)水平進(jìn)行判定，0分：陰性(-)；1～2分：弱陽性(+)；3～4分：中度陽性(++)；5～6分：強(qiáng)陽性(+++)。Ki-67在胃癌組織中的陽性表達(dá)部位是胞核，棕黃色顆粒狀，本研究根據(jù)Lee HE等[4]的分類方法，應(yīng)用20%作為截?cái)嘀祵i-67LI分為>20%和≤20%兩個(gè)范圍區(qū)間，并分別定義為Ki-67高表達(dá)與Ki-67低表達(dá)。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:通過統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0完成實(shí)驗(yàn)資料的統(tǒng)計(jì)，采用Kaplan-Meier法計(jì)算生存率，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)的方法。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果以P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 EGFR、c-Met和Ki-67在胃癌患者脈管內(nèi)癌栓陽性及陰性組組織中的表達(dá):39例脈管癌栓陽性胃癌組織中，EGFR強(qiáng)陽性例數(shù)為32例(82.1%)，49例脈管癌栓陰性胃癌組織中，EGFR強(qiáng)陽性例數(shù)為5例(10.2%)(圖1)；39例脈管癌栓陽性胃癌組織中，c-Met強(qiáng)陽性例數(shù)36例(92.3%)，49例脈管癌栓陰性胃癌組織中，c-Met強(qiáng)陽性例數(shù)8例(16.3%)(圖2)；39例脈管癌栓陽性胃癌組織中，Ki-67高表達(dá)例數(shù)為37例(94.8%)，49例脈管癌栓陰性胃癌組織中，Ki-67高表達(dá)例數(shù)為9例(18.4%)(圖3)，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，三者在兩組中的表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

圖1 EGFR在脈管癌栓陽性組及脈管癌栓陰性組胃癌組織中的表達(dá)(IHC×200)

圖2 c-Met在脈管癌栓陽性組及脈管癌栓陰性組胃癌組織中的表達(dá)(IHC×200)

圖3 Ki-67在脈管癌栓陽性組及脈管癌栓陰性組胃癌組織中的表達(dá)(IHC×200)

表1 EGFR、c-Met和Ki-67在脈管癌栓陽性組及脈管癌栓陰性組胃癌組織中的表達(dá)

*Ki-67高表達(dá)

2.2 胃癌患者脈管內(nèi)癌栓陽性及陰性術(shù)后1年及3年生存率比較脈管內(nèi)癌栓陰性組1年生存率為85.7%，陽性組1年生存率為66.7%，陰性組明顯高于陽性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；脈管內(nèi)癌栓陰性組3年生存率為73.8%，陽性3年生存率為34.6%，陰性組明顯高于陽性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 脈管癌栓陽性和陰性兩組術(shù)后1年和3年生存率n(%)

3 討 論

表皮生長因子受體 (epidermal growth factor receptor，EGFR)在多種實(shí)體性腫瘤中存在過表達(dá)，如胃癌、前列腺癌、食管癌、頭頸部腫瘤等[5]。EGFR分布較廣泛，并在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，包括促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，并與血管生成、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[6]。已有研究證實(shí)在癌旁組織及胃癌組織中，EGFR的表達(dá)均明顯高于正常組織，且癌旁組織中EGFR的表達(dá)又明顯高于胃癌組織，提示EGFR在胃癌中的表達(dá)呈明顯正相關(guān)[7]。EGFR在腫瘤中表達(dá)增高提示患者存活率低、預(yù)后差、轉(zhuǎn)移可能性大。因此，EGFR在實(shí)體瘤中過度表達(dá)，往往提示病情惡化和病變預(yù)后不良[8]。本研究在前人基礎(chǔ)上進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)EGFR在脈管內(nèi)癌栓陽性組中的表達(dá)高于脈管內(nèi)癌栓陰性組，脈管內(nèi)癌栓陰性組患者術(shù)后1年及3年生存率顯著高于脈管內(nèi)癌栓陽性組患者，這說明EGFR的高表達(dá)與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，且脈管內(nèi)癌栓陽性的胃癌患者預(yù)后相對(duì)較差。EGFR是腫瘤靶向治療中一重要靶點(diǎn)，而且針對(duì)此靶點(diǎn)的藥物相對(duì)成熟，已在臨床上用于肺癌患者的治療，在胃癌治療方面還尚未見報(bào)道，通過本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)可為靶向藥物用于胃癌臨床治療提供一定的理論依據(jù)。

c-Met是肝細(xì)胞生長因子的受體，c-Met參與了腫瘤細(xì)胞增殖與移動(dòng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，并在此過程中發(fā)揮著巨大作用[9]。研究發(fā)現(xiàn)c-Met在很多腫瘤如：前列腺癌、肝癌、甲狀腺癌、腎癌、乳腺癌、胰腺等都存在過表達(dá)，而且發(fā)現(xiàn)c-Met過表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移和局部組織的侵襲密切相關(guān)[10]。對(duì)于c-Met的表達(dá)與胃癌的關(guān)系，有研究發(fā)現(xiàn)c-Met的過表達(dá)能促進(jìn)胃癌的侵襲和快速進(jìn)展，使胃癌患者病情惡化，導(dǎo)致預(yù)后較差，認(rèn)為c-Met是能預(yù)測(cè)胃癌患者預(yù)后標(biāo)記因子。本研究發(fā)現(xiàn)，合并脈管癌栓的胃癌組織中c-Met的表達(dá)明顯高于無脈管瘤栓的胃癌組織，脈管內(nèi)癌栓陰性組患者術(shù)后1年及3年生存率顯著高于脈管內(nèi)癌栓陽性組患者，進(jìn)一步說明c-Met的高表達(dá)對(duì)于胃癌患者特別是胃癌合并脈管內(nèi)癌栓的患者預(yù)后能更好的進(jìn)行判斷，提前針對(duì)性的給與臨床干預(yù)。

脈管癌栓的形成與多種惡性腫瘤的預(yù)后不良相關(guān)，胃癌也被包括其中。這與我們本次研究結(jié)論相符：胃癌合并脈管內(nèi)癌栓患者術(shù)后1年及3年生存率均顯著低于脈管內(nèi)癌栓陰性者，說明脈管癌栓與胃癌的預(yù)后不良存在明顯的相關(guān)性。EGFR、c-Met和Ki-67在胃癌合并脈管內(nèi)癌栓患者中的表達(dá)均明顯高于與脈管內(nèi)癌栓陰性者，因此提示胃癌及合并脈管內(nèi)癌栓患者EGFR、c-Met和Ki-67的表達(dá)程度越高胃癌患者的預(yù)后可能將越差，脈管內(nèi)癌栓可作為胃癌患者預(yù)后不良的標(biāo)志。

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Correlation Analysis on EGFR c-Met and Ki-67 in Gastric Cancer with Intravascular Cancer Embolus

WANGAimin,etal

(TheCentralHospitalofChengde,HebeiChengde067000,China)

Objective: To analyze the expression of EGFR, c-Met and Ki-67 in gastric cancer with intravascular cancer embolus and their influence on the prognosis. Methods: The expression of EGFR, c-Met and Ki-67 in 88 gastric cancer cases and 39 cases of intravascular cancer embolus were detected and the difference between 1-year and 3-year survival rate in cancer embolus positive and negative patients group were analyzed. Results: In gastric cancer tissue with intravascular cancer embolus, the strong positive expression rates of EGFR, c-Met and Ki-67 were all higher than those in gastric cancer tissue without intravascular cancer embolus (P<0.05). The strong positive expression rates of EGFR, c-Met and Ki-67 in gastric cancer tissue without intravascular cancer embolus 1-year and 3-year survival rate were obviously higher than those of cancer embolus positive group (P<0.05). Conclusions: The expression and prognosis of EGFR, c-Met and Ki-67 are related to the gastric cancer with intravascular cancer embolus, and has rather poor prognostic significance in gastric cancer.

Gastric cancer; Intravascular cancer embolus; Epidermal growth factor receptor

1006-6233(2017)02-0218-04

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.02.013