李龍+李瑜鑫+劉鎖珠

摘要：通過日糧中添加益生菌，研究益生菌對舍飼條件下藏雞生產(chǎn)性能和腸道微生物的影響。試驗選用360羽1日齡雄性藏雞，隨即分為3個處理組，每個處理組6個重復(fù)。3個處理組分別為對照組（不含抗生素的基礎(chǔ)日糧）、抗生素組（基礎(chǔ)日糧+金霉素50 mg/kg）、益生菌組（基礎(chǔ)日糧+益生菌109 CFU/kg）。結(jié)果顯示，相比于對照組，益生菌處理組和抗生素處理組均能夠顯著提高舍飼藏雞120日齡體質(zhì)量和平均日增質(zhì)量（P<0.05），顯著降低飼養(yǎng)期內(nèi)藏雞的死亡率（P<0.05），并且顯著降低60、120日齡藏雞盲腸中大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量（P<0.05）。益生菌能夠提高藏雞生產(chǎn)性能、降低死亡率，表現(xiàn)出與抗生素相似的促生長效果，這可能與其降低藏雞腸道中病原菌數(shù)量有關(guān)。

關(guān)鍵詞：益生菌；藏雞；舍飼；生產(chǎn)性能

中圖分類號： S831.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2016）11-0270-02

隨著西藏旅游業(yè)的迅速發(fā)展，當(dāng)?shù)貙Σ仉u的需求量也在迅速增加。藏雞主要分布在雅魯藏布江中游和三江源地區(qū)。藏雞雖然對西藏高原的特殊環(huán)境表現(xiàn)出了良好的適應(yīng)性，但其生產(chǎn)性能偏低，散養(yǎng)藏雞在6月齡體質(zhì)量才能夠達(dá)到約950 g，遠(yuǎn)不能滿足當(dāng)?shù)貙Σ仉u產(chǎn)品的需要。為了解決這一問題，當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶開始嘗試對藏雞進(jìn)行大規(guī)模的舍飼，以提高飼養(yǎng)效率，增加藏雞的產(chǎn)量。但為了生產(chǎn)安全的有機(jī)無抗肉，提高藏雞肉品質(zhì)，養(yǎng)殖戶在飼料中并未添加抗生素，這就造成藏雞在舍飼過程中疾病發(fā)生率和死亡率過高。

益生菌被認(rèn)為是1種可能的抗生素替代物。競爭性抑制病原菌、調(diào)節(jié)免疫機(jī)能和增強(qiáng)上皮屏障功能是其發(fā)揮益生作用的3個重要機(jī)理[1]。目前，已有許多研究表明益生菌能夠提高家禽的生產(chǎn)性能[2-6]，提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率[7]，促進(jìn)腸道發(fā)育[8]和改善腸道微生態(tài)[7]。但關(guān)于益生菌在藏雞飼養(yǎng)中的應(yīng)用還未見報道。因此，本試驗的目的是研究益生菌對舍飼藏雞生產(chǎn)性能和盲腸微生物的影響。

1 材料與方法

1.1 菌粉的制備

所用益生菌菌株（J113菌株，植物乳桿菌）是本試驗室前期試驗分離所得。益生菌的發(fā)酵和菌粉制備過程按照文獻(xiàn)[9]的方法進(jìn)行。首先挑取菌株單菌落制備種子液，然后將種子液接種于發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)。將發(fā)酵罐中擴(kuò)大培養(yǎng)的菌液離心，收集菌泥，加入保護(hù)劑（脫脂奶粉和甘油）混勻，冷凍干燥后研磨成粉狀，取0.1 g菌粉梯度稀釋計數(shù)，制備好的菌粉-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計，選用360羽健康1日齡雄性藏雞，根據(jù)初始體質(zhì)量隨機(jī)分為3個處理組，每個處理組設(shè)6個重復(fù)，每個重復(fù)20羽雞，進(jìn)行120 d的飼養(yǎng)試驗。處理1飼喂不含抗生素的基礎(chǔ)日糧，處理2、處理3分別在基礎(chǔ)日糧中添加金霉素50 mg/kg和J113菌株菌粉1×109 CFU/kg。試驗期飼料全部使用肉雞商品全價配合飼料。

試驗在西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院教學(xué)實習(xí)基地進(jìn)行（當(dāng)?shù)睾０? 986 m），試驗期內(nèi)自由采食和飲水。光照程序采用前2周24 h光照，以后為光照23 h，熄燈1 h。按照常規(guī)程序進(jìn)行免疫和消毒。第1周禽舍溫度保持在約30 ℃，從第2周開始逐步緩慢降溫，在飼養(yǎng)期第4周及以后溫度保持在約20 ℃。

1.3 測定指標(biāo)

1.3.1 生產(chǎn)性能與死亡率

在120 d準(zhǔn)確稱取每個重復(fù)雞羽的體質(zhì)量，并統(tǒng)計每個重復(fù)雞羽的耗料量和增質(zhì)量，計算每個重復(fù)藏雞的平均日增質(zhì)量（ADG）、平均日采食量（ADFI）和飼料利用率（FCR）。

1.3.2 盲腸微生物計數(shù)

分別在60 d和120 d每個重復(fù)組隨機(jī)選取1羽接近平均體質(zhì)量的雞（6羽雞/處理），斷頸處死后，無菌收集一臂盲腸，準(zhǔn)確稱取盲腸質(zhì)量，加入等量滅菌PBS（pH值=7.2），利用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理，勻漿液按照10倍梯度逐級稀釋，平板計數(shù)，每個樣品的微生物計數(shù)重復(fù)3次。

乳酸桿菌、雙歧桿菌、沙門氏菌和大腸桿菌分別利用乳酸菌選擇性培養(yǎng)基（HB0392）、雙歧桿菌BS培養(yǎng)基（HB0394）、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（HB7007-1）和大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 （HB7001）進(jìn)行分離和計數(shù)，其中乳酸桿菌和雙歧桿菌在 37 ℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后計數(shù)，雙歧桿菌置于厭氧袋中培養(yǎng)，沙門氏菌和大腸桿菌在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后計數(shù)。所用培養(yǎng)基均購自青島海博生物技術(shù)有限公司?；罹鷶?shù)以盲腸（盲腸+盲腸內(nèi)容物）中細(xì)菌個數(shù)的對數(shù)lg CFU/g來表示。

1.4 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)處理采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行方差分析和多重比較，死亡率進(jìn)行卡方檢驗，以P<0.05判定結(jié)果為差異顯著，P<0.01判定結(jié)果為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌對舍飼藏雞生產(chǎn)性能的影響

由表1可見，相比于對照組，抗生素和益生菌處理均顯著提高了舍飼藏雞120日齡體質(zhì)量和平均日增質(zhì)量（P<0.05），并顯著降低了飼養(yǎng)期內(nèi)藏雞的死亡率（P<0.05）。但對藏雞飼料轉(zhuǎn)化率無顯著影響（P>0.05）。

2.2 益生菌對舍飼藏雞盲腸微生物的影響

由表2可知，相比于對照組，抗生素組和益生菌處理組顯著降低了60、120日齡藏雞盲腸中大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量（P<0.05）。益生菌處理組和對照組之間乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量無顯著差異（P>0.05），但抗生素處理組顯著降低了60、90日齡藏雞盲腸乳酸桿菌數(shù)量（P<0.05），并且顯著降低了60日齡藏雞盲腸雙歧桿菌數(shù)量（P<0.05）。

3 討論

目前，評價益生菌對家禽生產(chǎn)性能影響的研究不斷增加[10]，其中乳酸菌已經(jīng)被廣泛地作為生長促進(jìn)劑在家禽生產(chǎn)中使用。在本試驗中，研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加益生菌Lactobacillus plantarum J113能顯著提高舍飼藏雞的生產(chǎn)性能，并且具有與抗生素類似的促生長效果，這與之前的部分研究結(jié)果一致。Lan等發(fā)現(xiàn)在飼料中以菌粉的形式添加106 CFU/kg益生菌L.salivarius改善了肉雞的生產(chǎn)性能，42 d體質(zhì)量相比于對照組提高了約10.7%[2]。Mutus等以同樣的飼喂方式添加0.1%益生菌（L.salivarius和L.plantarum組成的混合菌）顯著降低了肉雞料肉比[3]。并且還有研究發(fā)現(xiàn)飼喂益生菌能夠在肉雞飼養(yǎng)中發(fā)揮和卑霉素相同的促生長效果[4]，甚至優(yōu)于氯四環(huán)素[5]和氧四環(huán)素[6]的促生長效果。但也有研究表明益生菌對肉雞生產(chǎn)性能沒有影響[11]。然而，對不同的飼養(yǎng)試驗進(jìn)行直接評價是不科學(xué)的，因為許多因素都會影響益生菌的使用效果，如菌種和菌株的不同，菌株的生存能力、添加水平、添加方式、添加頻率，日糧營養(yǎng)水平，肉雞日齡、免疫和飼養(yǎng)環(huán)境等因素的不同[10]。

本研究還發(fā)現(xiàn)飼料中添加益生菌顯著降低了舍飼藏雞的死亡率。在抗生素禁用的大背景下研究人員發(fā)現(xiàn)隨著抗生素的禁用，動物集約化飼養(yǎng)過程中疾病發(fā)生率增加[12]，這可能是造成藏雞在高密度舍飼條件下死亡率過高的主要原因。而病原菌是造成家禽疾病發(fā)生和死亡的一個重要誘因，本研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加益生菌顯著降低了舍飼藏雞盲腸中病原菌（沙門氏菌和大腸桿菌）的數(shù)量，但對有益菌（乳酸桿菌和雙歧桿菌）的數(shù)量無顯著影響，這可能是由于益生菌的添加增加了早期雛雞腸道中有益菌的定植量，從而有效地抑制中后期藏雞腸道中有害菌的定植。而在試驗中后期藏雞腸道有益菌的負(fù)載量已經(jīng)飽和，因此在60、120 d時益生菌處理組和對照組之間有益菌的數(shù)量無顯著差異。雖然抗生素處理組同樣降低了舍飼藏雞腸道中有害菌的數(shù)量，但是也降低了有益菌的數(shù)量。這主要是由于金霉素是一種廣譜類抗生素，對革蘭氏陽性菌（乳酸桿菌和雙歧桿菌）和革蘭氏陰性菌（大腸桿菌和沙門氏菌）都具有較強(qiáng)的抑制作用。益生菌和抗生素提高舍飼藏雞生產(chǎn)性能、減少死亡率可能與其減少藏雞腸道病原菌數(shù)量、維持機(jī)體健康有關(guān)。

本試驗結(jié)果表明添加益生菌能夠提高舍飼藏雞的生產(chǎn)性能，減少飼養(yǎng)過程中藏雞的死亡率，并且具有和抗生素類似的效果，這可能與其有效地減少藏雞腸道中病原菌數(shù)量有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Bron P A，van Baarlen P，Kleerebezem M. Emerging molecular insights into the interaction between probiotics and the host intestinal mucosa[J]. Nature Reviews Microbiology，2012，10（1）：66-78.

[2]Lan P T，Binh L T，Benno Y. Impact of two probiotic lactobacillus strains feeding on fecal lactobacilli and weight gains in chicken[J]. The Journal of General and Applied Microbiology，2003，49（1）：29-36.

[3]Mutu ，Kocabagli N，Alp M，et al. The effect of dietary probiotic supplementation on tibial bone characteristics and strength in broilers[J]. Poultry Science，2006，85（9）：1621-1625.

[4]Mountzouris K C，Tsirtsikos P，Kalamara E，et al. Evaluation of the efficacy of a probiotic containing lactobacillus，bifidobacterium，enterococcus，and pediococcus strains in promoting broiler performance and modulating cecal microflora composition and metabolic activities[J]. Poultry Science，2007，86（2）：309-317.

[5]Yeo J，Kim K I. Effect of feeding diets containing an antibiotic，a probiotic，or yucca extract on growth and intestinal urease activity in broiler chicks[J]. Poultry Science，1997，76（2）：381-385.

[6]Zulkifli I，Abdulllah N，Azrin N M，et al. Growth performance and immune response of two commercial broiler strains fed diets containing lactobacillus cultures and oxytetracycline under heat stress conditions[J]. British Poultry Science，2000，41（5）：593-597.

[7]Mountzouris K C，Tsitrsikos P，Palamidi I，et al. Effects of probiotic inclusion levels in broiler nutrition on growth performance，nutrient digestibility，plasma immunoglobulins，and cecal microflora composition[J]. Poultry Science，2010，89（1）：58-67.

[8]Awad W A，Ghareeb K，Bhm J. Effect of addition of a probiotic micro-organism to broiler diet on intestinal mucosal architecture and electrophysiological parameters[J]. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition，2010，94（4）：486-494.

[9]王利紅. 雞源乳酸菌的分離篩選及其對肉雞生產(chǎn)性能的影響.[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué).

[10]Patterson J A，Burkholder K M. Application of prebiotics and probiotics in poultry production[J]. Poultry Science，2003，82（4）：627-631.

[11]Priyankarage N，Silva S S，Gunaratne S P，et al. Efficacy of probiotics and their effects on performance，carcase characteristics，intestinal microflora and Salmonella incidence in broilers[J]. British Poultry Science，2003，44（1）：S26-S27.

[12]Casewell M，F(xiàn)riis C，Marco E，et al. The European ban on growth-promoting antibiotics and emerging consequences for human and animal health[J]. The Journal of Antimicrobial Chemotherapy，2003，52（2）：159-161.