信芳杰，林東亮，趙 誠(chéng)，張曉娟，劉 暉

液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)在甲狀腺結(jié)節(jié)細(xì)針穿刺病理診斷中的應(yīng)用

信芳杰1，林東亮1，趙 誠(chéng)2，張曉娟2，劉 暉1

甲狀腺；液基細(xì)胞學(xué)；細(xì)針穿刺

甲狀腺結(jié)節(jié)為臨床常見疾病，隨著高分辨率超聲的普及應(yīng)用，甲狀腺結(jié)節(jié)的檢出率可達(dá)20%～76%［1］，其中惡性結(jié)節(jié)占 5%～6.5%［2］。鑒別結(jié)節(jié)的良惡性一直是臨床上的難點(diǎn)，超聲引導(dǎo)下細(xì)針穿刺活檢（ultrasonic guidance fine-needle aspiration biopsy，UG-FNAB）是一種簡(jiǎn)便、安全、微創(chuàng)的細(xì)胞學(xué)檢查方法，被國(guó)內(nèi)外公認(rèn)為是診斷甲狀腺結(jié)節(jié)性質(zhì)的首選方法［3－4］。液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查 （thinprep cytologic test，TCT）廣泛應(yīng)用于婦科宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，在非婦科尤其是甲狀腺細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查中的應(yīng)用報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)對(duì)甲狀腺細(xì)針穿刺標(biāo)本進(jìn)行傳統(tǒng)涂片和液基細(xì)胞學(xué)制片，比較兩種方法的制片質(zhì)量和診斷陽(yáng)性率，旨在提高甲狀腺結(jié)節(jié)的早期診斷準(zhǔn)確率。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2014年7月 ～2015年10月青島大學(xué)附屬醫(yī)院行 UG-FNAB的患者184例，其中男性 43例，女性141例，年齡24～76歲，平均41歲，對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)細(xì)針穿刺物分別進(jìn)行傳統(tǒng)涂片和液基細(xì)胞學(xué)制片。

1.2 方法

1.2.1 手術(shù)取材 患者取平臥位，墊高肩頸部，充分暴露甲狀腺，常規(guī)消毒鋪巾。使用連接22G針頭的5mL注射器，超聲引導(dǎo)下穿刺入甲狀腺結(jié)節(jié)內(nèi)，不同方向快速來(lái)回穿刺 15 ～20次，拔出針頭后囑患者局部壓迫30 min。

1.2.2 細(xì)胞學(xué)制片方法 （1）傳統(tǒng)涂片：細(xì)針穿刺物吹打于清潔載玻片上，置于2張載玻片之間，稍加壓力反向拉開，每個(gè)標(biāo)本拉片2～4張，95%乙醇固定30 min，HE染色購(gòu)自珠海貝索公司。（2）液基細(xì)胞學(xué)制片：細(xì)針穿刺物直接注入液基細(xì)胞保存液中，針管在保存液中反復(fù)抽吸 5次，清洗殘留在針管中的細(xì)胞，液基制片試劑購(gòu)自廣州安必平公司。第一次離心：600 g 10 min，棄上清液，置漩渦混合器上振蕩30 s；加入5 mL細(xì)胞保存液，用軟吸管將標(biāo)本混勻后轉(zhuǎn)移至 12 mL離心管中；第二次離心：600 g 5 min，棄上清液，漩渦振蕩30 s；根據(jù)沉淀量，加入1～2 mL緩沖液，漩渦振蕩混勻。使用 LBP液基細(xì)胞沉降式自動(dòng)制片系統(tǒng)，每張涂片取200μL細(xì)胞混懸液制片，HE染色。

1.3 結(jié)果判斷滿意標(biāo)本為涂片中可見至少6個(gè)濾泡細(xì)胞團(tuán)，每團(tuán)有10個(gè)以上濾泡上皮細(xì)胞［5］。結(jié)果分析采用 Bethesda報(bào)告系統(tǒng)，將細(xì)胞制片分為以下6類：（1）標(biāo)本無(wú)法診斷或不滿意；（2）良性；（3）意義不明確的濾泡性病變；（4）濾泡性腫瘤或可疑濾泡性腫瘤；（5）可疑惡性腫瘤；（6）惡性腫瘤。惡性腫瘤患者取手術(shù)后病灶組織，行組織病理學(xué)檢查并以此作為金標(biāo)準(zhǔn)，所有涂片及組織切片由病理診斷醫(yī)師在顯微鏡下觀察并比較。細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性診斷率 ＝（惡性腫瘤病例數(shù)／總病例數(shù)）×100%，細(xì)胞學(xué)標(biāo)本滿意率 ＝（總病例數(shù) －無(wú)法診斷或不滿意病例數(shù)／總病例數(shù)）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用 SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料率的比較進(jìn)行 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)比較液基細(xì)胞學(xué)制片與傳統(tǒng)涂片在背景、細(xì)胞量、細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)、制片質(zhì)量等方面均有所不同（圖1、2），詳見表1。

表1 兩種制片方法細(xì)胞學(xué)形態(tài)比較

2.2 診斷率比較184例液基制片及傳統(tǒng)涂片中，無(wú)法診斷或不滿意標(biāo)本分別有 7、16例，標(biāo)本滿意率分別為96.2% （177／184）和91.3%（168／184）；液基制片及傳統(tǒng)涂片的陽(yáng)性診斷率分別為51.1%（94／184）和46.2%（85／184），兩種方法陽(yáng)性診斷率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.88，P＞0.05，表2）。惡性腫瘤患者手術(shù)后行組織病理學(xué)檢查，術(shù)后診斷均為甲狀腺癌，液基制片及傳統(tǒng)涂片陽(yáng)性診斷與組織學(xué)診斷符合率為100%。

圖1 甲狀腺乳頭狀癌傳統(tǒng)涂片，細(xì)胞重疊，背景雜亂，血細(xì)胞、膠質(zhì)多 圖2 甲狀腺乳頭狀癌液基制片，細(xì)胞單層排列，背景清晰，可見核內(nèi)假包涵體

表2 兩種制片方法診斷結(jié)果比較

3 討論

甲狀腺結(jié)節(jié)臨床發(fā)病率較高，結(jié)節(jié)性質(zhì)的確定對(duì)甲狀腺腫瘤的早期診斷、早期手術(shù)十分重要，UG-FNAB是確定甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性最可靠、最有價(jià)值的診斷方法［3－6］。甲狀腺組織血供豐富，濾泡中膠質(zhì)含量較多，細(xì)針穿刺物及其細(xì)胞學(xué)涂片極易受血細(xì)胞、膠質(zhì)等成分的影響。因此，提高細(xì)針穿刺的準(zhǔn)確性和特異性，獲得良好的穿刺標(biāo)本和高質(zhì)量的細(xì)胞學(xué)涂片尤為重要。

1991年美國(guó)最先使用 TCT檢測(cè)婦科脫落細(xì)胞學(xué)，近年來(lái)逐漸應(yīng)用于痰液、尿液、胸腹水等非婦科標(biāo)本的檢查，在細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)方面也取得了良好效果［7］，本實(shí)驗(yàn)也得出相似結(jié)論：TCT利用專門的細(xì)胞保存瓶和保存液最大限度的收集細(xì)針穿刺細(xì)胞，穿刺針頭可在保存液中反復(fù)抽吸沖洗，使細(xì)胞富集集中，避免傳統(tǒng)涂片穿刺針中大量穿刺物的殘留和丟失。液基細(xì)胞學(xué)制片過(guò)程中，通過(guò)反復(fù)離心、振蕩、去上清液，利用沉降式制片富集有效的診斷性細(xì)胞，全自動(dòng)制片染色機(jī)制片，使細(xì)胞單層排列，均勻分布，制成直徑 13 mm的圓形薄片。Frost等［8］表明 TCT涂片1～2張就可以滿足甲狀腺穿刺細(xì)胞學(xué)的診斷。相比傳統(tǒng)涂片法液基細(xì)胞學(xué)制片可使診斷細(xì)胞更加集中，縮小觀察范圍，提高診斷效率。

鏡下觀察兩種制片細(xì)胞學(xué)形態(tài)，傳統(tǒng)涂片背景雜亂，細(xì)胞成團(tuán)塊狀或重疊排列，紅細(xì)胞、膠質(zhì)等成分混合，診斷性細(xì)胞易被遮蓋，且細(xì)胞量多少不定、分散分布，易導(dǎo)致假陰性；而液基細(xì)胞學(xué)制片細(xì)胞集中于玻片中央，背景干凈清晰，細(xì)胞呈單層排列，紅細(xì)胞、膠質(zhì)減少，細(xì)胞核更清晰，更易觀察核膜、核溝和核內(nèi)假包涵體，細(xì)胞學(xué)制片質(zhì)量明顯提高。

液基細(xì)胞學(xué)制片通過(guò)標(biāo)本的收集、轉(zhuǎn)運(yùn)、分離提取和自動(dòng)化制片，降低了涂片不滿意率，本組184例標(biāo)本中，TCT無(wú)法診斷或不滿意標(biāo)本僅7例，相較于傳統(tǒng)制片16例，標(biāo)本滿意率由91.3%（168／184）提高到96.2%（177／184）；兩者陽(yáng)性診斷率分別為51.1%（94／184）和46.2%（85／184），檢出的陽(yáng)性例數(shù)有所提高，但兩種方法的陽(yáng)性診斷率差異尚不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與許映斌等［9］報(bào)道的一致。本實(shí)驗(yàn)兩種制片方法的惡性檢出率均高于文獻(xiàn)報(bào)道的 5%～6.5%［2］，是由于患者在首次甲狀腺超聲檢查后，超聲醫(yī)師對(duì)可疑惡性病例進(jìn)行篩選，再次行超聲引導(dǎo)下細(xì)針穿刺，導(dǎo)致惡性檢出率的提高。

液基細(xì)胞學(xué)制片與傳統(tǒng)涂片一樣，也有一定的局限性，細(xì)針穿刺的結(jié)節(jié)太小或未取到典型病變區(qū)域，或穿刺細(xì)胞量少等，均可影響病理診斷。因此，有經(jīng)驗(yàn)的超聲醫(yī)師和熟練準(zhǔn)確的穿刺手法是獲得高質(zhì)量標(biāo)本的前提。另外，細(xì)針穿刺標(biāo)本無(wú)法提供病變組織的整體結(jié)構(gòu)及其與周圍組織的關(guān)系，無(wú)法觀察是否浸潤(rùn)包膜或血管。因此 TCT對(duì)濾泡性腫瘤的診斷較為困難。

細(xì)針穿刺細(xì)胞量對(duì)病理診斷有著重要作用，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)根據(jù)細(xì)針穿刺物的多少，向液基細(xì)胞學(xué)制片最終離心沉淀物加入1～2 mL的緩沖液，制片時(shí)每張玻片吸取200μL細(xì)胞混懸液可獲得滿意涂片。液基細(xì)胞學(xué)制片可以提供良好的背景和清晰的形態(tài)，有利于存儲(chǔ)標(biāo)本和對(duì)同一標(biāo)本進(jìn)行多種分析，可進(jìn)行特殊染色或免疫組化以輔助診斷［10－11］。

本組結(jié)果顯示，TCT技術(shù)應(yīng)用于甲狀腺細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)診斷中，可改善穿刺細(xì)胞丟失率高、涂片不均勻等問(wèn)題，使制片質(zhì)量明顯提高，且陽(yáng)性診斷率與傳統(tǒng)涂片相似，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

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R 446.8

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1001－7399（2017）01－0107－03

10.13315／j.cnki.cjcep.2017.01.029

接受日期：2016－10－30

青島大學(xué)附屬醫(yī)院青年科研基金（No2093）

青島大學(xué)附屬醫(yī)院1病理科、2腹部超聲科，青島 266555

信芳杰，女，碩士，主管技師。Tel：（0532）82919350，

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