姜旭萌, 李楊坤, 梁俊峰, 伍建榕

(1.西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，云南 昆明 650224；2.中國林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所，廣東 廣州 510520)

中國紅菇屬2個新記錄種

姜旭萌1,2, 李楊坤2, 梁俊峰2, 伍建榕1

(1.西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，云南 昆明 650224；2.中國林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所，廣東 廣州 510520)

報道了中國發(fā)現(xiàn)的紅菇屬2個新記錄種辛德紅菇(RussulathindiiK. Das & S. L. Miller)和甜汁紅菇(RussulasapineaSarnari Boll.).對采自我國的這2個記錄種標(biāo)本進(jìn)行宏觀和微觀形態(tài)研究，并對其重要顯微特征進(jìn)行繪圖.同時，采用分子生物學(xué)方法，通過系統(tǒng)發(fā)育分析探討其屬內(nèi)分類位置.

紅菇屬; 新記錄種; 形態(tài)學(xué); 系統(tǒng)發(fā)育

紅菇屬(RussulaPers.)隸屬于擔(dān)子菌門(Basidiomycota)傘菌綱(Agaricomycetes)紅菇目(Russulales)紅菇科(Russulaceae)[1].該屬真菌多為外生菌根菌，能與多種植物共生形成菌根，常發(fā)生于夏秋兩季針葉林、闊葉林和混交林中的稠樹林，在森林生態(tài)系統(tǒng)中具有非常重要的作用[2-5].紅菇屬真菌具有重要的經(jīng)濟(jì)價值，比如在中國南部、東南亞一帶廣受歡迎的灰肉紅菇復(fù)合群(R.griseocarnosacomplex)，已經(jīng)被證實具有防癌、補(bǔ)血等多種食療保健功能；但也有一些紅菇種類有毒，比如毒紅菇[R.emetica(Schaeff.) Pers.]、亞稀褶紅菇(R.subnigricans)等[6-8].

紅菇屬真菌分布廣泛，大約有750余種[9]，我國已報道大約有160余種[10-12].本文通過對我國紅菇的形態(tài)及分子系統(tǒng)學(xué)的研究，發(fā)現(xiàn)2個新記錄種，并進(jìn)行描述報道，為進(jìn)一步研究我國紅菇屬真菌多樣性提供參考.

1 材料與方法

1.1 供試標(biāo)本

研究材料采集于湖北省、四川省、西藏自治區(qū)，標(biāo)本經(jīng)標(biāo)本干燥器50 ℃干燥后保存于中國林業(yè)科學(xué)院熱帶林業(yè)研究所標(biāo)本館.

1.2 方法

1.2.1 形態(tài)學(xué)研究 標(biāo)本的宏觀外部形態(tài)特征來自采集者野外采集新鮮子實體的記錄.顯微特征則在OLYMPUS BX51顯微鏡下進(jìn)行觀察；擔(dān)孢子通過JSM-6510 LV掃描電鏡觀察.為便于顯微觀察研究，從干燥標(biāo)本組織局部取樣，置于5%(體積分?jǐn)?shù)) KOH 溶液中復(fù)水；再用1%剛果紅試劑染色，在明視野或相差視野下觀察、記錄和繪圖.用梅氏試劑測定其擔(dān)孢子壁是否為擬糊精質(zhì)，用甲酚藍(lán)測定擔(dān)孢子壁是否變色.擔(dān)子測量值來源于具有小梗的成熟擔(dān)子，小梗長度不計.擔(dān)孢子只測量其側(cè)面的長度和寬度，擔(dān)孢子的側(cè)生小尖和紋飾不記入內(nèi)[13]；其結(jié)構(gòu)大小用明美數(shù)碼成像系統(tǒng)測量.

從研究標(biāo)本的成熟擔(dān)子果上，隨機(jī)測量20個成熟擔(dān)孢子.擔(dān)孢子的長度或?qū)挾扔?a)b-c(d)表示，95%的測量數(shù)值落在b-c，a、d分別為測量數(shù)據(jù)中的最小值和最大值；擔(dān)孢子的長寬比用Q表示，Qav表示擔(dān)孢子長寬比的算術(shù)平均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差.[n/m/p]表示測量p份標(biāo)本的m個子實體上的n個擔(dān)孢子.

1.2.2 分子系統(tǒng)學(xué)研究 DNA采用改良的CTAB法提取[14].內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列(ITS)用ITS5和ITS4引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增[15].PCR體系：2.5 μL 10×PCR Buffer、2.5 μL dNTP(200 μmol·L-1)、ITS5(5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′)和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)引物各1 μL(5 μmol·L-1)、17 μL ddH2O、DNA模板1 μL.PCR產(chǎn)物由北京奧科鼎盛生物科技有限公司用 Bioteke′s Purification Kit試劑盒純化，通過ABI3730 DNA測序儀測序.新記錄種序列采用上述序列測得.其它序列是在前人研究的基礎(chǔ)上，利用Genbank數(shù)據(jù)庫中的Blast軟件篩選獲得.對匯總后的序列用Bioedit v7.0.9進(jìn)行多序列比對，并用Gblocks v0.91b進(jìn)行保守區(qū)選擇，最后進(jìn)行人工微調(diào)[16,17].分子系統(tǒng)發(fā)育樹通過 RAxML7.2.6和Mrbayes分別采用最大似然法和貝葉斯推斷法完成.核苷酸替代模型用MrModeltest 2.3進(jìn)行篩選[18].同時選用已經(jīng)報道的煙色紅菇[R.adusta(Pers.) Fr.]和黑紅菇[R.nigricans(Bull.) Fr.]作為外類群[19].

2 形態(tài)學(xué)與系統(tǒng)發(fā)育分析

2.1 辛德紅菇RussulathindiiK. Das & S. L. Miller, Mycosphere, 2014, 5(5): 618

子實體中型(圖1A).菌蓋直徑3.5～8 cm，初時半球形，中間凸，后漸漸平凸，成熟時平展或向上呈淺漏斗狀；表面光滑，潮濕時呈粘質(zhì)或發(fā)粘；中央血紅色與淺黃色混合色調(diào)，邊緣部分顏色呈血紅色至淺灰紅色，略帶淺黃褐色；成熟時中央偶帶珊瑚色，干后帶淡綠色；菌蓋邊緣有明顯條紋，具槽，幼時內(nèi)卷，成熟時下彎.菌褶密，乳白色，成熟時帶淡黃色調(diào)，近柄處分叉，直生至微彎生，具有3～4層小菌褶，受傷不變色，干后變暗黃色.菌柄(5～8.8) cm×(1～2.3) cm，中生，初髓狀后中空，近棒狀，有時基部稍窄；表面具脈絡(luò)狀條紋，濕時粘，表面淡紅色至酒紅色；幼時基部白色，成熟后漸漸變?yōu)殚冱S色或淡黃色至淡橙色.菌肉結(jié)實，菌蓋薄，淡黃白色，遇5%(體積分?jǐn)?shù))KOH溶液不變色.味道略苦辣.氣味淡香.孢子印微淡黃色.

圖1 辛德紅菇子實體(A)和擔(dān)孢子(B)；甜汁紅菇子實體(C)和擔(dān)孢子(D)Fig.1 Sporophore(A) and basidiospores(B) of R.thindii; sporophore(C) and basidiospores(D) of R.sapinea

擔(dān)孢子(圖1B)[40/2/2](6.5)6.8～8.6(9.9)μm×(6.0)6.2～7.0(7.3)μm (Qav=1.17±0.07)，近球形至寬橢球形，無色；表面紋飾淀粉質(zhì)，疣突高達(dá)1.2 μm，大多呈孤立，近圓柱形，之間較少或無連線；臍上區(qū)點(diǎn)斑非淀粉質(zhì).擔(dān)子(圖2A)(28～56.5) μm×(9.0～12.5) μm，尺寸變化較大，粗棒狀至棒狀的2～4個擔(dān)子小梗向一側(cè)腫脹，成熟的小梗長達(dá)8.0 μm.側(cè)生囊狀體(圖2B)(41.5～123) μm×(12～15) μm，豐富，近圓柱形、棍棒狀或紡錘形，頂端圓鈍，少或無乳頭狀短尖，薄壁，含有豐富的晶體或纖維狀內(nèi)容物，遇硫酸香草醛溶液變灰黑色.褶緣囊狀體(圖2C)(41～75) μm×(7.5～10.5) μm，豐富，圓柱形或紡錘形，薄壁，頂端鈍圓，少或無念珠狀附屬物；內(nèi)容物豐富，遇硫酸香草醛溶液變灰黑色.子實層厚50 μm，層狀菌髓由無數(shù)球狀細(xì)胞(10.5～56.5) μm×(8～48.5) μm和常分支具隔的菌絲(2.5～5 μm)組成.蓋表皮(圖2D)由透明的菌絲和囊狀體組成；菌絲柵欄狀排列，末端向外延伸，鈍圓，3～5.5 μm寬，常分支，具隔；蓋表囊狀體(23.5～50) μm×(5～8) μm，圓柱狀或棍棒狀，頂端鈍圓；遇硫酸香草醛溶液變灰黑色.菌柄表皮菌絲寬40 μm，平行排列；柄生囊狀體缺失.鎖狀聯(lián)合缺失.

A.擔(dān)子；B.側(cè)生囊狀體；C.褶緣囊狀體；D.蓋表菌絲和蓋表囊狀體.圖2 辛德紅菇顯微結(jié)構(gòu) Fig.2 Microscopical structures of R.thindii

生長季節(jié)為夏秋兩季，生境為冷杉針葉林下.

模式產(chǎn)地：印度錫金[20].

分布：印度、中國(湖北、西藏).

研究標(biāo)本：湖北神農(nóng)架林區(qū)木魚鎮(zhèn)神龍頂青云梯冷杉林，海拔1 800 m，2015年8月7日，李楊坤60(RITF2712)；西藏林芝地區(qū)墨脫縣墨脫公路冷杉林，2014年7月3日，王苗 T25044(RITF2722).

辛德紅菇主要鑒別特征：菌蓋紅色粘質(zhì)，菌褶直生略彎生，菌柄帶微紅至紫紅色調(diào)，味道辣，淡黃色孢子印，與冷杉共生.綜合這些特征，辛德紅菇(R.thindii)應(yīng)屬于紅菇屬下的紅菇亞屬(subg.RussulaRomagnesi)辣味組(sect.SardoninaeSinger)[21].

采自我國的標(biāo)本序列通過GenBank數(shù)據(jù)庫中Blast序列比對，與R.thindii序列同源性達(dá)99%.利用最大似然法和貝葉斯推斷法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)，結(jié)果顯示采集自我國的標(biāo)本與R.thindii聚在一個分支上,靴帶支持率90%，后驗概率0.98，并與其它辣味組紅菇明顯聚集在一起.

圖3 系統(tǒng)發(fā)育分析Fig.3 Maximum likelihood analysis of R.thindii and R. sapinea

與模式標(biāo)本相比，采集自西藏的標(biāo)本(RITF2722)大多數(shù)擔(dān)子呈粗棒狀，少量棒狀；而采自湖北的標(biāo)本(RITF2712)擔(dān)子較大，多為棒狀，但其它特征均與模式標(biāo)本較一致.綜合形態(tài)與分子證據(jù)，認(rèn)為這兩份標(biāo)本應(yīng)該屬于R.thindii.

由圖3可知，辛德紅菇與凱萊紅菇(R.queletiiFr.)和血紅菇[(R.sanguinea(Bull.) Fr.)]近緣，且辛德紅菇與凱萊紅菇具有相對較近的親緣關(guān)系，聚在一支的靴帶支持率為78%.辛德紅菇與凱萊紅菇的主要區(qū)別在于凱萊紅菇菌柄較短，菌肉帶有很強(qiáng)的水果香味，缺乏苦辣味道，孢子表面疣突多，連線呈不完整或者近完整網(wǎng)狀[22].與血紅菇的區(qū)別在于血紅菇菌蓋呈血紅色，并具有較辣的菌肉，孢子印顏色呈奶油色，臍上區(qū)具有明顯的淀粉質(zhì)點(diǎn)[6,22].

2.2 甜汁紅菇RussulasapineaSarnari Boll. Assoc. Micol. Ecol. Romana, 1994, 12(33): 21

子實體中型(圖1C).菌蓋直徑3～6.5 cm，初時半球形，中央凸起，成熟后平展，不對稱，中央下凹，表面不平，濕潤時略粘，子實體干后柔軟；菌蓋顏色變化多樣，淡粉橙色至紫丁香顏色，成熟時中央常帶有橄欖色和土黃混合色；菌蓋邊緣幼時稍內(nèi)卷，易開裂，表面有條紋，具槽.菌褶稍密，直生或近離生，等長，無小菌褶，近柄處易分叉，易碎，波狀，中間較寬，乳白色，邊緣淡白色，干后泛淡橙黃色.菌柄(3～7) cm×(1～1.8) cm，白色，不規(guī)則圓柱狀，向基部逐漸變大，無菌環(huán)菌托，表面較有韌性，具微細(xì)皺紋，初內(nèi)實，后內(nèi)部松軟,濕時水浸狀.菌肉白色，干后較松軟，老后略變銹赭色.氣味水果腐爛味，味道略甜.孢子印橙黃色或赭黃色.

擔(dān)孢子(圖1D)[20/1/1]8.5～10.5 × 6.5～9.0 μm(Qav=1.12±0.09)，橢球形或近橢球形，表面具淀粉質(zhì)疣突，高約1.2 μm，疣突圓柱形，多孤立，有時相連成不規(guī)則連線或成短脊；臍上區(qū)點(diǎn)斑淀粉質(zhì).擔(dān)子(圖4A)(32.5～64) μm×(12～16) μm，棒狀，具有2～4個小梗，向一側(cè)腫脹，成熟的小梗長達(dá)10 μm.側(cè)生囊狀體(圖4B)(60～93) μm×(9.0～13.5) μm，不規(guī)則的棒狀或梭狀，數(shù)量豐富，頂端有乳頭狀短尖或圓鈍，薄壁，含有豐富的晶體或纖維狀內(nèi)容物，遇硫酸香草醛溶液變灰黑色.褶緣囊狀體(圖4C)(45～75) μm×(9.0～12.5) μm，近梭形，數(shù)量較少，頂端常具乳狀突起或念珠狀附屬物，薄壁，含有豐富的晶體或纖維狀內(nèi)容物.蓋表皮(圖4D)菌絲3.0～4.5 μm，近匍匐排列，有分隔，末端向外延伸，末端細(xì)胞頂部鈍圓，末端細(xì)胞(15～30) μm×(3.0～4.0) μm，近細(xì)棒狀，近末端處常有分支.蓋表囊狀體(36～61.5) μm×(5.5～9.0) μm，棒狀至細(xì)棒狀，有隔，頂端圓鈍，含纖維狀內(nèi)容物.菌柄表皮菌絲寬2.5～5.0 μm，有隔，無色透明，菌柄囊狀體未見.鎖狀聯(lián)合缺失.

A.擔(dān)子；B.側(cè)生囊狀體；C.褶緣囊狀體；D.蓋表菌絲和蓋表囊狀體.圖4 甜汁紅菇的顯微結(jié)構(gòu)Fig.4 Microscopical structures of R.sapinea

生長季節(jié)為夏秋兩季，生境為云杉、落葉松針林或混交林.

模式產(chǎn)地：意大利[6].

分布：歐洲(挪威、芬蘭等)[21]、中國(四川).

研究標(biāo)本：四川省阿壩藏族羌族自治州理縣米亞羅風(fēng)景區(qū)，2014年6月24日，趙琦 T25439(RITF2700).

甜汁紅菇的主要鑒別特征為菌蓋顏色近粉紅色至淡紫丁香色，菌蓋中央經(jīng)常橄欖色，菌褶等長，菌柄較肥厚，味道甜，孢子印赭黃色.綜合這些特征，甜汁紅菇應(yīng)屬于嬌弱亞屬(Sect.TenellulaRomagnesi)落葉松亞組(Subsect.LaricinaeRomagnesi)[21,22].

采自我國的標(biāo)本序列通過Genbank數(shù)據(jù)庫中Blast序列比對，與R.sapinea序列同源性達(dá)99%.系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)顯示該標(biāo)本與R.sapinea聚在一個分支上，靴帶支持率92%，后驗概率0.98，并與其它落葉松亞組明顯聚在一起.

甜汁紅菇和臭味紅菇[R.nauseosa(Pers.) Fr.]近緣, 靴帶支持率81%，后驗概率0.99.甜汁紅菇與臭味紅菇的區(qū)別在于后者具有菌肉不變色，菌蓋顏色多偏向紅色，味道中和，菌肉易碎，孢子疣突更多成孤立狀態(tài)[21].與美紅菇(R.puellarisFr.)在外觀上相似，與美紅菇的區(qū)別在于美紅菇具有較小的孢子，且上面紋飾連線較少[21].

3 小結(jié)

中國發(fā)現(xiàn)的辛德紅菇和甜汁紅菇屬2個新記錄種.采自西藏的標(biāo)本(RITF2722)和湖北的標(biāo)本(RITF2712)與印度報道的辛德紅菇R.thindii序列同源性高達(dá)99%，西藏的標(biāo)本與辛德紅菇模式標(biāo)本形態(tài)特征基本一致，而湖北的標(biāo)本擔(dān)子較模式標(biāo)本略大，其它特征均一致，故將上述兩標(biāo)本鑒定為辛德紅菇.采集自四川的標(biāo)本(RITF2700)與歐洲報道的甜汁紅菇R.sapinea序列同源性達(dá)99%，該標(biāo)本囊狀體數(shù)量較模式標(biāo)本豐富，其他特征均與模式標(biāo)本一致，綜合形態(tài)與分子證據(jù)，將該標(biāo)本鑒定為甜汁紅菇.

致謝：感謝昆明理工大學(xué)王苗同學(xué)提供標(biāo)本照片和采集記錄，也感謝中科院微生物研究所李國杰博士為本文的修改提供建議.

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(責(zé)任編輯:葉濟(jì)蓉)

Two newRussulaspecies in China

JIANG Xumeng1,2, LI Yangkun2, LIANG Junfeng2, WU Jianrong1

(1.College of Forestry, Southwest Forestry University, Kunming, Yunnan 650224, China; 2.Research Institute of Tropical Forestry, Chinese Academy of Forestry, Guangzhou, Guangdong 510520, China)

Two new Chinese records,RussulathindiiK. Das & S. L. Miller andR.sapineaSarnari Boll, are reported. The detailed descriptions of micro- and macro-morphological features of the two species based on Chinese specimens are provided, and illustrations on important microscopical characteristics of both species are offered. Meanwhile, molecular biology method was used to discuss the phylogenetic position of the two species.

Russula; new record species; morphology; phylogeny

2016-06-18

2016-09-17

國家自然科學(xué)基金(31570544)和廣東省自然科學(xué)基金項目(2014A030313727).

姜旭萌(1991-)，女，碩士研究生.研究方向:資源微生物.通訊作者梁俊峰(1971-)，男，研究員，博士生導(dǎo)師.研究方向:森林微生物資源遺傳多樣性，Email：jfliang2000@163.com

Q949.329

A

1671-5470(2017)01-0103-06

10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2017.01.016