訾和平++++++石孝孝++++++楊曉榮++++++汪莉莉++++++王文彥

[摘要] 目的 探討支氣管哮喘合并肺炎支原體（MP）感染患兒外周血CD25、干擾素-γ（INF-γ）、白細(xì)胞介素-5（IL-5）表達(dá)水平及相關(guān)性。 方法 選取2015年2月～2016年2月陜西省榆林市中醫(yī)醫(yī)院兒科收治的79例支氣管哮喘患兒為觀察對象，其中合并MP感染39例為合并MP組，未合并MP感染40例為未合并MP組；選取同期38例體檢健康兒童作為對照組。采用流式細(xì)胞儀檢測受試者外周血CD25表達(dá)水平，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測受試者外周血INF-γ、IL-5表達(dá)水平，采用多因素Logistic回歸分析其危險因素，采用Pearson相關(guān)性分析合并MP組患兒外周血中各研究指標(biāo)間的相關(guān)性。 結(jié)果 合并MP組、未合并MP組外周血CD25、IL-5水平均高于對照組（P < 0.05），且合并MP組高于未合并MP組（P < 0.05）；合并MP組、未合并MP組外周血INF-γ水平低于對照組（P < 0.05），且合并MP組低于未合并MP組（P < 0.05）。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，外周血CD25、INF-γ、IL-5為支氣管哮喘合并MP的獨立危險因素（P < 0.05）。Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，支氣管哮喘合并MP外周血CD25水平與INF-γ水平呈明顯正相關(guān)（r = 0.746，P < 0.05），INF-γ水平與IL-5水平呈負(fù)相關(guān)（r = -0.541，P < 0.05），CD25水平與IL-5水平呈負(fù)相關(guān)（r = -0.613，P < 0.05）。 結(jié)論 支氣管哮喘合并MP患兒外周血CD25、INF-γ、IL-5表達(dá)與疾病的發(fā)生密切相關(guān)，且三者之間存在一定的相關(guān)性，推測三者有望成為支氣管哮喘合并MP的血清學(xué)診斷指標(biāo)及治療新靶點。

[關(guān)鍵詞] 支氣管哮喘；肺炎支原體感染；CD25；干擾素-γ；白細(xì)胞介素-5

[中圖分類號] R562.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2016）11（b）-0098-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and correlation of CD25， IFN-γ and IL-5 in peripheral blood of children with bronchial asthma combined with Mycoplasma pneumoniae （MP） infection. Methods 79 cases of children with bronchial asthma in Department of Pediatrics， Traditional Chinese Medicine Hospital of Yulin City， Shaanxi Province from February 2015 to February 2016 were selected as observation objects. 39 cases of combined with MP infection as combined with MP group， 40 cases of without MP infection as without MP group. 38 cases of healthy children at the same time were selected as control group. The expression level of CD25 in peripheral blood was detected by flow cytometry. The expression levels of IL-5 and INF-γ in peripheral blood were detected by ELISA. Multivariate Logistic regression analysis was used to analyze risk factors. Pearson method was used to analyze the correlation between the indexes of peripheral blood in the patients with MP group. Results Peripheral blood CD25， IL-5 levels of combined with MP group and without MP group were higher than those of control group （P < 0.05）， and combined with MP group was higher than that without MP group （P < 0.05）. Peripheral blood INF-γ expression levels of combined with MP group and without MP group were lower than those of control group （P < 0.05）， and combined with MP group was lower than that without MP group （P < 0.05）. Logistic regression analysis showed that peripheral blood CD25， INF-γ， IL-5 was the independent risk factor respectively of bronchial asthma combined with MP （P < 0.05）. Pearson correlation analysis showed that peripheral blood CD25 level of bronchial asthma combined with MP was significantly positively correlated with INF-γ level （r = 0.746， P < 0.05）， INF-γ level was negatively correlated with the level of IL-5 （r = -0.541， P < 0.05）， the level of CD25 was negatively correlated with the level of IL-5 （r = -0.613， P < 0.05）. Conclusion The expression of CD25， INF-γ and IL-5 in children with bronchial asthma combined with MP is closely related to the occurrence of the disease， there is a certain correlation among three. CD25， INF-γ， IL-5 are expected to become new target for the diagnosis and treatment of bronchial asthma complicated with MP.

[Key words] Bronchial asthma； Mycoplasma pneumoniae infection； CD25； INF-γ； IL-5

支氣管哮喘是兒科最為常見的呼吸道疾病之一，臨床主要表現(xiàn)為反復(fù)、可逆性咳嗽和喘息，呼吸困難，胸悶等癥狀[1]，目前認(rèn)為其為一種慢性氣道持續(xù)性炎癥疾病[2]。肺炎支原體（Mycoplasam pneumoniae，MP）感染是導(dǎo)致幼兒發(fā)生呼吸道感染最為常見的病原之一[3]，近年來感染率呈現(xiàn)一定的上升趨勢[4]。支氣管哮喘合并MP感染會導(dǎo)致患兒哮喘加重，遷延不愈。目前，支氣管哮喘合并MP感染發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，研究表明，免疫功能紊亂與支氣管哮喘及MP感染發(fā)病均關(guān)系密切[5]。因此，本研究旨在探討支氣管哮喘合并MP感染患兒外周血CD25、干擾素（INF）-γ、白細(xì)胞介素（IL）-5表達(dá)水平及相關(guān)性，試圖為支氣管哮喘合并MP免疫治療提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年2月～2016年2月陜西省榆林市中醫(yī)醫(yī)院兒科收治的79例支氣管哮喘患兒為觀察對象，所選患兒均符合《諸福棠實用兒科學(xué)》[6]第8版中支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)熱者42例，最高體溫39～40℃，咳嗽伴有白色黏痰者32例，痰中帶血者4例，其中合并MP感染者39例為合并MP組，男19例，女20例，年齡1～8歲，平均（5.31±2.26）歲，MP感染符合《諸福棠實用兒科學(xué)》[6]第8版中MP肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)；未合并MP感染者40例為未合并MP組，男22例，女18例，年齡2～8歲，平均（5.46±2.14）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患兒均符合支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)，合并MP者同時應(yīng)符合MP診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡≤8歲，性別不限；③近2個月內(nèi)未應(yīng)用免疫抑制劑和調(diào)節(jié)劑者；④患兒家長了解本研究，并同意簽署知情同意書者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①免疫力低下者；②伴有心、肝、腎及腫瘤等嚴(yán)重疾病者；③先天性畸形者。

選取同期38例體檢健康兒童作為對照組，男17例，女21例，年齡1～8歲，平均（5.53±2.04）歲。三組受試者性別、年齡等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集所有受試患兒晨起空腹?fàn)顟B(tài)下外周靜脈血3 mL，分裝1 mL提取外周血單核細(xì)胞用于流式細(xì)胞儀檢測，另外2 mL分離血清后，于-80℃保存待檢。

1.2.2 流式細(xì)胞儀檢測 取100 μL提取好的外周血單核細(xì)胞懸液1×107/mL，加入10 μL PE標(biāo)記CD25單基因抗體（BD Pharmingen，美國），應(yīng)用美國BD公司流式細(xì)胞儀（FACAS Calibur，BD Pharmingen，美國），利用CellQuest軟件分析CD25雙陽性T淋巴細(xì)胞百分比。具體操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.2.3 ELISA檢測 采用雙抗體夾心ELISA檢測受試者外周血INF-γ、IL-5表達(dá)水平，試劑盒均購自美國ADL公司，具體操作方法按照說明書步驟嚴(yán)格進(jìn)行，反應(yīng)終止后于490 nm處得各孔吸光度值，標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得INF-γ、IL-5表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組之間比較采用t檢驗，三組之間比較采用單因素方差分析，危險因素采用多因素Logistic回歸分析，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組受試者外周血CD25、INF-γ、IL-5表達(dá)水平比較

三組外周血CD25、INF-γ、IL-5水平比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）；合并MP組外周血CD25水平高于未合并MP組、對照組（P < 0.05），未合并MP組外周血CD25水平高于對照組（P < 0.05）；合并MP組外周血INF-γ水平低于未合并MP組、對照組（P < 0.05），未合并MP組外周血INF-γ水平低于對照組（P < 0.05）；合并MP組外周血IL-5水平高于未合并MP組、對照組（P < 0.05），未合并MP組外周血IL-5水平高于對照組（P < 0.05）。見表1。

2.2 多因素Logistic回歸分析結(jié)果

以是否合并MP為因變量（x）（是=1，否=0），以CD25（y1）、INF-γ（y2）、IL-5（y3）表達(dá)水平為自變量進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，外周血CD25、INF-γ、IL-5為支氣管哮喘合并MP的獨立危險因素（P < 0.05）。見表2。

2.3 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果

支氣管哮喘合并MP外周血CD25水平與INF-γ水平呈明顯正相關(guān)（r = 0.746、P < 0.05），INF-γ水平與IL-5水平呈負(fù)相關(guān)（r = -0.541、P < 0.05），CD25水平與IL-5水平呈負(fù)相關(guān)（r = -0.613、P < 0.05）。

3 討論

支氣管哮喘是危害兒童健康最為常見的慢性炎癥疾病之一。目前，兒童支氣管哮喘患病率及死亡率呈現(xiàn)逐年升高趨勢，其發(fā)病機(jī)制多樣復(fù)雜，臨床仍未形成規(guī)范、統(tǒng)一、普遍的診療及治療策略[7-8]。支氣管哮喘與MP感染存在密切關(guān)系[9-10]，大約40%患有支氣管哮喘患兒血清檢查MP抗體均呈陽性。支氣管哮喘合并MP感染可導(dǎo)致患兒肺部感染加重，甚至引發(fā)其他肺外嚴(yán)重并發(fā)癥，使臨床治療難度加大，嚴(yán)重影響患兒生命健康。

目前，支氣管哮喘合并MP感染的發(fā)病原因及機(jī)制尚未完全清楚，MP感染后導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)一系列復(fù)雜炎性反應(yīng)及免疫損傷，在患兒機(jī)體病理生理過程中起著極其重要的作用[11]，對于監(jiān)視疾病發(fā)展及預(yù)后具有重要的臨床價值。大量研究表明，免疫學(xué)相關(guān)機(jī)制在支氣管哮喘及MP感染中均起著重要作用[12-13]。支氣管哮喘合并MP對患兒肺臟造成損傷，同時引發(fā)患兒機(jī)體炎性反應(yīng)及細(xì)胞免疫反應(yīng)，貫穿疾病始終。近年來，研究證實，T淋巴細(xì)胞尤其是輔助性T細(xì)胞（helper T cell，Th）發(fā)生紊亂在支氣管哮喘發(fā)病中起重要免疫學(xué)作用[14-15]。Th細(xì)胞可分泌多種細(xì)胞因子，主要分為兩種，即Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞。Th1細(xì)胞主要參與細(xì)胞免疫及遲發(fā)性超敏炎性反應(yīng)，主要分泌IFN-γ和IL-2，具有上調(diào)細(xì)胞免疫的作用。CD25是IL-2的膜表面受體，對于形成高親和力受體具有重要意義，由活化T淋巴細(xì)胞表達(dá)，目前被認(rèn)為是調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞表面特征性的標(biāo)記分子[16-17]。IL-5是主要由活化T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一種弱酸性糖蛋白，在機(jī)體炎性反應(yīng)及免疫反應(yīng)中起促進(jìn)B細(xì)胞生長分化、誘導(dǎo)細(xì)胞毒T細(xì)胞生成、誘導(dǎo)嗜酸粒細(xì)胞分化以及信息傳遞等重要作用[18]。IL-5促進(jìn)嗜酸粒細(xì)胞發(fā)生分化同時，對于細(xì)胞黏附因子表達(dá)同樣具有調(diào)節(jié)作用，此時嗜酸粒細(xì)胞發(fā)生脫顆粒反應(yīng)并于血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生黏附，導(dǎo)致氣道損傷及高反應(yīng)性慢性炎癥，引發(fā)支氣管哮喘，因此，IL-5被稱為支氣管哮喘發(fā)作的重要介質(zhì)[19-20]。因此，本研究旨在探討支氣管哮喘合并MP感染患兒外周血CD25、INF-γ、IL-5表達(dá)水平及相關(guān)性，試圖為支氣管哮喘合并MP免疫治療提供一定的理論依據(jù)。

本研究結(jié)果表明，合并MP組與未合并MP組外周血CD25表達(dá)水平明顯高于對照組，且合并MP組CD25表達(dá)水平明顯高于未合并MP組，提示支氣管哮喘以及支氣管哮喘合并MP發(fā)病后，引起患兒機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫反應(yīng)，T淋巴細(xì)胞激活，IL-2表達(dá)增加，CD25表達(dá)隨之明顯增加，且支氣管哮喘合并MP比單純支氣管哮喘更為嚴(yán)重；合并MP組與未合并MP組外周血INF-γ表達(dá)水平明顯低于對照組，且合并MP組INF-γ表達(dá)水平明顯低于未合并MP組，表明支氣管哮喘及支氣管哮喘合并MP患兒均存在INF-γ誘生障礙，提示支氣管哮喘及支氣管哮喘合并MP患兒在病原侵襲作用下，INF-γ誘生障礙而無法抵抗病原，且合并MP者更甚；合并MP組與未合并MP組外周血IL-5表達(dá)水平明顯高于對照組，且合并MP組IL-5表達(dá)水平明顯高于未合并MP組，說明支氣管哮喘及支氣管哮喘合并MP患兒發(fā)病時均伴有IL-5過度產(chǎn)生及釋放，且合并MP者更甚，提示IL-5可作為支氣管哮喘合并MP的重要標(biāo)志性因子；Logistic回歸分析結(jié)果顯示，外周血CD25、INF-γ、IL-5為支氣管哮喘合并MP的獨立危險因素；Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，支氣管哮喘合并MP外周血CD25水平與INF-γ水平呈明顯正相關(guān)，INF-γ水平與IL-5水平呈負(fù)相關(guān)，CD25水平與IL-5水平呈負(fù)相關(guān)，推測CD25、INF-γ、IL-5有望成為支氣管哮喘合并MP的血清學(xué)診斷指標(biāo)及治療新靶點。

綜上所述，支氣管哮喘合并MP患兒外周血CD25、INF-γ、IL-5與疾病發(fā)生密切相關(guān)，且三者之間存在一定的相關(guān)性，推測三者有望成為支氣管哮喘合并MP的血清學(xué)診斷指標(biāo)及治療新靶點，值得深入研究。

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