閆琴琴

摘要：目的 研究TPX2基因在宮頸癌診斷與治療的臨床價值。方法 采用RT-PCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)法檢測正常宮頸組織、宮頸鱗癌組織、宮頸鱗癌 Siha 細胞系、宮頸腺癌組織、宮頸腺癌 HeLa 細胞系和上皮內(nèi)瘤變組織中TPX2基因的mRNA 和蛋白質(zhì)。結(jié)果 正常的宮頸組織TPX2mRNA表達量明顯低于其他非正常組（P<0.05），TPX2 蛋白很少出現(xiàn)在正常宮頸組織中，在宮頸鱗癌組織和上皮內(nèi)瘤變組織中表達強度增加，TPX2 蛋白表達強度與年齡關(guān)系不大，與病理級數(shù)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。結(jié)論 TPX2基因可以作為宮頸癌診斷與治療的一個指標，具有重要的臨床價值。

關(guān)鍵詞：TPX2基因；TPX2 蛋白；宮頸癌

The Clinical Value of TPX2 Gene in the Diagnosis and Treatment of Cervical Cancer

YAN Qin-qin

（Qionglai Medical Center Hospital，Qionglai 611530，Sichuan，China）

Abstract：Objective Study on TPX2 gene in the clinical value of the diagnosis and treatment of cervical cancer. Methods Using RT-PCR technique and immunohistochemical detection of normal cervix， cervical squamous cell carcinomas， squamous cell cervical carcinoma Siha cell lines， cervical adenocarcinoma and cervical carcinoma HeLa cells and intraepithelial neoplasia TPX2 Gene's Messenger RNA and protein. Results Normal cervical tissue TPX2mRNA expression was significantly lower than that of other non-normal group （P<0.05）， theTPX2 proteins are rarely found in normal cervical tissue， in cervical squamous cell carcinoma and intraepithelial neoplasia intensity expressed in increases TPX2 protein expression and age have little to with series of pathology and lymph node metastasis. Conclusion TPX2 genes can be used as an indicator of cervical cancer diagnosis and treatment， is of great clinical value.

Key words：TPX2 gene； TPX2 protein； Cervical cancer

宮頸癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，病因至今尚未完全明了，患者平均發(fā)病率，平均年齡都有差異。TPX是受細胞周期嚴格調(diào)控的微觀相關(guān)蛋白，作用發(fā)生在有絲分裂紡錘體形成過程中。資料顯示，TPX基因表達與一些癌癥發(fā)生有關(guān)，如乳腺癌等。本文研究TPX2基因表達與宮頸癌的關(guān)系，為宮頸癌的治療提供新思路，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 2012年5月～2014年10月在我院確診的宮頸癌患者共有65例，年齡31～70歲，平均年齡48.9歲。這些患者手術(shù)切除宮頸癌，將這些完整的新鮮的宮頸癌組織放入液氮，放入-80 ℃冰箱保存。65例標本中，宮頸鱗癌55例，將其分為三級：一級25例、二級13例、三級17例；宮頸腺癌10例，也將其分為三級：一級5例、二級4例、三級1例。在這65例標本中，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移51例。病歷存檔的宮頸上皮內(nèi)瘤變組有35例，患者平均年齡為44.6歲，患者分為CINⅠ10 例，CINⅡ14例，CINⅢ11例。對照組為正常宮頸組織，來自于子宮肌瘤患者，共20例，年齡35～67歲，平均年齡51.5歲。

1.2方法

1.2.1收集標本 在患者放療和化療之前采集，同時取對照組的標本。

1.2.2培養(yǎng)標本 將患者的HeLa、Siha細胞分開培養(yǎng)，培養(yǎng)基為 10% FBS 的 RPMI1640 培養(yǎng)基，保存于37℃，待細胞生長合適時，進行傳代培養(yǎng)。

1.2.3提取基因 使用試劑盒提取標本的總RNA，加入試劑防止RNA降解，同時冰凍保存（-80℃）。

1.2.4分析基因 利用用 1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測基因的完整性，分光光度計測定 260/280nm波長處測定吸光度值，確定基因濃度和純度。

1.2.5 RT-PCR 按照試劑盒，添加引物（上?；に?，按照操作，擴增TPX2基因。

1.2.6跑電泳 將第四步獲得的產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，檢測。

1.2.7免疫組化檢測 免疫組化 SP 法檢測，實驗操作按照SP試劑盒說明，切片脫蠟，高溫修復(fù)，去除氧化酶，分別添加TPX2一抗、TPX2二抗、TPX2三抗，然后進行顯色，復(fù)染、封片。

1.2.8檢測結(jié)果判斷 檢測染色陽性細胞的數(shù)量和強度。

1.3結(jié)果評價 將本次染色為4個等級：0分：原色（沒有著色），1分：淺黃色（弱染色），2分：棕黃色（中染色）和3分：黃褐色（強染色）。將本次細胞陽性率為4個等級：0分：陽性率小于5%，1分：5%-25%，2分：25%-50%，和3分：大于50%。將以上兩項相加，也分為4個等級：0分：（-），1～2分：（+），3～4分：（+ +），和5～6分：（+ + +）。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 本實驗的數(shù)據(jù)使用軟件SPSS 15.0統(tǒng)計分析，其中采用t 檢驗進行計量資料對比，采用χ2檢驗進行計數(shù)資料對比。P<0.05說明兩種治療方式之間存在差異，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 。

2 結(jié)果

根據(jù)RT-PCR 檢測結(jié)果顯示，正常的宮頸組織的TPX2 的 mRNA表達量為（0.079±0.028），宮頸鱗癌組織與宮頸腺癌組織的表達量分別是（0.452±0.009）和（0.507±0.029），HeLa細胞和Siha細胞的表達量分別為（1.892±0.037）和）1.701±0.038）。正常的宮頸組織TPX2mRNA表達量明顯低于其他非正常組（P<0.05）。

結(jié)果顯示，TPX2 蛋白表達強度與年齡關(guān)系不大（P>0.05），隨著病理級數(shù)的增大，表達強度增大（P<0.05），淋巴轉(zhuǎn)移強于淋巴未轉(zhuǎn)移的（P<0.05）。

3 結(jié)論

宮頸癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，并且是惡性腫瘤中最多見的癌瘤[1]。它的發(fā)病率差異較大，該疾病是由人類乳頭瘤病毒引發(fā)的，可以通過皮膚傳播，潛伏期較長，前期無癥狀，后期表現(xiàn)為陰道出血、陰道分泌物增多等，一般檢查方式為宮頸細胞刮片檢查、陰道檢查等[2-3]。

TPX是受細胞周期嚴格調(diào)控的微觀相關(guān)蛋白，作用發(fā)生在有絲分裂紡錘體形成過程中，資料顯示，TPX基因表達與一些癌癥發(fā)生有關(guān)，如乳腺癌、肺癌等。參與紡錘體形成裝等，主要表達在細胞有絲分裂的S期[4]。本文研究TPX2基因表達與宮頸癌的關(guān)系，為宮頸癌的治療提供新思路，正常的宮頸組織TPX2mRNA表達量明顯低于其他非正常組（P<0.05），正常的宮頸組織的TPX2的mRNA表達量僅為（0.079±0.028）。其次，TPX2蛋白在正常宮頸組織、宮頸鱗癌組織、宮頸鱗癌 Siha 細胞系、宮頸腺癌組織、宮頸腺癌 HeLa 細胞系和上皮內(nèi)瘤變組織也不相同，TPX2 蛋白在正常宮頸組織中沒有表現(xiàn)，在宮頸鱗癌組織和上皮內(nèi)瘤變組織中表達強度增加，可以推測TPX2 蛋白對癌癥的發(fā)生有促進作用。

綜上所述，TPX2 可以作為一個研究點，作為宮頸癌診斷與治療的一個指標，具有重要的臨床價值。

參考文獻：

[1]付麗麗.宮頸癌的預(yù)防與治療[J].藥物與臨床，2014（S2）：200-201.

[2]Y.Liu，Z.Ye，H.Sun，等. 利用ADC差值及其與微血管密度及血管內(nèi)皮生長因子的相關(guān)性進行宮頸癌分級的研究[J]. 國際醫(yī)學(xué)放射學(xué)雜志，2013，36（3）：288-289.

[3]王錚，李徐奇，徐軍，等. 沉默 CXCR4 基因表達抑制胰腺癌增殖和侵襲的體外研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2012，34（4）：279-283.

[4]劉梅，唐玉云，唐惠英. 宮頸癌腹腔鏡根治術(shù)與開腹手術(shù)的臨床療效分析[J].海南醫(yī)學(xué)，2013，24（14）：2077-2079.

編輯/蔡睿琳