陳曉燕冉華陽張錦安△

（1.重慶市中醫(yī)院，重慶 400021；2.重慶市西南藥業(yè)銷售公司，重慶 400038）

·研究報告·

益母草浸膏對產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎作用功效的實驗研究*

陳曉燕1冉華陽2張錦安1△

（1.重慶市中醫(yī)院，重慶 400021；2.重慶市西南藥業(yè)銷售公司，重慶 400038）

目的 觀察益母草對產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎模型大鼠的影響，并對其作用機制作初步探索。方法 將大鼠按隨機數(shù)字表法分為5組：正常對照組、模型組、益母草浸膏低劑量組、益母草浸膏高劑量組和三七總皂苷對照組。采用大腸埃希菌進行陰道灌注建立感染模型，采用ELISA法對各組大鼠SOD、MDA以及TNF-α、IL-1β、IL-6的含量進行檢測；采用放免藥盒測試法測定6-K-PGF1α和TXB2的含量；蛋白免疫印跡法測定Bcl-2、Bax蛋白的表達。結(jié)果 與模型組相比，益母草浸膏可以明顯地使產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠血清中的MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低，SOD含量提高；減弱6-K-PGF1α，增強TXB2的表達；上調(diào)Bcl-2蛋白、下調(diào)Bax蛋白的表達（P＜0.05或P＜0.01）。而益母草高、低劑量組和三七總皂苷組之間；益母草浸膏高劑量組和低劑量組之間各指標無顯著差異（P＞0.05）。結(jié)論 益母草可以抑制炎癥因子的表達，降低氧自由基損傷，降低子宮內(nèi)膜的細胞凋亡，還能夠降低6-K-PGF1α的表達，升高TXB2的表達，促進其動態(tài)平衡，使血止但不留淤，通過以上的可能調(diào)節(jié)機制，促進子宮內(nèi)膜的增生、修復(fù)，對產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎起到保護和改善作用，從而起到促進產(chǎn)后子宮復(fù)原的功效。

產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎 益母草 實驗研究

近年來，產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全［1］的發(fā)生率呈上升趨勢，嚴重影響著婦女的身心健康，影響婦女的生活質(zhì)量。在臨床上主要表現(xiàn)為：血性惡露的量增多、持續(xù)時間延長、渾濁、伴有惡臭，甚至?xí)?dǎo)致宮腔內(nèi)分泌出膿性液體；腰部、下腹部脹疼等。導(dǎo)致這種情況的原因較復(fù)雜，而產(chǎn)后感染所導(dǎo)致的子宮內(nèi)膜炎是造成產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全的常見原因之一［2］。子宮內(nèi)膜炎作為婦科的常見疾病，炎癥、氧化、凋亡是其非常重要的因素。益母草因其能夠活血化瘀、收縮子宮等，被譽為“婦科經(jīng)產(chǎn)藥”，大量研究表明，益母草還具有很好的抗炎、抗氧化作用。本實驗研究通過基礎(chǔ)動物實驗初步探索益母草浸膏對產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎模型大鼠的影響及其可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 實驗采用健康雌性大鼠50只，2月齡，體質(zhì)量185～215 g，雄性大鼠25只，體質(zhì)量190～290 g，SPF級。均由重慶醫(yī)科大學(xué)提供［合格證號為：SCXK（渝）2012-0001］。

1.2 試藥與儀器 益母草浸膏：由重慶醫(yī)科大學(xué)中藥學(xué)院提供，進行消毒并滅菌后，4℃保存、備用。三七總皂苷：其提取物由重慶醫(yī)科大學(xué)中藥學(xué)院提供，進行消毒并滅菌后，4℃保存、備用。大腸埃希菌的標準菌株ATCC25921于細菌室內(nèi)培養(yǎng)，定期進行活化。超氧化物歧化酶 （SOD）和丙二醛 （MDA）試劑盒 （批號：20150312）均購買于南京建成生物工程研究所；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素（IL）-1β、IL-6的ELISA試劑盒（批號：201300305248）均購買于上海森雄科技實業(yè)有限公司；6-酮-前列腺素F1?。?-K-PGF1?。⒀ㄋ谺2（TXB2）放射免疫試劑盒（批號：20130621）購買于北京華英生物技術(shù)研究所；Bcl-2和Bax抗體購于美國Sigma公司。紫外分光光度計（754型）購買于上海精密科學(xué)儀器有限責(zé)任公司；MK3型酶標分析儀購買于上海的熱電儀器有限公司。

1.3 分組與造模 50只大鼠按照隨機數(shù)字表法隨機分為以下5個小組：正常對照組、模型組、益母草浸膏高劑量組、益母草浸膏低劑量組和三七總皂苷組。將其按照雌雄2∶1的比例［3］進行同籠飼養(yǎng)。本實驗以趙紅瓊等［4-5］研究報道中建立此模型的方法為借鑒，并進行改進。估算大鼠的預(yù)產(chǎn)期，除正常對照組大鼠外，其余大鼠全在產(chǎn)后的第1天，將其麻醉后進行消毒、鋪巾，將大腸埃希菌（3×108cfu/mL）用陰道灌注針對其進行接種細菌，建立產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎的大鼠模型。待接種后第4日，大鼠陰道流出惡臭分泌物，造模成功。造模期間無大鼠死亡。

1.4 干預(yù)措施 正常對照組和模型組，于產(chǎn)后第1天開始，用蒸餾水進行灌胃，每日1次。用蒸餾水將益母草浸膏按1∶125體積比進行溶解，從產(chǎn)后第1日開始，以15 mL/kg和5 mL/kg的劑量對益母草高、低劑量組分別進行灌胃給藥，每日1次。將三七總皂苷按1∶150體積比溶于蒸餾水中。將其按照正常人的常用量進行換算（0.12 g/kg），從產(chǎn)后第1天開始，以10 mL/kg對三七皂苷陽性對照組組進行灌胃給藥，每日1次。每組連續(xù)給于對應(yīng)藥物或0.9%氯化鈉溶液7 d后，大鼠斷頭處死，對其相應(yīng)指標進行鑒定。

1.5 指標檢測 1）SOD和MDA的含量測定：在7 d后，將大鼠進行處死，采取大鼠頸動脈的血，再利用比色法對所含的SOD及MDA進行測定。2）TNF-α、IL-1β、IL-6的含量測定：采大鼠頸動脈血，再利用ELISA試劑盒對血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量進行檢測。3）放免藥盒測試法對6-K-PGF1α、TXB2的檢測：將大鼠子宮組織取出后，用眼科剪剪碎，加入生理鹽水及無水乙醇（9∶1），1500 r/min研磨8 min，再進行離心，取其上清液于-20℃?zhèn)溆茫俑鶕?jù)放免藥盒測試相應(yīng)指標。4）蛋白免疫印跡法對Bcl-2、Bax的檢測：取出子宮組織，加入液氮后研碎，再加入細胞裂解液抽提蛋白，BCA法定量蛋白。組織勻漿經(jīng)生理鹽水稀釋至2000 μg/mL，加入4×上樣緩沖液，沸水浴5 min，于-40℃保存；取10 μL蛋白80 V下進行SDS-PAGE電泳，30 min，換至120 V，于200 mA下轉(zhuǎn)膜1 h，室溫下封閉液封閉PVDF膜，過夜。剪下PVDF膜，加入1∶1000的Bcl-2、Baz一抗，4℃下孵育48 h，TBST漂洗3次；加入1∶2500的二抗，室溫下孵育2 h，TBST漂洗3次；經(jīng)ECL顯色，采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，進行曝光處理后得圖片，利用imagelab軟件對條帶進行分析，檢測待測蛋白表達。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（）表示，并對其進行處理、分析。采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠MDA、SOD含量比較

見表1。與正常對照組相比，模型組中MDA升高，而SOD降低（P＜0.01）；益母草浸膏高低劑量組和三七總皂苷組則可改善模型組這種情況，使MDA降低，SOD升高。而益母草浸膏高低劑量組和三七總皂苷組之間，益母草浸膏高、低劑量組之間無明顯差異（P＞0.05）。

表1 各組產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠MDA、SOD、TNF-α、IL-1β、IL-6含量比較（）

表1 各組產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠MDA、SOD、TNF-α、IL-1β、IL-6含量比較（）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與正常對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別 n正常對照組 10模型組 10益母草浸膏低劑量組 10 IL-6（ng/L） TNF-α（ng/L）54.08±3.83 67.71±15.23 98．21±10.13△△168.23±25.33△△67.90±14.71**101.71±23.31*益母草浸膏高劑量組 10 137.98±32.10**35.01±8.78**181.67±37.31**60.14±15.11**88.76±21.09**三七總皂苷組 10 138.91±17.98**38.28±8.08**194.55±22.01*68.21±23.11*94.32±35.21**SOD（U/mL） MDA（nmol/mL）IL-1β（ng/L）156.13±25.31 33.82±4.49 147.56±17.99 62.11±11.42△△86.98±9.80△△311.02±54.21△△109.01±33.51*51.72±5.94*208.23±25.33*

2.2 各組產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量比較 見表1。與正常對照組相比，在模型組中IL-1β、IL-6和TNF-α升高（P＜0.01）；與模型組比較，益母草浸膏高、低劑量組和三七總皂苷組使TNF-α、IL-1β、IL-6降低，其中高劑量組最為明顯（P＜0.05或P＜0.01），而益母草浸膏高、低劑量組和三七總皂苷組，益母草浸膏高、低劑量組之間無明顯差異（P＞0.05）。

2.3 各組產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠6-K-PGF1α、TXB2含量比較 見表2。與正常對照組相比，模型組6-KPGF1α升高，而TXB2呈現(xiàn)降低（P＜0.01）；與模型組比較，益母草浸膏高、低劑量組和三七總皂苷組使6-K-PGF1α降低，TXB2升高（P＜0.05或P＜0.01），而益母草給藥組和三七總皂苷組，益母草浸膏高、低劑量組之間無明顯差異（P＞0.05）。

表2 各組產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠6-K-PGF1α、TXB2、Bcl-2、Bax含量比較（）

表2 各組產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠6-K-PGF1α、TXB2、Bcl-2、Bax含量比較（）

組別 n正常對照組 10模型組 10益母草浸膏低劑量組 10 Bax 0.47±0.07 1.56±0.13△△0.97±0.05*益母草浸膏高劑量組 10 298.99±34.11**102.7±8.73**0.69±0.11**0.83±0.13**三七總皂苷組 10 329.71±19.28*109.23±5.84**0.58±0.08*0.91±0.11**6-K-PGF1α（pg/mL）TXB2（pg/mL） Bcl-2 303.78±15.14 125.32±4.47 0.74±0.04 379.92±13.21△△88.92±9.13△△0.29±0.03△△325.12±35.07**91.34±5.64*0.55±0.17*

2.4 各組產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠Bcl-2、Bax比較 見表2，圖1。與正常對照組相比，模型組Bax升高，而Bcl-2呈現(xiàn)降低（P＜0.01）；益母草高、低劑量組和三七總皂苷組則可改善模型組這種情況，使Bax降低，Bcl-2升高（P＜0.05或P＜0.01），而益母草高、低劑量組和三七總皂苷組之間，益母草浸膏高、低劑量組之間無明顯差異（P＞0.05）。

圖1 各組產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠Bcl-2、Bax含量比較

3 討 論

產(chǎn)婦在進行分娩后，通過子宮內(nèi)膜的再生，胎盤剝離面發(fā)生修復(fù)，一般情況下，經(jīng)過5~6周，子宮會漸漸地恢復(fù)到妊娠之前的狀態(tài)。如果在胎盤分娩后6周，子宮仍不能恢復(fù)到之前的狀態(tài)，則為產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全［6］。其最主要的臨床表現(xiàn)為，血性惡露的量增多、時間有所延長、渾濁、惡臭；腰部、下腹部疼痛等。據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，在我國，每年有2000萬左右的產(chǎn)婦，但有70%的產(chǎn)婦在生產(chǎn)后的自然恢復(fù)過程中，存在不同程度的子宮收縮不良的現(xiàn)象［7］。有報道稱，這種情況呈現(xiàn)逐年上升趨勢［8］。導(dǎo)致其的原因多而復(fù)雜，其中產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎是較為重要的方面，是導(dǎo)致產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全最重要、最常見的一個原因［9］。產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎是細菌經(jīng)過胎盤的剝離面入侵從而導(dǎo)致的感染，其嚴重威脅產(chǎn)婦身心健康，造成嚴重的后果，影響患者生活質(zhì)量。按照中醫(yī)理論來說，產(chǎn)婦往往失血耗氣、正氣虧損、脾虛、氣虛，營陰耗損導(dǎo)致陰虛內(nèi)熱，使得血脈凝結(jié)致瘀［10］；或者由于產(chǎn)婦受到風(fēng)寒，血運不暢而致瘀［11］；或產(chǎn)婦情志抑制，氣機郁結(jié)而致瘀［12］。總而言之，中醫(yī)認為多虛多瘀是產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎的主要發(fā)病機制，其病因以氣虛血瘀最為多見［13］。

子宮內(nèi)膜發(fā)生炎癥的時候，細菌合成的脂多糖會誘導(dǎo)子宮的內(nèi)膜上皮細胞、間質(zhì)細胞、粒細胞等，啟動細胞內(nèi)信號的傳導(dǎo)程序，使核因子κB被激活，從而使IL-1β、IL-6和TNF-α等炎癥因子轉(zhuǎn)錄增加，同時這些因子又進一步促進核因子κB的激活，使大量炎癥因子發(fā)生聚集，并最終導(dǎo)致炎癥因子超量地被釋放出來［14］，浸潤組織，這又進一步誘導(dǎo)，使子宮內(nèi)膜的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶增多，從而催化產(chǎn)生很多一氧化氮，導(dǎo)致血流增加，促進水腫和滲出，并與前列腺素發(fā)生作用，6-K-PGF1α的含量增加，TXB2的含量降低，使PGI2/TXA2的比例發(fā)生失調(diào)，導(dǎo)致溶酶體的膜通透性變大，致使血量增加［15］。細胞凋亡作為一種存在于生命發(fā)展各個時期的生理過程，在子宮內(nèi)膜的變化中也不例外，對于子宮內(nèi)膜，其能否維持功能的穩(wěn)定以及周期性的變化，細胞凋亡的調(diào)控起到關(guān)鍵的作用［16］。干預(yù)、調(diào)控子宮內(nèi)膜細胞內(nèi)的凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax，對產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎有著重要的作用，能夠促進產(chǎn)后子宮的復(fù)舊。MDA是一種氧化應(yīng)激的標志物，擁有極強的細胞毒性，它可用以衡量細胞的損傷程度。與之相對的為SOD，其對機體具有一定的保護效應(yīng)。

三七為傘形目五加科植物，具有散瘀止血，消腫定痛之功效，主治咯血，吐血，衄血，便血，崩漏等，對惡露不絕也具有很好的治療作用［17］。而益母草具有利尿消腫、收縮子宮的作用，是歷來治療婦科病的重要藥物［18］。通過實驗發(fā)現(xiàn)，三七組和益母草浸膏各組之間數(shù)據(jù)沒有顯著差異，說明兩者對產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎作用功效相似；而與模型組相比，益母草浸膏可以明顯降低產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎大鼠血清中的IL-1β、IL-6和TNF-α含量，從而抑制炎癥因子的表達，減輕炎癥損傷；降低MDA、提高SOD含量，降低氧自由基損傷；上調(diào)Bcl-2蛋白、下調(diào)Bax蛋白的表達，降低子宮內(nèi)膜的細胞凋亡；減弱6-K-PGF1α，增強TXB2的表達，促進其動態(tài)平衡，使血止但不留瘀，通過以上的可能調(diào)節(jié)機制，促進子宮內(nèi)膜的增生、修復(fù)，對產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎起到保護和改善作用，從而起到促進產(chǎn)后子宮復(fù)原的功效。

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Experimental Study on the Effect of Motherwort Concrete on Postpartum Endometritis

CHEN Xiaoyan，RAN Huayang，ZHANG Jinan.
Chongqing Hospital of Traditional Chinese Medicine，Chongqing 400021，China.

Objective：To observe the effect of motherwort concrete on rats with postpartum endometritis and investigate its possible mechanism.Methods：According to random number table method，rats were randomly divided into five groups：control group，model group，motherwort concrete administration group（including motherwort concrete low dose group and high dose group）and a positive control group of PNS.Escherichia coli was used to establish infection models.SOD，MDA and IL-1β，IL-6 and TNF-α were tested by ELISA.6-K-PGF1α and TXB2 were tested by RIA kit test method.Bcl-2，Bax were tested by WB.Results：Compared with the model group，motherwort concrete reduced the content of MDA and IL-1β，IL-6 and TNF-α，increased the content of SOD，reduced the expression of 6-K-PGF1α，and increased the expression of TXB2，up-regulated Bcl-2 level and down-regulated Bax level.There was no significant difference on the indexes between the motherwort concrete administration group and the positive control group of PNS（P＞0.05）.Conclusion：Motherwort concrete can inhibit the expression of inflammatory factors，reduce the oxygen free radical damage，apoptosis of the endometrium，the expression of 6-K-PGF1α and increase the expression of TXB2，thereby adjusting the ratio between PGI2/TXA2，promoting its dynamic equilibrium，stopping the bleeding without leaving silt，By the adjustment mechanism above，it promotes endometrial hyperplasia repair，protects and improves endometrium function against postpartum endometritis，thus contributing to the postpartum uterine involution.

Postpartum endometritis；Motherwort concrete；Experimental study

R285.5

A

1004-745X（2017）01-0050-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.01.014

2016-08-26）

重慶市中醫(yī)特色診療工程技術(shù)研究中心能力提升項目（cstc2014pt-gc10003）

△通信作者（電子郵箱：1307198425@qq.com）