元振杰 ， 王 燕 ， 馬弘財 ， 夏晨陽 ， 吳金措姆 ， 四朗玉珍 ， 班 旦 ， 格桑卓嘎

(西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所， 西藏 拉薩 850009)

沙門菌病是目前危害養(yǎng)禽業(yè)最常見的細(xì)菌疫病之一[1]，在公共衛(wèi)生學(xué)上有著重要的意義。隨著進(jìn)藏旅游的盛行，從而帶動高原藏雞、藏蛋等需求增加，近年來西藏養(yǎng)禽業(yè)在養(yǎng)殖規(guī)模和數(shù)量上得到了快速的發(fā)展，隨之而來雞病發(fā)生也更加復(fù)雜化。由于有良好的疫苗和完善的免疫程序，目前病毒性傳染病基本得到了控制，而細(xì)菌性疾病尤其是雞沙門菌病呈現(xiàn)出擴(kuò)張流行的趨勢[2]。為了解雞沙門菌在西藏流行情況，項目組選擇在養(yǎng)禽區(qū)拉薩市5個縣(區(qū))12個養(yǎng)殖場不同品種不同來源的雞進(jìn)行采樣分析，為臨床上科學(xué)防治本病提供一定的依據(jù)。

1 試驗材料

1.1 主要儀器 恒溫培養(yǎng)箱，超凈工作臺，全自動高壓蒸氣滅菌鍋，電熱恒溫干燥箱，光學(xué)顯微鏡等

1.2 主要試劑 沙門菌快速鑒別培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、 LB培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、BS瓊脂培養(yǎng)基(均購自青島海博生物公司)；沙門菌生化編碼微量鑒定管(購自杭州天和微生物試劑有限公司)；沙門菌A-F屬診斷血清(購自蘭州生物制品研究所)。

1.3 病理樣品 2015年4月至2016年8月，來自拉薩市城關(guān)區(qū)、曲水縣、達(dá)孜縣、墨竹工卡縣、堆龍德慶縣12個集約化養(yǎng)雞場，雛雞泄殖腔拭子、成雞泄殖腔拭子和病死雞病變組織。

1.4 實驗雞 來自西藏農(nóng)科院畜科所曲尼帕拉薩白雞良種繁育基地。

2 試驗方法

2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng) 采用無菌操作取待檢病料分別接種于沙門菌快速鑒別平板，37 ℃培養(yǎng)18～24 h后，觀察結(jié)果。挑取陽性菌株分別接種于麥康凱平板、伊紅美藍(lán)平板、BS瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)16～18 h，根據(jù)菌落生長特性進(jìn)行初步判斷。

2.2 細(xì)菌染色鏡檢 分別挑取單個菌落，固定并進(jìn)行革蘭染色鏡檢，染色鏡檢方法按照常規(guī)方法進(jìn)行。

2.3 生化鑒定 根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》第九版[3]和沙門菌編碼生化鑒定管說明書要求，挑取培養(yǎng)好的新鮮菌落分別接種于賴氨酸脫羧酶、靛基質(zhì)、尿素酶、氰化鉀、硫化氫、山梨醇、甘露醇、水楊苷、丙二酸鹽、衛(wèi)矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、阿拉伯糖生化鑒定管，37 ℃培養(yǎng)16～24 h[9]，觀察并記錄結(jié)果。

2.4 血清型鑒定 接照沙門菌屬診斷血清說明書的實驗方法進(jìn)行，同時設(shè)生理鹽水和標(biāo)準(zhǔn)菌株對照組，依次用A(O2)、B(O4)、C1(O7)、C2(O8)、D(O9)、E(O3)的O血清做玻片凝集試驗，確定血清群。再用該群的H因子凝集試驗，確定其H抗原。

2.5 動物致病性試驗 將252只7日健康雛雞(拉薩白雞)隨機(jī)分為42組，每組6只，其中40組分別接種分離培養(yǎng)好的40株沙門菌菌液于皮下，每只接種菌液0.2 mL(3×109CUF/mL)，1組接種沙門菌標(biāo)準(zhǔn)株菌液(3×109CUF/mL)，1組接種生理鹽水對照[4]。接種后，每隔1 h，觀察記錄雞的情況。

3 結(jié)果

3.1 細(xì)菌分離染色鏡檢 從所采集的699份病理樣品中，共分離出687株細(xì)菌，通過鑒別培養(yǎng)基鑒定，符合沙門菌生長特征的有421株。挑取單個菌落進(jìn)行革蘭染色鏡檢，均符合沙門菌特征。

圖1 雞源性沙門菌革蘭染色鏡檢形態(tài) (10×100)

3.2 生化鑒定 對所分離出的421株可疑沙門菌進(jìn)行賴氨酸脫羧酶、靛基質(zhì)、尿素酶、氰化鉀、硫化氫、山梨醇、甘露醇、水楊苷、丙二酸鹽、衛(wèi)矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、阿拉伯糖試驗[3-4]后，確定有403株符合沙門菌的要求，陽性率為57.65%(403/699)。其中麥芽糖發(fā)酵陽性的有127株，判定為雞傷寒沙門菌，占31.51%(127/403)；麥芽糖發(fā)酵陰性的有276株，判定為雞白痢沙門菌，占68.49%(276/403)。

表1 雞源性沙門菌分離鑒定結(jié)果

3.3 血清型鑒定 在所分離的沙門菌中，隨機(jī)抽取100株進(jìn)行試驗。100株菌共屬于5個血清群，其中A群(O2)12株，C1群(O7)27株，C2群(O8)9株，D群(O9)52株，優(yōu)勢血清群為D群(52%)，其次為C1群(27%)。

表2 沙門菌的血清型

3.4 動物試驗 對隨機(jī)抽取的40株菌接種于40組雛雞，約6 h左右陸續(xù)開始發(fā)病，表現(xiàn)精神沉郁，不食或少食，8 h后開始表現(xiàn)腹瀉，拉白色糞便，表明試驗的40株菌為致病性沙門菌。接種后發(fā)病率達(dá)100%，生理鹽水對照組感染率為0%。

4 討論

雞沙門菌病是雞常見的傳染病之一，可分為雞白痢、雞傷寒、雞副傷寒3種，對養(yǎng)禽業(yè)危害極大[1]。隨著高原畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，沙門菌對種雞受精率、種蛋孵化率、雛雞存活率、飼料利用率和商品蛋的品質(zhì)等[1]方面問題日益突顯，如何滿足市場對高原禽類產(chǎn)品的急切需求已經(jīng)是當(dāng)前西藏養(yǎng)禽業(yè)面臨的主要問題。因此，如何有效的預(yù)防并控制該病，也成為當(dāng)前西藏養(yǎng)禽業(yè)所面臨的主要問題。

本試驗通過對拉薩市養(yǎng)殖的不同來源、不同品種的雞進(jìn)行調(diào)查，由表1可以看出，西藏本土藏雞和拉薩白雞沙門菌感染率較高，分別為83.05%(147/177)和73.41%(127/173)；而從西藏境外引進(jìn)的雞苗如海藍(lán)粉、海藍(lán)白、羅曼和三黃雞其感染率分別為41.07%(23/56)、33.05%(39/118)、28.57%(16/56)、42.86%(51/119)；這可能與西藏養(yǎng)禽業(yè)過去較省外發(fā)展滯后，近幾年來西藏養(yǎng)禽業(yè)的快速發(fā)展，禽類飼養(yǎng)管理技術(shù)和禽病的控制凈化[5]不能跟上西藏養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展節(jié)奏有關(guān)。因此，應(yīng)加強禽類飼養(yǎng)環(huán)境和飼養(yǎng)用具的衛(wèi)生消毒，改變過去粗放的飼養(yǎng)管理方式，種禽場要積極的進(jìn)行禽沙門菌的凈化，從源頭控制禽沙門菌的傳播。

[1] 甘孟侯.中國禽病學(xué)[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999．

[2] 王亮，張元鵬，張榮武，等．雞源性腸炎沙門氏菌的流行病學(xué)調(diào)查[J].中國人獸共患病學(xué)報，2011，27(5)：455-458.

[3] 布坎南R E,吉本斯N E.伯杰細(xì)菌鑒定手冊.第8版[M].中國科學(xué)院微生物研究所譯.北京:科學(xué)出版社.1984：392-442.

[4] 馬興樹.禽傳染病實驗診斷技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2006：106-112.

[5] 顧國強等.種雞場雞白痢凈化綜合措施[J].中國禽業(yè)導(dǎo)刊，2001，32(10)：30.