宋瑞

（河北省石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心河北石家莊050041）

“瘦肉精”沙丁胺醇常見檢測方法

宋瑞

（河北省石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心河北石家莊050041）

飼喂畜禽沙丁胺醇可以促進其骨骼肌生長，同時減少脂肪沉積，因此有不法分子在養(yǎng)殖場非法使用本類藥物。本文從酶聯(lián)免疫法、液相色譜法等闡述檢測沙丁胺醇的方法。

沙丁胺醇；酶聯(lián)免疫；液相色譜；氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

沙丁胺醇（Salbutamol），是一種具有選擇性的β受體激動劑，能夠選擇性激動支氣管平滑肌的β受體，擴張支氣管。臨床上常用于預防治療支氣管哮喘。飼喂畜禽沙丁胺醇可以促進其骨骼肌生長，同時減少脂肪沉積，因此有不法分子在養(yǎng)殖場非法使用本類藥物。尤其是在我國對鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺的非法使用進行了嚴格限制后，作為新的替代品沙丁胺醇常被不法分子使用。如果在促生長飼料中添加沙丁胺醇，且添加量超過正常的治療量，就會造成動物體內(nèi)沙丁胺醇的殘留，老百姓誤食含有沙丁胺醇的動物產(chǎn)品會引發(fā)中毒。目前沙丁胺醇的殘留檢測方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（GC－MS）和液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（LC－MS）等。

1 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

近年來應用酶聯(lián)免疫吸附法越來越廣泛,其具有操作簡便、耗時較短、檢測結(jié)果較為準確的特點。國外相關(guān)學者使用酶聯(lián)免疫法檢測豬肝中沙丁胺醇，分別使用0.2 μg/kg、1 μg/kg以及2 μg/kg3個不同濃度給豬靜注，1 h后屠宰，取肝臟，用蛋白酶消化并純化樣品后，用ELISA檢測試劑盒進行測定。毛麗莎等[1]用酶聯(lián)免疫法檢測豬、羊肉、豬肝等動物源性食品后，對陽性樣品采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進行驗證。用酶聯(lián)免疫法測定沙丁胺醇的線性范圍為0.06～410 μg/kg，標準曲線系數(shù)為0.996～0.999，回收結(jié)果為71.2%～87.2%。楊正濤等學者[2]采用ELISA法對兔肉中萊克多巴胺、沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅3種β受體激動劑進行檢測，經(jīng)測定沙丁胺醇抗血清除對沙丁胺醇具有100%的反應外，還對克倫特羅具有128%的交叉反應性。王建平等學者[3]建立了能夠同時檢測沙丁胺醇和克倫特羅的間接競爭酶聯(lián)免疫法，此方法明確了沙丁胺醇和鹽酸克倫特羅的檢測范圍為0.48～8.0 mg/kg和0.43～7.3 mg/kg，沙丁胺醇和克倫特羅的檢測靈敏度分別為0.48 mg/g和0.43 mg/g。同時該學者還檢測了回收率和相對標準偏差，在豬肝、豬尿中添加1～50 ng/g的沙丁胺醇和克倫特羅，測得回收率分別為72.2%～84.8%和84.3%～103.4%，樣品間相對標準偏差分別為4.2%～28.3%和0.3%～35.5%。

2 高效液相色譜法（HPLC）

由于沙丁胺醇含有苯環(huán)屬于共軛結(jié)構(gòu)，因此可采用紫外、熒光進行檢測，近來使用高效液相色譜法定量檢測沙丁胺醇的報道較多。金雁等學者[4]使用高效液相色譜法（紫外檢測器）能夠同時測定禽肉中克倫特羅和沙丁胺醇的殘留，檢出限分別為3 μg/kg和1 μg/kg，樣品回收率在61.5%～90.6%，樣品的相對標準偏差均低于10%。尚紅霞等研究員[5]用高效液相色譜法（二極管陣列檢測）測定了飼料中克倫特羅和沙丁胺醇，檢出限分別為0.31 μg/kg和0.24μg/kg，樣品加標回收率范圍為91.2%～92.0%和91.9%～93.0%。王煉等學者[6]建立了奧西那林、克倫特羅、沙丁胺醇和非諾特羅的高效液相色譜法（二極管陣列檢測器），樣品的最低檢出限分別為0.07 mg/kg、0.04 mg/kg、0.10 mg/kg和0.08mg/kg，樣品加標回收率在60.1%～88.0%之間。李偉紅等學者[7]建立了高效液相色譜法（熒光檢測器）檢測畜禽肉中的沙丁胺醇，此方法的最低檢出限為0.01 mg/kg，回收率不低于60%，樣品間相對標準偏差低于10.7%。安洪澤等學者[8]建立了飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和非諾特羅的高效液相檢測方法（熒光檢測器），最低檢出限為17 ng/g，定量限50 ng/g，回收率范圍為88.6%～107.1%，樣品間最低相對標準偏差0.5%。林奕芝等學者[9]建立了肉與肉制品中沙丁胺醇高效液相色譜的測定方法，其檢出限為6 ng/g，回收率為99.8%。高效液相色譜法具有靈敏度高、重復性好等優(yōu)點，但是具有樣品前處理較復雜、特異性較差缺點。

3 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

沙丁胺醇含有羥基、氨基等極性基團，在采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定時，需要衍生化，再用質(zhì)譜或二級質(zhì)譜進行檢測。Ramos等學者[10]優(yōu)化了沙丁胺醇檢測中的衍生化條件，得到的最佳衍生化溫度為55℃，時間為1 h。Spisso等[11]優(yōu)化了沙丁胺醇的提取凈化條件，用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定，可得最低檢測限為0.5 ng/g，樣品的回收率在88%以上。孟娟等[12]采用內(nèi)標法，使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測動物組織樣品中的沙丁胺醇、克倫特羅等的殘留量，沙丁胺醇的檢出限為0.5 μg/kg。朱堅等[13]測定了動物組織中的沙丁胺醇、費諾特等，測得最低檢出限為0.5～2 μg/kg，樣品的平均回收率為71%～94%，樣品間相對標準偏差為4.6%～18.7%。

4 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜是近年來分析沙丁胺醇最有效的方法之一，此方法不需要進行衍生化步驟，其中液相色譜能夠分離一些熱不穩(wěn)定的小分子極性物質(zhì)，質(zhì)譜對化合物的定性較準確。Fesser等使用了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定了動物肝臟中的沙丁胺醇，測得樣品的平均回收率為76%，樣品間相對標準偏差為6%。孫雷等[14]建立了動物源性食品中沙丁胺醇的殘留檢測方法，獲得沙丁胺醇的檢出限為0.1 μg/kg。蔡欣欣等學者[15]使用內(nèi)標法測定動物源食品中沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅等的三重四極桿質(zhì)譜確證檢測方法，測得最低定量限為0.2 μg/kg。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有樣品用量少、分析時間短、靈敏度高、分離能力強、選擇性強的優(yōu)點，是目前確證沙丁胺醇的最佳方法。但液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜價格較貴，儀器結(jié)構(gòu)非常復雜、重現(xiàn)性較差、樣品易受污染等問題。

5 展望

目前測定沙丁胺醇的方法有很多種，但是在我國行業(yè)標準和國家標準中只使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，這兩種方法的靈敏度都較高，但樣品前處理過程較為復雜，耗時較長，尤其是氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜還需要衍生化。酶聯(lián)免疫法測定樣品操作簡便，可同時檢測40個樣品，分析時間較短，非常適用于快速篩選。此外簡化液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的前處理過程也是一個非常重要的研究方向?！?/p>

［1］毛麗莎,劉紅河,楊俊,等.酶聯(lián)免疫法與液質(zhì)聯(lián)用法測定動物源性食品中沙丁胺醇和克倫特羅［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2009,19(5):987-992.

［2］楊正濤,張乃生,史利軍,等.β－激動劑多組分殘留的酶免疫分析方法［J］.中國農(nóng)學通報,2008,24(8):23-27.

［3］王建平,沈建忠.豬肝和豬尿中沙丁胺醇和克倫特羅殘留的酶聯(lián)免疫吸附檢測法研究［J］.畜牧獸醫(yī)學報,2005, 36(4):397-401.

［4］金雁,姚家彪,姜莉,等.高效液相色譜法同時測定禽肉中的克倫特羅和沙丁胺醇［J］.現(xiàn)代儀器,2005(5):34-36.

［5］尚紅霞,盧業(yè)玉,黃寶華,等.固相萃取－高效液相色譜法同時測定克倫特羅和沙丁胺醇［J］.分析科學學報, 2003,19(2):123-125.

［6］王煉,黎源倩.高效液相色譜法測定動物性食品中4種β2－興奮劑［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2008,18(7): 1227-1230.

［7］李偉紅,戴廷燦,熊艷.HPLC法測定畜禽肉中沙丁胺醇的殘留量［J］.江西農(nóng)業(yè)學報，2007，19(3):102－103

［8］安洪澤,張素霞,沈建忠,等.高效液相色譜法測定飼料中三種β-興奮劑［J］中國飼料,2008(2):34-38.

［9］林奕芝,張世英,梁偉,等.HPLC法同時測定肉與肉制品中沙丁胺醇和8種雌激素殘留量［J］.中國公共衛(wèi)生, 2002,18(12):1499-1501.

［10］Ramos F，Santos C，Silva A，et al..β2－adrenergic agonist residues:simultaneous methyl－and butylboronic derivatization for confirmatory analysis by gas chromatography－mass spectrometry［J］.J Chromatogr B(Biomed Sci Appl), 1998,716:366-370.

［11］Spisso B F，Lopes C C，Marques M A，et al.Determination of β2－agonists in bovine urine:Comparison of two extraction/clean-up procedures for high -resolution gas chromatography-mass spectrometry analysis［J］.J Anal Toxicol, 2000,24:146-152.

［12］孟娟,邵兵,吳國華,等.氣相色譜－質(zhì)譜法同時測定動物性食品中8種β-興奮劑的殘留量［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2005,15(6):641-643.

［13］朱堅,李波,方曉明,等.氣相色譜-質(zhì)譜法測定肝、腎和肉中11種β2-受體激動劑殘留量［J］.質(zhì)譜學報,2005, 26(3):129-137.

［14］孫雷,張驪,朱永林,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測動物源性食品中殘留的9種β2-受體激動劑［J］.色譜,2008,26(6):709-713.

［15］蔡欣欣,張秀堯.超高效液相色譜三重四極桿質(zhì)譜法同時快速測定動物源食品中6種β-受體興奮劑殘留［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2008,18(7):1252-1255.

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.03.012