孫懂梅

215500常熟市血站檢驗科

微量板法在血站血型檢測中的應(yīng)用

孫懂梅

215500常熟市血站檢驗科

目的：探討微量板法在血站血型檢測中的應(yīng)用效果。方法：選擇無償獻血樣本19 819份，采取微量板法進行血型檢測。結(jié)果：微量板法檢測ABO血型正定型、反定型以及Rh(D)血型檢測，其血型正確率100%。結(jié)論：微量板法在血站血型檢測中的應(yīng)用效果肯定，但需予以嚴格的人工核對，以保證其檢測準(zhǔn)確性。

微量板法；血站血型檢測；無償獻血

據(jù)報道[1]，微量板法血型檢測準(zhǔn)確率高達100.0%，可避免手工機械性操作所致失誤。本研究回顧性分析19 819份無償獻血樣本的微量板法檢測結(jié)果，現(xiàn)報告如下。

資料與方法

本組所用19 819份初次篩選合格的無償獻血樣本均為本血站2015年1月1 日-12月31日期間采集，予以EDTA抗凝，每份5 mL。

檢驗儀器與試劑：檢驗儀器：①平板離心機：臺式平板離心機(universal 32)；②恒溫水浴箱(上海精宏SSW-6002)；③血型加樣儀(Microlab Star，STAR 8CH)；④比色儀(Anthos Zenyth 340rt)；⑤平板(浙江拱東塑料公司，96孔U型培養(yǎng)板)；⑥標(biāo)本離心機：Anke Lxj-ⅡB低速大容量多管離心機；⑦細胞洗滌離心機：日本久保田(Seromatic-Ⅱ)。試劑：選取上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供的ABO型鑒定試劑，正定型試劑規(guī)格如下：抗A為10 mL/支，抗B為10 mL/支；反定型試劑A、B、O均為10 mL/支；Rh(D)血型鑒定試劑規(guī)格是10 mL/支；抗D(IgM+IgG)：mill ipore(uk)Ltd為10 mL/支，抗D(IgG) 為10mg/支，抗D(IgM)為10 mg/支，抗人球蛋白(抗IgG、C3d)為10 mg/支。

檢測方法：將標(biāo)本3 000轉(zhuǎn)/min，離心15 min。離心好的標(biāo)本移至ATAR試管架，備好各種類型的試劑、生理鹽水，開啟“血型加樣”程序。首先，加樣反定型A孔、B孔，均60 μL血清，隨后吸收20 μL濃紅細胞置入生理鹽水微板200 μL中混勻；其次，分別分配正定型A孔、B孔，各自30 μL細胞，再分配抗-D30 μL細胞；再者，分別分配30 μL標(biāo)準(zhǔn)紅細胞、60 μL標(biāo)準(zhǔn)血清和60 μL 抗D血清，混勻后置入平板離心機內(nèi)，予以1 000轉(zhuǎn)/min離心處理，共1 min。最后，置入微板振蕩儀內(nèi)，予以800～1 400轉(zhuǎn)/min的振蕩，直至無凝聚、無點狀沉淀后，30 s～3 min后，進入Lisswell系統(tǒng)的“酶標(biāo)儀檢測”比色，其臨界值是0.65，進行血型核對。

Rh(D)血型確認實驗：微量板法檢測出的Rh(D)陰性的標(biāo)本，需要做Rh(D)血型確認試驗。方法：取3支試管，分別置入抗D(IgM+IgG)、抗D(IgM)、抗D(IgG) 各1 d，置入待檢測者RBC懸液各1 d，經(jīng)15 s的3 000轉(zhuǎn)/min離心處理后，若3支試管中任意1支試管顯示陽性，則表示Rh陽性；如果為陰性，則置入37℃水浴后30 min，隨后予以NS三洗，吸干后置入抗人球蛋白1 d，經(jīng)15 s的3 000轉(zhuǎn)/min離心處理后，若任意1支試管凝聚表示Rh為陽性，不凝聚則表示Rh為陰性。

結(jié)果

對血站19 819份無償獻血樣本予以ABO血型的正反定型和Rh(D)血型檢測，其中ABO血型的正反定型與初篩血型比對，符合者19 800份，其ABO血型的正反定型與初篩血型比對，符合率99.90%；而與初篩ABO血型比對，不符者19份，其中正反定型不符者1例，初篩錯誤者13例，初篩正確而發(fā)錯血型標(biāo)簽者5份；Rh(D)血型檢出96例，其陰性率0.48%。

外采初篩的ABO血型錯誤者13例，因初篩紙片凝聚法鑒定錯誤者12例，因血型凝聚效價下降所導(dǎo)致者1例。

討論

參照《血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范》《血站質(zhì)量管理規(guī)范》中的要求，血站需對獻血者ABO血型(包括反定、正定)與Rh(D)血型進行檢測。既往血站系統(tǒng)主要采取試管法、手工卡片法對獻血者的血型進行檢測，設(shè)備簡單，操作簡便，但影響因素較多，且靈敏度低[2，3]。因批量檢測的工作量極大，加上手工重復(fù)、機械性操作容易產(chǎn)生血型差錯，嚴重影響血站血型檢測工作效率和檢測準(zhǔn)確性[4]。因此，有必要使用更先進的血型檢測方法，保證其血型檢測準(zhǔn)確性。

ABO血型、Rh(D)血型是輸血工作期間最重要的兩個血型系統(tǒng)，正確鑒定獻血者血型，是確保輸血治療安全的前提條件[5]。伴隨ABO血型、Rh(D)血型定型檢測技術(shù)的發(fā)展，加上醫(yī)療技術(shù)要求日益提升，微量板法作為一種新血型檢測法，在我國血站系統(tǒng)中被廣泛應(yīng)用，隨后大幅度降低了血站血型檢測工作強度，并避免了人為因素所致血型檢測錯誤，確保血型鑒定準(zhǔn)確性，并實現(xiàn)了血型檢測操作標(biāo)準(zhǔn)化和自動化[6]，提升臨床輸血治療安全性。微量板法用于血型檢測中的優(yōu)勢明顯，綜合如下：①應(yīng)用全自動設(shè)備進行加樣，且加樣量較精確，加樣速度極快；②血液樣本的用量較少，試劑用量較少，可節(jié)省試劑成本。經(jīng)本次研究發(fā)現(xiàn)，使用微量板法檢測獻血者的ABO血型正定型、反定型以及Rh(D)血型檢測，其血型正確率高達100%，Rh(D)血型陰性率是0.48%，證明了微量板法應(yīng)用于血站血型檢測的突出效果。

[1]陳志軍,董靜,吳稷,等.自動化微板檢測技術(shù)在獻血者血型檢測中的應(yīng)用[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2013,32(7):87-88.

[2]陳榮倉,蔡淑鋒,朱紫苗,等.溫州地區(qū)獻血人群MN、P、Lewis和Kidd血型系統(tǒng)血型表現(xiàn)型分布的調(diào)查[J].中華全科醫(yī)學(xué),2015, 13(10):1681-1684.

[3]李琳琳,李美霖,車進,等.全自動血型分析儀與微板法應(yīng)用于獻血者不規(guī)則抗體篩查的比較分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2016,13 (5):593-594.

[4]劉淼,王霞,潘彤.BECKM AN PK7300全自動血型檢測系統(tǒng)可疑結(jié)果的原因分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2016,13(1):37-38.

[5]焦丹梅,舒群峰.495例初篩Rh陰性獻血者血型血清學(xué)檢測結(jié)果分析[J].襄陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報,2014,13(4):16-19.

[6]Xu W,Wan F,Lou Y,et al.Evaluation of an automated microplate technique in the Galileo system forABO and Rh(D)blood grouping.[J].Clinical Laboratory,2014,60(2): 241-244.

Application of microplate method in the detection of blood type in the blood bank

Sun Dongmei
Clinical Laboratory,the Blood Bank of Changshu City 215500

Objective:To explore the application effect of microplate method in the detection of blood type in the blood bank. Methods:19 819 volunteer blood samples were selected,we carried out blood group detection with microplate method.Results: Microplate method was used to detect ABO blood group positive typing,reverse typing and Rh(D)blood type,and the correct rate was 100%.Conclusion:The application effect of microplate method in the detection of blood type in the blood bank was affirmative, but we need to carry out strict manual check to ensure the accuracy of its detection.

Microplate method;Detection of blood type in the blood bank;Voluntary blood donation

10.3969/j.issn.100614x.2017.2.73