郭云霞 郝慶紅 劉月琴 張英杰 任淑月

(1.河北農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，保定071001；2.河北農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，保定071001)

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微貯玉米秸稈對道寒雜交斷奶羔羊瘤胃發(fā)酵及微生物區(qū)系的影響

郭云霞1,2郝慶紅2劉月琴1*張英杰1任淑月2

(1.河北農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，保定071001；2.河北農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，保定071001)

本試驗旨在研究微貯玉米秸稈對道寒雜交斷奶羔羊瘤胃發(fā)酵及微生物區(qū)系的影響，為微貯玉米秸稈促進營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收研究提供理論依據(jù)。試驗選用平均體重為(24.62±3.59) kg的道寒雜交斷奶羔羊80只，采用單因子完全隨機試驗設計分為5組(每組16只)，分別飼喂以微貯玉米秸稈替代0(對照)、25%、50%、75%、100%青貯玉米秸稈的全混合日糧(TMR)。預試期15 d，正試期60 d。結(jié)果表明：在飼喂4 h后，瘤胃液pH除25%添加組較對照組稍有下降(P>0.05)外，50%、75%、100%添加組分別較對照組提高了1.39%(P>0.05)、4.16%(P<0.05)、7.45%(P<0.01)；隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，瘤胃液總揮發(fā)性脂肪酸的含量呈先上升后降低趨勢，25%、50%、75%添加組分別較對照組升高了0.93%(P>0.05)、4.18%(P>0.05)、5.19%(P<0.05)，100%添加組與對照組相近(P>0.05)；各添加組瘤胃液乙酸/丙酸均低于對照組，25%、50%、75%、100%添加組分別較對照組下降了12.44%(P<0.05)、4.93%(P>0.05)、12.21%(P<0.05)、9.86%(P<0.05)。變性梯度凝膠電泳(DGGE)圖譜分析得出，微貯玉米秸稈替代適量青貯玉米秸稈促進了瘤胃液纖維降解菌的增殖，抑制了蛋白質(zhì)降解菌的增殖。綜上可知，以微貯玉米秸稈替代75%青貯玉米秸稈配制TMR更有利于提高道寒雜交斷奶羔羊的瘤胃發(fā)酵水平。

斷奶羔羊；微貯玉米秸稈；瘤胃液；揮發(fā)性脂肪酸；DGGE

1 材料與方法

1.1 試驗設計

選取80只體況良好、健康的平均體重為(24.62±3.59) kg的道寒雜交斷奶羔羊，采用單因子完全隨機試驗設計將供試羊隨機分成5組(表1)，分欄飼養(yǎng)，每組16只。預試期為15 d，期間對試驗羊的健康狀況進行檢查，并編號。正試期為60 d，每天分別在08：00和16：00飼喂，自由飲水，定期對羊舍進行清掃及消毒，保證羊舍干燥衛(wèi)生。

1.2 微貯玉米秸稈的制作

微貯玉米秸稈制作：添加發(fā)酵菌劑(枯草芽孢桿菌N-8∶枯草芽孢桿菌N-10∶酵母菌=4∶4∶3，活菌數(shù)均為1.0×1010CFU/g，每噸秸稈添加100 g)和硫酸銨(每噸秸稈添加3%)混合均勻后厭氧發(fā)酵30 d，啟用。試驗所用微貯玉米秸稈與青貯玉米秸稈的營養(yǎng)成分見表2。

表1 試驗設計

表2 青貯玉米秸稈與微貯玉米秸稈的營養(yǎng)成分(干物質(zhì)基礎)

1.3 試驗飼糧配制

參考NRC(2007)飼養(yǎng)標準制訂全混合日糧(TMR)配方(表3)。隨著羊體重的增加，按日增重200 g左右進行飼喂量的調(diào)整，共3期，每期20 d。第1期每天每只羊干物質(zhì)飼喂量為1.0 kg，第2期和第3期逐漸增加到1.1 kg左右，以保證羊只生長的需要。

1.4 檢測指標

1.4.1 瘤胃液pH

飼養(yǎng)試驗結(jié)束當天，對照組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組飼喂時間分別為07:00、10:00、13:00、16:00、19:00，屠宰時間分別為11:00、14:00、17:00、20:00，屠宰后立即采集瘤胃液。每組選取5只進行屠宰，采用4層紗布過濾進行瘤胃液的采集，每只采集10 mL，采集后立即測定pH(pHS-3C pH測定儀)。

1.4.2 瘤胃液細菌計數(shù)

將瘤胃液取5 mL放入冰盒中，帶回實驗室后取1 mL瘤胃液采用10倍梯度稀釋法稀釋至10-5、10-6、10-73個稀釋度，涂布于營養(yǎng)瓊脂(NA)培養(yǎng)基上，9 cm平板的接種量為100 μL，每個稀釋度至少3個平行，37 ℃厭氧恒溫培養(yǎng)48 h，選擇菌落數(shù)為30～300的平板進行計數(shù)。

表3 全混合日糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1)多維和礦物微量元素為每千克全混合日糧提供Multi-vitamin and mineral trace elements provide the following per kg of TMR: VA 10 260 IU，VE 301 IU，VD 2 200 IU，F(xiàn)e 57.86 mg，Zn 42.73 mg，Mn 33.65 mg，Cu 9.34 mg，Se 0.19 mg，I 0.76 mg，Co 0.23 mg。

2)營養(yǎng)水平為實測值。Nutrient levels are measured values.

1.4.3 瘤胃液VFA含量的測定

將瘤胃液經(jīng)4層紗布過濾，濾液經(jīng)7 500 r/min離心5 min，過微孔濾膜，參照Mkhize等[7]的方法利用氣相色譜(Agilent MSD-5975C)-質(zhì)譜儀(Agilent GC-7890A)直接進樣分析瘤胃液中VFA的含量。采用自動進樣器(Agilent 7683B Series)，毛細管柱(Agilent HP-INNOWA：30 m×0.250 mm×0.25 μm；火焰離子化檢測器(FID)。

色譜條件：載氣為氮氣(N2)(144.58 kPa，總流量24 mL/min)；進樣口溫度250 ℃；質(zhì)譜儀四極桿溫度150 ℃；離子源溫度230 ℃；采用程序升溫，初始溫度100 ℃，時間3 min，以5 ℃/min的速率升溫至150 ℃，運行13 min，再以30 ℃/min的速率升溫至210 ℃；進樣量為1 μL。

1.4.4 瘤胃液中菌群豐度的測定

取飼喂4 h后的瘤胃液，采用十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)手提法提取樣品基因組總DNA。以樣品基因組DNA為模板，采用細菌通用引物GC-338F和518R(表4)擴增樣品16S rDNA高變區(qū)序列，為了在后續(xù)的變性梯度凝膠電泳(DGGE)中提高其分辨率，采用GC夾技術(shù)，即在其上游引物338F前加上GC重復序列。采用變性梯度為35%～55%、濃度為7%的聚丙烯酰胺凝膠在1×TAE緩沖液中于150 V、60 ℃下電泳5 h。

表4 引物序列

采用T-gradient PCR儀(Biometra，德國)進行PCR擴增，Gel-Doc2000凝膠成像儀(Bio-Rad，美國)進行成像。

PCR擴增體系(50 μL)為：10×PCR buffer 5 μL、dNTP(2.5 mmol/L)3.2 μL、rTaq(5 U/μL)0.4 μL、GC-338F(20 μmol/L)1 μL、518R(20 μmol/L)1 μL、模板DNA 50 ng，補雙蒸水(ddH2O)至50 μL。

PCR擴增程序為：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性1 min，55 ℃復性45 s，72 ℃延伸1 min，30個循環(huán)；最終72 ℃延伸10 min。

PCR產(chǎn)物采用OMEGA公司的DNA Gel Extraction Kit純化回收。測序結(jié)果采用DNAstar和Cluster軟件進行序列分析，下載最相似的菌株序列作為系統(tǒng)發(fā)育樹的參考序列，然后采用MEGA5.0軟件利用鄰接(neighbor-joining)法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，自展數(shù)(bootstrap)為1 000。

1.5 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2013軟件進行整理，利用SPSS 17.0進行統(tǒng)計分析，通過單因素方差分析進行顯著性檢驗，試驗結(jié)果以平均值±標準差(mean±SD)表示。P<0.01為差異極顯著，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 微貯玉米秸稈對瘤胃發(fā)酵的影響

2.1.1 微貯玉米秸稈對瘤胃液pH和總菌數(shù)的影響

由表5可知，添加微貯玉米秸稈后，飼喂4 h后的瘤胃液pH除Ⅰ組有所下降外，其他試驗組均呈上升趨勢，Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組分別較對照組提高了1.39%(P>0.05)、4.16%(P<0.05)、7.45%(P<0.01)，同時Ⅳ組還極顯著高于Ⅰ組、Ⅱ組(P<0.05)，但與Ⅲ組無顯著差異(P>0.05)。各微貯玉米秸稈添加組瘤胃液總菌數(shù)均高于對照組，其中Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組與對照組相比分別增加了20.69%(P<0.01)、17.24%(P>0.05)、34.48%(P<0.01)、10.34%(P>0.05)。

表5 微貯玉米秸稈對瘤胃液pH和總菌數(shù)的影響

同行數(shù)據(jù)肩標無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference(P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01). The same as below.

2.1.2 微貯玉米秸稈對瘤胃液VFA含量的影響

由表6可知，飼糧中添加不同量的微貯玉米秸稈后瘤胃液乙酸含量有不同程度下降，與對照組相比，Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組分別下降了10.56%(P<0.01)、2.81%(P>0.05)、7.83%(P<0.01)、15.03%(P<0.01)。與對照組相比，Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組瘤胃液丙酸含量分別提高了0.59%(P>0.05)、2.01%(P>0.05)、4.73%(P>0.05)，但Ⅳ組則出現(xiàn)極顯著降低(P<0.01)。飼糧中添加不同量的微貯玉米秸稈后瘤胃液丁酸、異丁酸、戊酸含量表現(xiàn)為顯著或極顯著升高(P<0.05或P<0.01)，己酸含量表現(xiàn)為顯著或極顯著降低(P<0.05或P<0.01)。與對照組相比，Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組瘤胃液總VFA含量分別升高了0.93%(P>0.05)、4.18%(P>0.05)、5.19%(P<0.05)，Ⅳ組接近對照組，差異不顯著(P>0.05)。與對照組相比，第Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組瘤胃液乙酸/丙酸分別下降了12.44%(P<0.05)、4.93%(P>0.05)、12.21%(P<0.05)、9.86%(P<0.05)。

2.2 微貯玉米秸稈對瘤胃微生物區(qū)系的影響

2.2.1 瘤胃液中菌群的聚類分析

DGGE圖譜中所有樣品均產(chǎn)生了清晰、豐富的條帶，說明瘤胃液中微生物的菌種豐度均較高，同時也可看到不同組別的條帶在數(shù)目和顏色深淺上有所差異，說明不同組瘤胃液中細菌種類和數(shù)量存在差異。DGGE圖譜聚類分析表明，玉米秸稈微貯可以影響瘤胃的微生物區(qū)系。由圖1可知，5組樣品聚成兩大簇，其中對照組、Ⅰ組、Ⅱ組聚為一簇，Ⅲ組、Ⅳ組聚為一簇。由戴斯系數(shù)比較PCR-DGGE圖譜的相似性可知，Ⅰ組、Ⅱ組之間的相似值大于0.61，說明這2個組之間瘤胃菌群的相似性較高；Ⅲ組與除對照組外的其他組之間的相似值均小于0.40，表明此組與其他3組的相似性較低。由此可見，隨著玉米秸稈微貯添加量的增加，瘤胃內(nèi)菌群的相似性逐漸降低。

表6 微貯玉米秸稈對瘤胃液VFA含量的影響

A2、B2、C2、D2、E2分別代表對照組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組。圖2同。

A2, B2, C2, D2 and E2 are control group, groupⅠ, group Ⅱ, group Ⅲ and group Ⅳ, respectively. The same as Fig.2.

圖1 各組瘤胃液中菌群的聚類分析

Fig.1 Cluster analysis of microflora in ruminal fluid among groups

2.2.2 主要電泳條帶的序列測定及分析

按不同組中條帶亮度的不同，選取16條DGGE凝膠條帶(圖2中標注的16條條帶)回收后，以GC-338F和518R為引物進行PCR擴增，獲得目的DNA片段。PCR產(chǎn)物純化后連接到pMD18-T載體上，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞中，篩選陽性克隆測序。測序結(jié)果與GenBank中的序列進行比對，得到條帶所代表的細菌類型。每個回收條帶選取3個克隆進行序列測定，序列比對分析結(jié)果見表7。結(jié)果表明，切膠回收條帶所代表的細菌與現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫中的細菌有很高的同源性，大部分在90%以上，有的同源性甚至達到了100%。

由序列比對分析結(jié)果可知，條帶1和8已鑒定與原蟲相似性為99%。由DGGE圖譜可知，隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，條帶1和8的亮度先逐漸減弱后增強，均在添加量為100%時最亮；圖譜上條帶2、6、7已鑒定與擬桿菌門中的擬桿菌相似性在90%以上，在Ⅲ組中條帶6、7亮度有增強的趨勢；條帶3、4與瘤胃普氏菌相似性為98%，是瘤胃中重要的纖維降解菌，隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，條帶亮度逐漸增強；條帶5、9、11已鑒定與不可培養(yǎng)瘤胃細菌類群相似，相似性達到99%，鑒定為不可培養(yǎng)瘤胃細菌，隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，條帶5的亮度在Ⅲ組、Ⅳ組高于其他組，而條帶9、11的亮度則是逐漸增強；條帶10、16已鑒定為與變形桿菌門中的變形菌門類群的相似度為90%，隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，其亮度逐漸減弱；條帶14、15與厚壁菌門類群的相似度分別為99%和98%，鑒定為反芻月形單胞菌，隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，其亮度逐漸增強；條帶15鑒定為不可培養(yǎng)毛螺旋菌，隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，其亮度呈下降趨勢，以對照組最亮。

采用MEGA5.0軟件，鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)，自展數(shù)為1 000，其中條帶1和8的相似類群屬于原蟲，不參加構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

3 討 論

瘤胃發(fā)酵水平直接影響營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。瘤胃內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定主要體現(xiàn)在瘤胃液pH上，而pH的變動與飼糧的類型和采食后的時間密切相關(guān)[3]。當粗飼料占飼糧比例由2/3降低至1/4時，瘤胃液pH在飼喂4 h后由6.2下降至5.9，這可能是精料含量過多，瘤胃微生物快速降解碳水化合物，導致pH降低[8]；反之，飼糧中粗纖維的含量越高，瘤胃液pH越高，高的pH利于瘤胃纖維素降解菌的增殖。據(jù)報道，纖維素分解菌(如琥珀酸生成菌、白瘤胃球菌、黃瘤胃球菌等)對酸的耐受性較差，其最適pH為6.0～7.0，當瘤胃液pH下降至6.0時則抑制纖維素菌的生長[9-10]。本試驗結(jié)果表明，在精粗比為1∶2的條件下，通過添加微貯玉米秸稈配制TMR，在飼喂4 h后，隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，瘤胃液pH先下降后逐漸上升，其中添加75%和100%微貯玉米秸稈的組的瘤胃液pH分別為6.01和6.20，與對照組相比分別提高了4.16%和7.45%，差異顯著或極顯著。這可能是由于微貯玉米秸稈中含有可降解秸稈中纖維素和木質(zhì)素的芽孢菌(枯草芽孢桿菌和酵母菌活菌)，飼喂4 h后，瘤胃微生物發(fā)酵產(chǎn)生VFA，導致瘤胃液pH降低，但是隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，瘤胃液pH有明顯的升高，表明適量微貯玉米秸稈的添加有助于提高瘤胃的發(fā)酵水平，且微貯玉米秸稈中含有數(shù)量很高的活性芽孢菌，可短時間提高瘤胃內(nèi)降解纖維素菌的數(shù)量，這與馮偉業(yè)[11]的報道一致。

纖維素菌數(shù)量增多，飼糧在瘤胃內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)生的VFA含量增加，表明微生物發(fā)酵能力增強。VFA是瘤胃中碳水化合物發(fā)酵的主要產(chǎn)物，主要包含乙酸、丙酸、丁酸等。乙酸主要用于氧化供能，丙酸則被肝臟轉(zhuǎn)變?yōu)轶w組織成分，用于生長、繁殖，另外丙酸產(chǎn)量與甲烷的產(chǎn)生量之間呈負相關(guān)，因此，丙酸含量上升可以減少生成甲烷的能量損失[12]。VFA含量的變化與飼糧中粗飼料比例密切相關(guān)。當飼糧中粗飼料比例由30%提高至50%時，總VFA合成量增加，其中乙酸和丁酸產(chǎn)量下降，丙酸產(chǎn)量則上升[13-15]。從由不同精粗比(3∶7、4∶6、5∶5)試驗中得知，在飼喂0～4 h階段，隨著粗飼料比例的增加，乙酸含量呈下降趨勢，而丙酸濃度呈上升趨勢[16]。本試驗采集飼喂4 h后的瘤胃液，隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，乙酸含量下降趨勢增大，丙酸含量升高趨勢降低，與對照組相比，添加75%微貯玉米秸稈的組瘤胃液乙酸含量降低了7.83%，丙酸含量增加了4.73%，總VFA含量增加了5.19%，乙酸/丙酸降低了12.21%，促進了營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

圖2 DGGE電泳圖

條帶編號Bandnumber最相似菌株Themostsimilarstrains登錄號Accessionnumber相似度Similarity/%最相似類群Themostsimilargroups1DiploplastronaffineJN11622599原蟲2瘤胃細菌AF54420898擬桿菌門3瘤胃普氏菌AB84944697擬桿菌門4瘤胃普氏菌AF21861998擬桿菌門5不可培養(yǎng)瘤胃細菌HQ16076199環(huán)境樣品6不可培養(yǎng)擬桿菌門細菌HM10540699擬桿菌門7擬桿菌門細菌NR_11310298擬桿菌門8Polyplastronsp.JN11620099原蟲9不可培養(yǎng)細菌JF66182599環(huán)境樣品10DongiamobilisNR_11667690變形菌門11不可培養(yǎng)瘤胃細菌GQ32740199環(huán)境樣品12瘤胃細菌GU32436099細菌13捻轉(zhuǎn)血矛線蟲LM60244599后生動物14反芻月形單胞菌DQ18690199壁厚菌門15不可培養(yǎng)毛螺菌科細菌GQ35842398壁厚菌門16Altererythrobactersp.KJ65826290變形菌門

Band:條帶；Prevotellaruminicola：瘤胃普氏菌；UnculturedBacteroidetesbacterium：不可培養(yǎng)擬桿菌門細菌；Uncultured bacterium：不可培養(yǎng)細菌；Rumen bacterium：瘤胃細菌；Uncultured rumen bacterium：不可培養(yǎng)瘤胃細菌；Haemonchusplacei：捻轉(zhuǎn)血矛線蟲；Selenomonasruminantium：反芻月形單胞菌；Uncultured Lachnospiraceae bacterium：不可培養(yǎng)毛螺菌科細菌。

圖3 系統(tǒng)發(fā)育樹

Fig.3 Phylogenetic tree

瘤胃發(fā)酵水平的調(diào)節(jié)最終依靠的是瘤胃內(nèi)強大的菌群，瘤胃內(nèi)的細菌可幫助反芻動物消化纖維素和合成大量菌體蛋白。其中纖維的分解主要依靠真菌的強穿透能力和細菌的發(fā)酵特性，使植物纖維組織的內(nèi)部張力先降低、組織變得疏松，細菌再進一步降解發(fā)酵[17]。粗飼料顯著影響瘤胃微生物區(qū)系，粗飼料比例的升高可顯著促進瘤胃內(nèi)蛋白降解細菌、纖維素降解菌、乳酸菌等的增殖，降低瘤胃原蟲的數(shù)量[18]。參照文獻[19]，本試驗利用DGGE技術(shù)對瘤胃液中菌群豐度進行了測定，試驗所得DGGE圖譜中各組樣品均產(chǎn)生了清晰、豐富的條帶，說明瘤胃液中各菌種豐度都較高，同時不同組間瘤胃液中細菌的種類和數(shù)量存在差異。由本試驗結(jié)果可知，由于原蟲為低等生物，用細菌引物也能擴增出來，瘤胃原蟲對于細菌的吞食可導致氮在瘤胃中的無效循環(huán)，而原蟲與甲烷菌關(guān)系密切，原蟲數(shù)量降低促進甲烷菌的增殖[20]，進而降低能量的損耗，降低瘤胃原蟲數(shù)量可促進營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收利用率。隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，原蟲數(shù)量先出現(xiàn)下降的趨勢，以微貯玉米秸稈添加量為75%時條帶亮度最低，但是在添加量為100%時原蟲數(shù)量又出現(xiàn)增加，表明用微貯秸稈完全替代青貯玉米秸稈不利于瘤胃的發(fā)酵。瘤胃普氏菌是瘤胃重要的木質(zhì)素降解菌，屬擬桿菌門，其在進化樹上形成了很大的簇，隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，瘤胃內(nèi)瘤胃普氏菌和擬桿菌數(shù)量增加，表明木質(zhì)素降解能力增強。此外，厚壁菌門類群中的反芻月形單胞菌是瘤胃內(nèi)一種主要的乳酸發(fā)酵菌，占瘤胃細菌總數(shù)的50%以上，可對瘤胃內(nèi)淀粉進行分解，微貯玉米秸稈添加量為75%和100%時瘤胃液中反芻月行單胞菌數(shù)量增多，可加快瘤胃內(nèi)淀粉的降解。隨著微貯玉米秸稈添加量的增加，DGGE圖譜中變形菌門和不可培養(yǎng)毛螺旋菌條帶的亮度逐漸降低，表明在飼喂4 h后蛋白質(zhì)的降解速度減慢。由此可以看出，微貯玉米秸稈替代適量青貯玉米秸稈影響了瘤胃微生物區(qū)系，可促進木質(zhì)素和纖維素、淀粉降解菌的增殖，降低蛋白質(zhì)降解菌的增殖，加快碳水化合物的降解，促進營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

4 結(jié) 論

① 以微貯玉米秸稈替代75%青貯玉米秸稈配制TMR，在飼喂4 h后道寒雜交斷奶羔羊瘤胃液pH即可達到6.01，利于瘤胃液纖維降解菌的增殖，同時降低蛋白質(zhì)降解菌的數(shù)量。

② 以微貯玉米秸稈替代75%青貯玉米秸稈配制TMR飼喂道寒雜交斷奶羔羊，可促進瘤胃內(nèi)總VFA的合成，利于營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

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*Corresponding author, professor, E-mail： liuyueqin66@126.com

(責任編輯 菅景穎)

Effects of Microbial Fermentation Corn Straw on Rumen Fermentation and Microbial Diversity of Dorset×Thin-Tailed Han Weaned Lambs

GUO Yunxia1,2HAO Qinghong2LIU Yueqin1*ZHANG Yingjie1REN Shuyue2

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,HebeiAgriculturalUniversity,Baoding071001,China; 2.CollegeofLifeScience,HebeiAgriculturalUniversity,Baoding071001,China)

This study was to evaluate the effects of microbial fermented corn straw on microbial diversity of Dorset×thin-tailedHanweaned lambs, and to provide theoretical basis for studies on the microbial fermented corn straw promoting the digestion and absorption of nutrients. Eighty Dorset×thin-tailedHanweaned lambs with the average body weight of (24.62±3.59) kg were randomly assigned to 5 groups and each group had 16 lambs, in which 0 (control), 25%, 50%, 75% and 100% silage corn straw were substituted by microbial fermented corn straw, respectively. Preliminary trial period was 15 days and formal experimental period was 60 days. The results showed as follows: after feeding 4 h, except the 25% addition group decreased a little (P>0.05), the pH of ruminal fluid in 50%, 75% and 100% addition groups increased by 1.39% (P>0.05), 4.16% (P<0.05) and 7.45% (P<0.01) compared with the control group, respectively; with the microbial fermented corn straw addition increasing, the total volatile fatty acid (VFA) content in ruminal fluid was firstly increased and then down, which in 25%, 50% and 75% addition groups increased by 0.93% (P>0.05), 4.18% (P>0.05) and 5.19% (P<0.05) compared with the control group, respectively, but it showed no significant difference between in control group and 100% addition group (P>0.05); the acetate/propionate in ruminal fluid in addition groups was lower than that in control group, and that in 25%, 50%, 75% and 100% groups decreased by 12.44% (P<0.05), 4.93% (P>0.05), 12.21% (P<0.05) and 9.86% (P<0.05) compared with the control group, respectively. By the analysis results of denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE), using microbial fermented corn straw to substitute appropriate silage corn straw could improve the proliferation of fiber degradation bacterium and inhibit the proliferation of protein degradation bacterium in ruminal fluid. In conclusion, using microbial fermented corn straw to substitute 75% silage corn straw in TMR is optimum to improve the level of ruminal fermentation of Dorset×thin-tailedHanweaned lambs.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(1)：239-248]

weaned lambs; microbial fermented corn straw; ruminal fluid; volatile fatty acids; DGGE

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.01.027

2016-07-21

國家肉羊現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設項目(CARS-39)；國家絨毛用羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建項目(CARS-40-21)

郭云霞(1978—)，女，河北新樂人，高級實驗師，博士研究生，從事農(nóng)業(yè)微生物及羊繁殖調(diào)控研究。E-mail： gyx310@163.com

*通信作者：劉月琴，教授，碩士生導師，E-mail： liuyueqin66@126.com

S816

A

1006-267X(2017)01-0239-10