彭紅英，江 濤，楊濱賓，陳雪華，陳曉堅(jiān)，劉敏珊(廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司研究所，廣州510130)

正交試驗(yàn)優(yōu)化益骨顆粒的提取工藝Δ

彭紅英＊，江 濤#，楊濱賓，陳雪華，陳曉堅(jiān)，劉敏珊(廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司研究所，廣州510130)

目的:優(yōu)化益骨顆粒的提取工藝。方法:采用L9(34)正交試驗(yàn)，以淫羊藿苷、龍膽苦苷、馬錢苷酸轉(zhuǎn)移率和出膏率的綜合評分為評價指標(biāo)，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、溶劑用量、提取次數(shù)、提取時間為考察因素，優(yōu)化益骨顆粒的提取工藝并進(jìn)行工藝驗(yàn)證。結(jié)果:優(yōu)化的提取工藝為藥材加10倍量60%乙醇回流提取2次，每次1 h。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，淫羊藿苷、龍膽苦苷、馬錢苷酸的平均轉(zhuǎn)移率分別為81.28%、48.71%、59.82%(RSD分別為1.54%、2.37%、2.52%，n=3)，平均出膏率為31.48%(RSD=1.97%，n=3)。結(jié)論:優(yōu)化的益骨顆粒提取工藝穩(wěn)定可行、重復(fù)性好，可為后續(xù)的生產(chǎn)工藝研究提供依據(jù)。

益骨顆粒;正交試驗(yàn);提取工藝;淫羊藿苷;龍膽苦苷;馬錢苷酸

益骨顆粒處方源于暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院治療骨質(zhì)疏松癥的院內(nèi)制劑益骨膠囊，全方由淫羊藿、秦艽、杜仲等藥材組成，具有補(bǔ)骨生髓、活血止痛的功效，臨床上用于肝腎不足、瘀血阻絡(luò)所致骨質(zhì)疏松癥，癥見腰膝酸軟、疼痛。益骨膠囊作為醫(yī)院制劑在臨床用于防治骨質(zhì)疏松癥已近20年，對210例絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者進(jìn)行的為期6個月的前瞻性、隨機(jī)雙盲、安慰劑對照和陽性藥對照的臨床研究顯示，益骨膠囊治療組總有效率為95.5%，未見可能相關(guān)的毒副反應(yīng)發(fā)生[1-2]。由于原制劑益骨膠囊采用傳統(tǒng)的藥材水提工藝，導(dǎo)致臨床服用量大、制劑易吸潮、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性差，制約了該產(chǎn)品進(jìn)一步的臨床推廣和應(yīng)用。鑒于此，需對原制劑的提取工藝和劑型進(jìn)行改進(jìn)，將膠囊改為顆粒。因此，本文以相關(guān)活性成分淫羊藿苷、龍膽苦苷及馬錢苷酸的轉(zhuǎn)移率及出膏率為綜合考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)化益骨顆粒的提取工藝，為今后該藥的生產(chǎn)工藝研究提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

1260型高效液相色譜儀，包括G1311C型四元泵、G1322A型在線真空脫氣機(jī)、G1329B型自動進(jìn)樣器、G1316A型柱溫箱、G1315D型二極管陣列檢測器(DAD)、ChemStation型色譜工作站(美國Agilent公司); KQ-600DE型數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);XA105型電子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。

你說的沒錯，學(xué)校是歸聯(lián)合校管理，可咱們學(xué)校在沙河村的一畝三分地上，他是坐家虎啊。他說了，要是學(xué)校不聽他的，他就要停水?dāng)嚯?，門前挖溝，還要收回學(xué)校的房子。楊校長眼里滿是傷感和無奈。你也知道，以他的脾氣，是說得出做得到的。

1.2 藥材、藥品與試劑

2.1.5 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取上述混合對照品溶液、供試品溶液(60%乙醇提取樣品)和陰性對照溶液各10μL，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，在供試品溶液與混合對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上有相同的吸收峰，且陰性對照溶液無干擾，提示該測定條件具有較好的專屬性，結(jié)果詳見圖1。

2 方法與結(jié)果

2.1 淫羊藿苷、龍膽苦苷和馬錢苷酸的含量測定

2.1.3 供試品溶液的制備 取各提取工藝制備的益骨顆粒干膏粉約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇20m L，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率360W，頻率40 kHz)30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.1 色譜條件色譜柱:Agilent Eclipse Plus C18(250 mm×4.6mm，5μm);流動相:乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脫(0～5 m in，9%～11%A;5～20 m in，11%～25%A;20～25m in，25%～30%A;25～35m in，30%A);流速:1.0 m L/m in;檢測波長:254 nm;柱溫: 25℃;進(jìn)樣量:10μL。

2.1.2 混合對照品溶液的制備 以60%甲醇為溶劑制備淫羊藿苷質(zhì)量濃度為102.4μg/m L、龍膽苦苷質(zhì)量濃度為502.4μg/m L、馬錢苷酸質(zhì)量濃度為101.5μg/m L的混合對照品溶液。

會上，吉林省土壤肥料總站研究員黃健作“吉林黑土地保護(hù)與利用”的報告。報告全面分析了當(dāng)前吉林省內(nèi)黑土地面臨的形勢和主要問題，闡述了吉林省黑土地保護(hù)的重要意義及采取的主要措施，對促進(jìn)吉林省綠色農(nóng)業(yè)發(fā)展有著積極作用。吉林省第十三屆人民代表大會常務(wù)委員會第二次會議通過了《吉林省黑土地保護(hù)條例》，并于2018年7月1日起正式施行?！稐l例》明確了黑土地保護(hù)范圍，包括耕地、林地、草地、園地和濕地等所有黑土地資源，對所有從事任何相關(guān)黑土地的各種行為及各部門職責(zé)均作出了明確規(guī)定，確保黑土地數(shù)量不減少，質(zhì)量不降低，填補(bǔ)了我