儲著凌，侯樂偉，胡國強，胡 君，尹 鵬，朱 清

·臨床醫(yī)學· ·短篇論著·

hsa-miR-759促進胃癌細胞SGC-7901增殖的機制研究

儲著凌，侯樂偉，胡國強，胡 君，尹 鵬，朱 清

NGX6；SGC-7901；hsa-miR-759；增殖活性

世界范圍內(nèi)，胃癌發(fā)病率在所有惡性腫瘤中居第4位，其致死率則位于第2位，我國是胃癌高發(fā)國家，每年新增病例約占全球新增數(shù)量的40%。由于我國早期胃癌診斷率較低，治療方法多以手術(shù)切除為主，這使得胃癌的致死率高于世界平均水平，因此，尋找胃癌診斷的新方法以及治療的新途徑尤為重要[1]。目前，早期胃癌臨床治療多以手術(shù)為主，內(nèi)鏡下黏膜切除術(shù)(EMR)和內(nèi)鏡下黏膜下剝離術(shù)(ESD)是主要的2種手術(shù)方法[2-3]。臨床原發(fā)腫瘤的切除，通常對于腸型黏膜內(nèi)癌，病灶部位無潰瘍或潰瘍疤痕的胃癌有較好的效果，而對伴有遠處轉(zhuǎn)移的胃癌多數(shù)是無法治愈的。對于進展期或復發(fā)性的腫瘤，化療的作用有限，即使聯(lián)用放療也難以達到治愈。因此，尋找潛在的胃癌基因治療靶點，對胃癌的深度和徹底治療尤為重要。NGX6基因位于人基因組的9號染色體[4]，相關(guān)研究表明，NGX6具有明顯的腫瘤抑制作用[5]。那么，NGX6在胃癌的發(fā)生機發(fā)展中是否具有關(guān)鍵的作用，NGX6在胃癌中表達異常的原因是什么，NGX6蛋白表達上調(diào)是否對胃癌具有抑制作用？為了闡明上述問題，筆者將在胃癌細胞株SGC-7901中展開相關(guān)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

人胃癌及其癌旁組織取自解放軍第四五四醫(yī)院，SGC-7901細胞株，293工具細胞株購于中國科學院典型培養(yǎng)物保藏委員會細胞庫，DMEM(Dulbecco minimum essential medium)高糖細胞培養(yǎng)基、0.25 %胰蛋白酶、胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)、Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑購于Invitrogen公司產(chǎn)品，熒光素酶報告基因表達載體(PGL3-promoter)和熒光素酶檢測系統(tǒng)購于Promega公司，RNA提取試劑盒及M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒為大連寶生物功臣有限公司產(chǎn)品，NGX6蛋白一抗及二抗均為美國Santacruz公司產(chǎn)品，細胞及組織總蛋白提取及定量試劑盒、化學發(fā)光試劑盒均為美國Pierce公司產(chǎn)品，miRNA合成、測序均在上海生工工程有限公司完成，MTT(4,5-dimethyl-2-thiazolyl-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide)和二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide ，DMSO)為Sigma公司產(chǎn)品，無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA提取試劑盒為Qiagen公司產(chǎn)品，熒光定量檢測試劑盒、限制性內(nèi)切酶，連接酶均為Takara公司產(chǎn)品。

1.2 儀器和設備

細胞培養(yǎng)箱購于美國Thermo公司，微量移液器、水平離心機、高速低溫離心機均為Eppendorf公司產(chǎn)品，轉(zhuǎn)膜儀、垂直電泳槽及電泳儀為上海天能公司產(chǎn)品，紫外分光光度檢測儀與酶標儀購于Thermo公司，PCR儀為美國ABI公司產(chǎn)品。

1.3 實驗方法

1.3.1 胃癌標本中hsa-miR-759及NGX6蛋白含量檢測 收集賁門癌及其癌旁組織5對，生理鹽水漂洗后經(jīng)濾紙吸干水分，將組織裝入2.0 ml細胞凍存管，編號后液氮保存。實驗前，取出液氮保存的組織樣本，切取約200 mg，加入1 ml Trizol，后進行組織勻漿并將勻漿液4℃下12 000×離心2 min，收集上清，然后酚氯仿法提取組織Total RNA。取2 μg RNA經(jīng)M-MLV反轉(zhuǎn)錄制備cDNA，熒光定量法檢測組織中hsa-miR-759含量。另取相同大小組織，加入1 ml組織裂解液T-MER，經(jīng)充分勻漿后進行組織蛋白提取和定量，實驗過程完全按照試劑盒說明書進行，蛋白提取完成之后，通過免疫印跡法檢測組織中NGX6蛋白相對含量。

1.3.2 生物信息學預測hsa-miR-759與NGX6 3′-UTR結(jié)合位點 采用Targetscan預測軟件對NGX6(NM_016446) 3′-UTR區(qū)與hsa-miR-759進行結(jié)合位點預測，預測結(jié)果顯示(圖2A)，hsa-miR-759在NGX6的3′-UTR區(qū)存在7個堿基的種子區(qū)“5′-CACUCUG-3′”。

1.3.3 載體構(gòu)建 設計合成長鏈DNA，5′-CTAGACCUCCAGCTGTTCCACACTCTGTCCUCCAGCTGTT CCACACTCTGTT-3′，下游引物，5′-CTAGAACAGAGTGTGGAACAGCTGGAGGACAGAGTGTGGAA CAGCTGGAGGT-3′，2端分別添加XbaⅠ酶切位點，片段包含hsa-miR-759與NGX6基因3′UTR區(qū)結(jié)合位點，長鏈退火形成雙鏈DNA，后克隆至熒光素酶報告基因表達載體PGL3-promoter，重組載體命名為野生型熒光素酶報告基因表達載體pGL3-WT-NGX6，同樣的方法，將預測結(jié)合位點進行錯義突變，即由“5′-CACTCTG-3′”突變?yōu)椤?′- TGCTCAC -3′”，構(gòu)建野生型熒光素酶報告基因表達載體pGL3-MT-NGX6。重組載體經(jīng)序列分析無誤后，擴增轉(zhuǎn)化其對應的轉(zhuǎn)化細菌，然后進行無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA制備，提取過程嚴格按照試劑盒說明進行，使用ddH2O將質(zhì)粒DNA終濃度調(diào)整至500 mg/L,-20℃保存。

1.3.4 雙熒光素酶報告基因法驗證has-hsa-miR-759與NGX6靶位關(guān)系 化學法合成hsa-miR-759 mimics(5′- CAGUUUUAACAAACGUGAGACGtt -3′)，hsa-miR-759 inhibitor(5′- CGUCUCACGUUUGUUAAAACUGtt -3′)和hsa-miR-759 NC(5′- AACUUAGGAACGU GUCGACAUAtt -3′),RNA通過3′末端降解。接種對數(shù)期的293細胞至24孔培養(yǎng)板，每孔500 μl細胞懸液(1×105個細胞)，培養(yǎng)基使用含10%FBS的DMEM完全培養(yǎng)基，37℃和5% CO2條件下培養(yǎng)24 h，參照Lipofectmaine 3000轉(zhuǎn)染試劑說明書進行質(zhì)粒和RNA共轉(zhuǎn)染實驗。實驗分為9組：細胞對照組(不做處理)，pGL3-WT-NGX6轉(zhuǎn)染組，pGL3-MT-NGX6轉(zhuǎn)染組, miRNA125-NC+pGL3-WT-NGX6轉(zhuǎn)染組，miRNA125-NC+ pGL3-MT-NGX6轉(zhuǎn)染組, hsa-miR-759-mimics+pGL3-WT- NGX6轉(zhuǎn)染組，hsa-miR-759-mimics+pGL3-MT- NGX6，hsa-miR-759-inhibitor+pGL3-WT- NGX6轉(zhuǎn)染組和hsa-miR-759-inhibitor+pGL3-MT- NGX6轉(zhuǎn)染組。細胞轉(zhuǎn)染后48 h，收集細胞，檢測胞內(nèi)熒光素酶活性。

1.3.5 轉(zhuǎn)染hsa-miR-759-mimics/inhibitor對SGC-7901細胞hsa-miR-759含量及NGX6蛋白表達的影響檢測 接種對數(shù)生長期的SGC-7901細胞至6孔細胞培養(yǎng)板，每孔添加2 mL細胞懸液(5×105個細胞)，使用含10%FBS的DMEM完全培養(yǎng)基，正常條件過夜培養(yǎng)，然后進行轉(zhuǎn)染實驗，轉(zhuǎn)染過程及RNA用量完全參照試劑盒Lipofectmaine 2000說明書。實驗分為4組，細胞對照組，hsa-miR-759 NC轉(zhuǎn)染組，hsa-miR-759 mimics轉(zhuǎn)染組和hsa-miR-759 inhibitor轉(zhuǎn)染組。轉(zhuǎn)染后48 h，收集細胞，提取細胞Total RNA，熒光定量法檢測hsa-miR-759含量，同時，提取細胞總蛋白，免疫印跡法檢測胞內(nèi)NGX6蛋白表達狀況。

1.3.6 SGC-7901細胞增殖活性的檢測 實驗分為4組，細胞對照組、NC轉(zhuǎn)染組、hsa-miR-759 mimics轉(zhuǎn)染組和hsa-miR-759 inhibitor轉(zhuǎn)染組。取轉(zhuǎn)染后48 h的SGC-7901細胞，胰酶消化法制備細胞懸液，離心收集細胞沉淀，用含10 %FBS的DMEM完全培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度至1×105個/ml，并接種細胞到96孔細胞培養(yǎng)板，每孔添加100 μl細胞懸液，37℃和5% CO2條件下培養(yǎng)細胞，在接種后24、48和72 h，MTT法檢測細胞活性。檢測前，每孔細胞加入MTT溶液(5 mg/ml)10 μl，輕晃使其分布均勻，正常條件繼續(xù)培養(yǎng)4 h，去上清，每孔加入150 μl DMSO溶液，37℃放置15 min，酶標儀檢測490 nm波長下細胞液的吸光度值，制作細胞生長曲線。

1.3.7 Realtime-PCR檢測hsa-miR-759含量 取2 μg的細胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄制備cDNA，特異反轉(zhuǎn)錄引物：H.sapiens 6 snRNA: 5′-TACCTTGCGAAGTGCTTAAAC-3′，hsa-miR-759: 5′-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTG GAGTCGGCAATTGCACTGGATACGAGTCAA-3′，取2 μl反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為PCR反應模板，SYBR Premix ExTaq10 μl，引物(10 μmol/L)各取0.25 μl，反應體系用dH2O補足至20 μl。PCR反應條件：95℃ 10 s；55℃ 10 s；72 ℃ 10 s，反應循環(huán)數(shù)為42。PCR引物序列：U6上游引物5′-GTGCTCGCTTCGGC AGCACAT-3′，下游引物5′-TACCTTGCGAAGTGC TTAAAC-3′；hsa-miR-759上游引物5′-GCCGGCGCCCGAGCTCTGGCTC-3′，下游引物5′- GCAGAGTGCAAACAATTTTGAC-3′。結(jié)果分析中，以U6作為對照，ΔΔCt法分析定量結(jié)果。

1.3.8 Western blotting檢測NGX6蛋白相對含量 SDS-聚丙烯酰胺凝膠分離膠濃度為11%，蛋白上樣量為10 μg，然后經(jīng)110 V電壓90 min電泳，400 mA恒定電流轉(zhuǎn)膜90 min，轉(zhuǎn)膜后以5%的脫脂牛奶封閉2 h，4 ℃一抗過夜孵育，NGX6和GAPDH一抗稀釋(TBST)比分別為1︰300和1︰1 000；一抗過夜孵育后，TBST洗膜3次，加入二抗孵育2 h，羊抗鼠二抗稀釋比為1︰2 000；TBST洗膜3次，添加ECL化學發(fā)光液反應底物，曝光X底片，最后對目的條帶光密度值進行分析。

1.4 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)值都用均數(shù)±標準差(x±s)表示。細胞增殖的數(shù)據(jù)通過方差分析和兩兩比較，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義，所有分析均以SPSS 13.0統(tǒng)計軟件完成。

2 結(jié)果

2.1 胃癌標本中hsa-miR-759與NGX6蛋白含量檢測

相比較于癌旁組織，胃癌組織中的hsa-miR-759含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(圖1A)；NGX6蛋白含量檢測結(jié)果(圖2B)顯示，胃癌組織和癌旁組織中蛋白含量分別為(1.00±0.16)和(4.31±0.85)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

注：與腫瘤組織比較aP<0.05。A為miR-759含量，B為NGX6蛋白含量電泳圖和蛋白表達水平圖1 腫瘤標本中hsa-miR-759與NGX6蛋白含量檢測

2.2 hsa-miR-759與NGX6靶位關(guān)系驗證

生物信息學預測顯示，miR-759在NGX6基因3′UTR區(qū)有6個堿基的結(jié)合位點(圖2A)。細胞共轉(zhuǎn)染后48 h，熒光素酶相對活性檢測結(jié)果顯示(圖2B)，hsa-miR-759 mimics能夠明顯抑制野生型熒光素酶表達載體熒光素酶活性，從5.51±0.68降至1.82±0.39，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而hsa-miR-759 inhibitor則能夠增強野生型熒光素酶報告基因表達載體的熒光素酶活性，5.51±0.68上升至10.02±0.49，組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；對于突變型熒光素酶報告基因表達載體，無論hsa-miR-759 mimics或者hsa-miR-759 inhibitor都對其無明顯影響。以上數(shù)據(jù)和結(jié)果說明，hsa-miR-759可以通過預測靶位結(jié)合于NGX6基因3′UTR區(qū)，并對基因表達進行負調(diào)控。

2.3 SGC-7901細胞轉(zhuǎn)染后hsa-miR-759含量及NGX6蛋白表達檢測

SGC-7901細胞轉(zhuǎn)染hsa-miR-759-mimics或者inhibitor后48 h，細胞內(nèi)hsa-miR-759含量明顯升高或者降低(圖3A)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而hsa-miR-759-NC轉(zhuǎn)染組hsa-miR-759含量與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；蛋白含量檢測結(jié)果說明(圖3B)，SGC-7901細胞轉(zhuǎn)染hsa-miR-759-mimics或者inhibitor后48 h，細胞內(nèi)NGX6含量明顯降低或者升高，與細胞對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而hsa-miR-759-NC轉(zhuǎn)染組NGX6蛋白表達與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

注：與對照組比較aP<0.05。A為各組miR-759含量，B為各組NGX6蛋白含量電泳圖和蛋白表達水平圖3 轉(zhuǎn)染后SGC-7901細胞內(nèi)hsa-miR-759及NGX6蛋白含量檢測

2.4 hsa-miR-759含量變化對SGC-7901細胞增殖活性的影響

細胞活性檢測結(jié)果(圖4)所示，轉(zhuǎn)染后48 h和72 h，與轉(zhuǎn)染對照組比較，hsa-miR-759 mimics轉(zhuǎn)染組細胞增殖活性則明顯增強，hsa-miR-759 inhibitor轉(zhuǎn)染組SGC-7901細胞增值活性明顯降低(P<0.05 vs 對照組，相同時間點)，NC轉(zhuǎn)染組細胞增殖活性與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討論

微小RNA(micro RNA, miRNA) 屬于內(nèi)源性非編碼RNA，可以通過種子區(qū)與其靶基因3′-UTR區(qū)結(jié)合，從而抑制基因翻譯[3]。miRNA與腫瘤關(guān)系密切，作為癌基因和腫瘤抑制基因，參與關(guān)鍵的發(fā)病機制[6-7]。miRNA-483-3p和miRNA-21在胰腺導管癌患者血清中的含量明顯升高，miRNA-483-3p可以作為管內(nèi)乳頭狀黏液性腫瘤(IPMN)患者和胰腺導管腺癌的血漿樣品(PDAC)患者的區(qū)分標志物，而miRNA21則可以作為PDAC患者預后標志物[8]。miR-34c被發(fā)現(xiàn)可以對乳腺癌的細胞周期產(chǎn)生調(diào)控作用[9]。前列腺的相關(guān)研究表明，miR-23a的下調(diào)，會導致MAPK、JAK/STAT等腫瘤調(diào)控通路的過度激活，進而導致細胞增殖的失控，體外研究表明，miR-23a有作為胰腺癌基因治療的潛在靶點[10]。這些研究表明，miRNAs調(diào)控機制的失活，是多種腫瘤發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在因素和始作俑者，因此其完全具有成為腫瘤基因治療靶點的可能。miRNA與胃癌亦具有密切的關(guān)系，miR-144-zfx調(diào)控軸在胃癌惡性病變中具有關(guān)鍵作用[11]，miR-107有潛力作為胃癌患者胃癌腫瘤缺氧檢測的生物標志物[12]，而mir-367被證實是胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移的一個關(guān)鍵的負調(diào)控因子[13]。與胃癌相關(guān)的miRNA研究表明，miRNA在胃癌細胞的增殖，分化和凋亡中具有關(guān)鍵作用，是胃癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控因子[13]。

NGX6基因位于染色體9號染色體的q21-22區(qū)域[4]，研究表明在多種腫瘤中存在其等位基因的事實[5]。Guo Q等研究發(fā)現(xiàn)，NGX6與胃癌的發(fā)病率和死亡率密切相關(guān)，NGX6可以作為種新型的腫瘤抑制基因，過表達基因可以抑制人體胃癌細胞株HT-29的侵襲，NGX6的這種腫瘤抑制作用可能與Wnt通路的激活抑制有關(guān)[14-15]。NGX6具有多種生物學功能，如調(diào)節(jié)相關(guān)基因的蛋白表達，涉及細胞信號轉(zhuǎn)導通路，負調(diào)控細胞周期，抑制血管生成，增加患者對抗癌藥物的敏感性。有研究表明，NGX6通過組蛋白H3K9負調(diào)控核轉(zhuǎn)錄因子SP1的啟動子甲基化，進而影響其作為轉(zhuǎn)錄因子的功能，NGX6可以作為惡性腫瘤的潛在靶基因，具有極大的應用研究價值[16-17]。

在胃癌組織中驗證NGX6的表達，數(shù)據(jù)顯示NGX6在胃癌組織中的表達量明顯低于癌旁組織，對胃癌組織中NGX6蛋白低表達的原因做了研究，生物信息學顯示，hsa-miR-759可能靶向調(diào)控NGX6，那么在胃癌中hsa-miR-759的表達情況是否也具有異常呢。熒光定量檢測結(jié)果顯示，胃癌組織中hsa-miR-759的含量顯著高于癌旁組織，hsa-miR-759 與NGX6在胃癌中的表達具有顯著的負相關(guān)性。那么hsa-miR-759在胃癌中的高表達是否導致NGX6表達降低，是否是胃癌的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵因素，無疑是一個值得研究的課題。

Hsa-miR-759定位于人13號染色體，截止目前，未見有關(guān)于其與腫瘤或者胃癌的相關(guān)報道。首先對hsa-miR-759與NGX6蛋白表達相關(guān)性做出分析，在二者具有顯著負相關(guān)性的基礎(chǔ)上，通過生物信息學對二者結(jié)合位點做了分析，并通過熒光素酶報告基因?qū)嶒炦M行了驗證。hsa-miR-759在胃癌中的高表達導致了腫瘤組織內(nèi)NGX6表達的顯著降低，通過基因干預的方式，改變了細胞內(nèi)hsa-miR-759的含量，并且對SGC-7901細胞的增殖活性產(chǎn)生了明顯影響，這組數(shù)據(jù)是令人鼓舞的，通過轉(zhuǎn)染miR-759-inhibitor到SGC-7901細胞，明顯抑制了細胞內(nèi)hsa-miR-759相對含量，增強了細胞內(nèi)NGX6蛋白含量，同時抑制了腫瘤細胞的增殖活性。所有數(shù)據(jù)說明，miR-759-inhibitor通過抑制SGC-7901細胞內(nèi)hsa-miR-759，增強了靶蛋白NGX6表達，而高表達的NGX6則明顯抑制了SGC-7901細胞的增殖活性。

本研究的意義在于，首次證實hsa-miR-759-inhibitor可以抑制胃癌細胞SGC-7901的增殖活性，且這種作用是通過上調(diào)其靶蛋白NGX6來實現(xiàn)的。這提示，hsa-miR-759有潛力成為基因治療的新靶點。

[1] Ferlay J, Shin HR, Bray F, et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008[J]. GLOBOCAN 2008, Int J Cancer, 2010,127(12):2893-2917.DOI:10.1002/ijc.25516.

[2] Haruta H, Hosoya Y, Sakuma K, et al. Clinicopathological study of lymph-node metastasis in 1,389 patients with early gastric cancer: assessment of indications for endoscopic resection[J]. J Dig Dis, 2008,9(4):213-218.DOI:10.1111/j.1751-2980.2008.00349.

[3] Sakuramoto S, Sasako M, Yamaguchi T, et al. Adjuvant chemotherapy for gastric cancer with S-1, an oral fluoropyrimidine[J]. N Engl J Med, 2007,357(18):1810-1820.DOI:10.1056/NEJMoao72252.

[4] Jianbo Y, Bin LH, Li ZH, et al. Refined localization and cloning of a novel putative tumor suppressor gene associated with nasopharyngeal carcinoma on chromosome 9p21-22[J]. Chin J Cancer, 2000,(19):6-9.

[5] Yang J, Tang X, Deng L.Detailed deletion mapping of chromosome 9p21-22 in nasopharyngeal carcinoma[J]. 中華腫瘤雜志, 1999，21(6):419-421.

[6] Abba M, Mudduluru G, Allgayer H. MicroRNAs in cancer: small molecules, big chances[J]. Anticancer Agents Med Chem，2012，12(7):733-743.DOI:10.2174/187152012802650273.

[7] Adams BD, Kasinski AL, Slack FJ. Aberrant regulation and function of microRNAs in cancer[J]. Curr Biol，2014，24(16):R762-776.DOI:org/10.1016/j.cub.2014.06.043.

[8] Abue M, Yokoyama M, Shibuya R, et al. Circulating miR-483-3p and miR-21 is highly expressed in plasma of pancreatic cancer[J]. Int J Oncol, 2015,46(2):539-547.DOI:10.3892/ijo.2014.2743.

[9] Achari C, Winslow S, Ceder Y, et al. Expression of miR-34c induces G2/M cell cycle arrest in breast cancer cells[J]. BMC Cancer, 2014,14:538.DOI:10.1186/1471-2407-14-538.

[10] Aghaee-Bakhtiari SH, Arefian E, Naderi M, et al. MAPK and JAK/STAT pathways targeted by miR-23a and miR-23b in prostate cancer: computational and in vitro approaches[J]. Tumour Biol, 2015,36(6):4203-4212.DOI:10.1007/s13277-015-3057-3.

[11] Akiyoshi S, Fukagawa T, Ueo H, et al. Clinical significance of miR-144-ZFX axis in disseminated tumour cells in bone marrow in gastric cancer cases[J]. Br J Cancer, 2012,107(8):1345-1353.DOI:10.1038/bjc.2012.326.

[12] Ayremlou N, Mozdarani H, Mowla SJ, et al. Increased levels of serum and tissue miR-107 in human gastric cancer: Correlation with tumor hypoxia[J]. Cancer Biomark, 2015,15(6):851-860.DOI:10.3233/CBM-150529.

[13] Bin Z, Dedong H, Xiangjie F, et al. The microRNA-367 inhibits the invasion and metastasis of gastric cancer by directly repressing Rab23[J]. Genet Test Mol Biomarkers, 2015,19(2):69-74.DOI:10.3748/wjg.5411.

[14] Li PF, Chen SC, Xia T, et al. Non-coding RNAs and gastric cancer[J]. World J Gastroenterol, 2014,20(18):5411-5419.DOI:10.3748/wig.u20.i18.5411.

[15] Guo Q, Shen S, Liao M, et al. NGX6 inhibits cell invasion and adhesion through suppression of Wnt/beta-catenin signal pathway in colon cancer[J]. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai), 2010,42(7):450-456.DOI:10.1093/abbs/gmq049.

[16] He S, Zhong Y, Shuai C, et al. Tumor suppressor NGX6 inhibits the growth and metastasis of multiple cancers[J]. Tumour Biol, 2016,37(5):5751-5760.DOI:10.1007/s13277-016-4966-5.

[17] Li J, Tan C, Xiang Q, et al. Proteomic detection of changes in protein synthesis induced by NGX6 transfected in human nasopharyngeal carcinoma cells[J]. J Protein Chem, 2001,20(3):265-271.DOI:10.1023/A:1010912311564.

(本文編輯：張陣陣)

210002 南京，解放軍第四五四醫(yī)院普外科(儲著凌、侯樂偉、胡國強、胡君、尹鵬)，消化科(朱清)

朱清，電子信箱：luyican321@163.com

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10.3969/j.issn.1009-0754.2016.06.021

2015-12-24)