衛(wèi)秀余，魏 星

（1.上海市奉賢區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201400；2.上海星侃生物技術(shù)公司，上海 201404）

檢測(cè)新技術(shù)

近幾年檢測(cè)新技術(shù)在豬病診斷上的應(yīng)用

衛(wèi)秀余1，魏 星2

（1.上海市奉賢區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201400；2.上海星侃生物技術(shù)公司，上海 201404）

隨著養(yǎng)豬規(guī)模的不斷擴(kuò)大，對(duì)豬場(chǎng)疫病防控的要求也在不斷提高；因?yàn)樵诖笮拓i場(chǎng)一旦發(fā)生某種疫病，從確診采取正確的防控措施到恢復(fù)正常生產(chǎn)，往往需要3～6個(gè)月的周期甚至更長(zhǎng)。由此將影響豬場(chǎng)至少6個(gè)月以上的生產(chǎn)水平，經(jīng)濟(jì)損失巨大。

因此規(guī)模豬場(chǎng)迫切需要一些疫情早期預(yù)警、免疫效果精準(zhǔn)評(píng)估的檢測(cè)技術(shù)；現(xiàn)將我們實(shí)驗(yàn)室近幾年引進(jìn)和創(chuàng)建的檢測(cè)新技術(shù)在豬場(chǎng)的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)介紹如下，供大家參考。

1 口腔液樣品檢測(cè)抗原和抗體技術(shù)

基于口腔液中除了腺體分泌物外，還包含著黏膜細(xì)胞脫落物；所以其中不但含有機(jī)體免疫或感染產(chǎn)生的抗體，還存在著感染時(shí)隨細(xì)胞脫落的各種病原體。

由于公豬的兇猛，采集血液樣品比較困難，因此豬場(chǎng)公豬的免疫抗體檢測(cè)普遍會(huì)遺漏；一些豬場(chǎng)豬藍(lán)耳病、偽狂犬病的流行就是由于對(duì)公豬的監(jiān)測(cè)不到位，使公豬成了非常重要的傳染源。

目前通過口腔液可以檢測(cè)到的抗原有：豬藍(lán)耳病毒、偽狂犬病毒、圓環(huán)病毒等；可以檢測(cè)的抗體有：豬瘟、豬藍(lán)耳病、偽狂犬、圓環(huán)病毒和口蹄疫等。

口腔液的采集非常簡(jiǎn)便：在豬群喂料前1～2 h，在豬欄上懸掛白色棉紗繩、高度以豬站立時(shí)可以咬到為宜，讓豬自由咀嚼棉紗繩20～30 min后把棉紗繩中的口腔液擠入保鮮袋中、再轉(zhuǎn)入離心管中備用。

2 血清樣品中檢測(cè)霉菌毒素技術(shù)

由于豬場(chǎng)的飼料一般5～7 d更換一批原料，而每批原料都存在一定的質(zhì)量差異，因此通過飼料樣品中檢測(cè)霉菌毒素來(lái)診斷豬群的霉菌毒素中毒時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)誤差。

而直接從疑似中毒豬群的血清樣品中檢測(cè)相關(guān)的霉菌毒素含量，就可以作為診斷依據(jù)；并且通過這一檢測(cè)技術(shù)還可以用于霉菌毒素吸附劑吸附能力的評(píng)估。我們?cè)谔砑幽撤N霉菌毒素吸附劑前和添加吸附劑后14 d分別采集豬群血清樣品，根據(jù)添加霉菌毒素吸附劑前后豬群血清中特定霉菌毒素含量的變化，可以判斷出飼料中該霉菌毒素是否被吸附劑吸附（如果吸附了，血清中該霉菌毒素的含量就會(huì)顯著下降）。

目前從血清樣品中可以檢測(cè)的霉菌毒素有：黃曲霉毒素、嘔吐毒素、煙曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素等。

3 臍帶血樣品中檢測(cè)抗原技術(shù)

要診斷某種病原是否會(huì)發(fā)生垂直傳播，以前主要通過對(duì)流產(chǎn)胎兒或新生未哺乳仔豬內(nèi)臟的檢測(cè)來(lái)證實(shí)；不易采樣且成本較高，所以在臨床上應(yīng)用較少。而根據(jù)一些實(shí)驗(yàn)研究，豬藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒、偽狂犬和豬瘟等病原體都可能通過懷孕母豬傳染給胎兒；繼而造成這些病原體在豬群中持續(xù)不斷的流行和造成受感染仔豬的免疫抑制。

我們現(xiàn)在可以通過對(duì)臍帶血中某種病原體的檢出率來(lái)評(píng)估該豬群是否發(fā)生了該疫病的垂直傳染，從而為制定該疫病的綜合防控方案提供科學(xué)依據(jù)；但是，臍帶血檢測(cè)只能證實(shí)某種疫病在該豬場(chǎng)是否存在垂直傳播，所以不能把它夸大為防控傳染病的主要診斷手段。

4 免疫抗體精準(zhǔn)評(píng)估技術(shù)

仔豬從母體獲得某種疫病的免疫或野毒感染抗體，其持續(xù)時(shí)間都是有一定規(guī)律的。我們根據(jù)這些母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，就可以找到檢測(cè)某種疫病免疫抗體的最佳日齡節(jié)點(diǎn)。

大量的檢測(cè)數(shù)據(jù)證實(shí)豬藍(lán)耳病的母源抗體（母豬免疫或野毒感染）一般維持到25～30日齡左右，而豬藍(lán)耳病弱毒疫苗接種后其ELISA抗體在7～10 d左右即可檢測(cè)到；根據(jù)大部分豬場(chǎng)仔豬藍(lán)耳病的免疫日齡在2～3周左右，我們選擇5～6周齡這個(gè)日齡節(jié)點(diǎn)、隨機(jī)采血檢測(cè)豬藍(lán)耳病ELISA抗體，就可以避開母源抗體對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響、早期評(píng)估該豬群的豬藍(lán)耳病免疫是否成功。

雖然大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證實(shí)豬藍(lán)耳病ELISA抗體與真實(shí)的免疫保護(hù)力之間幾乎沒有相關(guān)性，但是疫苗或野毒感染后7～10 d即可檢測(cè)到ELISA抗體同樣得到了大家公認(rèn)；因此我們認(rèn)為通過檢測(cè)豬藍(lán)耳病的ELISA抗體至少可以證實(shí)疫苗毒是否感染成功，間接地反映了免疫效果。

同樣的原理，我們選擇8～9周齡仔豬檢測(cè)圓環(huán)病毒2型ELISA抗體，可以進(jìn)行圓環(huán)病毒疫苗免疫是否成功的早期評(píng)估；并且可以作為選擇圓環(huán)病毒2型疫苗的重要依據(jù)。

5 豬藍(lán)耳病的診斷標(biāo)準(zhǔn)

經(jīng)常遇到豬場(chǎng)把保育仔豬出現(xiàn)的呼吸困難、毛色粗亂等癥狀簡(jiǎn)單地歸類于豬藍(lán)耳病，造成頻繁更換豬藍(lán)耳病疫苗和免疫程序，結(jié)果豬病依舊。

由于豬藍(lán)耳病病毒在康復(fù)豬體內(nèi)可以長(zhǎng)期存在，最長(zhǎng)可達(dá)175 d；部分豬藍(lán)耳病弱毒苗免疫后同樣可以維持較長(zhǎng)時(shí)間的病毒血癥。因此單純把病豬樣品中檢測(cè)到豬藍(lán)耳病抗原作為診斷依據(jù)，往往就會(huì)出現(xiàn)誤診！

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示，豬藍(lán)耳病發(fā)病豬都會(huì)出現(xiàn)肺彌漫性實(shí)變的病理變化；所以我們認(rèn)為要確診豬群是否正在發(fā)生豬藍(lán)耳病，不能簡(jiǎn)單地根據(jù)抗原檢測(cè)結(jié)果就作出診斷、必須要結(jié)合典型的臨床癥狀和病理變化（肺出現(xiàn)彌漫性實(shí)變），三者同時(shí)具備才能確診。目前有關(guān)豬藍(lán)耳病防控上出現(xiàn)的困惑和爭(zhēng)議都是由于診斷上存在的誤區(qū)造成的！

2017-04-29）