張玉玲， 孔 杰， 梁萌青， 羅 坤??， 欒 生， 曹寶祥(1.中國海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院，山東 青島 266003；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071；3.青島海洋科學(xué)與技術(shù)國家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071)

飼料中添加南極磷蝦粉對營養(yǎng)強(qiáng)化階段凡納濱對蝦親蝦產(chǎn)卵的影響?

為探討飼料中添加一定比例的南極磷蝦粉(Antarctic krill meal)在凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)親蝦營養(yǎng)強(qiáng)化期間的作用，以篩選出在親蝦營養(yǎng)強(qiáng)化期間適合的人工配合飼料。用3種比例不同的磷蝦粉人工配合飼料(0、10%和20%，對應(yīng)的編號為K0、K10和K20)和沙蠶(對照組)分別對凡納濱對蝦進(jìn)行60天的營養(yǎng)強(qiáng)化。營養(yǎng)強(qiáng)化后對每個處理組的雌性親蝦進(jìn)行單側(cè)眼柄摘除手術(shù)，親蝦進(jìn)入繁殖產(chǎn)卵階段，通過人工授精操作使親蝦交配、產(chǎn)卵，收集產(chǎn)卵相關(guān)數(shù)據(jù)。研究表明，K10和K20組的親蝦產(chǎn)卵量、受精卵孵化率和無節(jié)幼體變態(tài)率與對照組無顯著差異(P>0.05)；K20組的親蝦產(chǎn)卵率、多次產(chǎn)卵率和卵徑大小顯著高于對照組(P<0.05)，K10組的親蝦產(chǎn)卵率顯著高于對照組(P<0.05)。脂肪酸組成分析表明，K10和K20組與沙蠶組的多不飽和脂肪酸組成相同(包括C20:5n-3、C22:6n-3、C20:4n-6等)；各處理組的卵脂肪酸組成與飼料的脂肪酸組成在一定程度上正相關(guān)。研究結(jié)果表明，添加10%～20%南極磷蝦粉的人工配合飼料可作為凡納濱對蝦親蝦營養(yǎng)強(qiáng)化期間的餌料。

凡納濱對蝦親蝦；人工配合飼料；南極磷蝦粉；營養(yǎng)強(qiáng)化；卵質(zhì)；脂肪酸組成

凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)屬開放式納精囊對蝦養(yǎng)殖品種，具有生長迅速、抗病力強(qiáng)、繁殖季節(jié)長等優(yōu)點(diǎn)，與中國對蝦(Fenneropenaeuschinensis)、斑節(jié)對蝦(Penaeusmonodon)并列為三大經(jīng)濟(jì)蝦類[1]。生產(chǎn)上，凡納濱對蝦親蝦的繁殖培育包括兩個階段：第一個階段是在摘除雌性親蝦單側(cè)眼柄前的營養(yǎng)強(qiáng)化階段，一般持續(xù)的時間為兩個月左右，此階段，凡納濱對蝦體內(nèi)會積累大量的營養(yǎng)物質(zhì)用于性腺發(fā)育；第二階段是摘除雌性親蝦單側(cè)眼柄后的繁殖產(chǎn)卵階段。目前，親蝦的繁殖培育過程中，從營養(yǎng)強(qiáng)化階段到繁殖產(chǎn)卵階段一直投喂生物餌料，包括鮮活沙蠶(Nereididae)、冰凍的牡蠣(Ostrea)、魷魚(Loliginidae)等，這些生物餌料營養(yǎng)價值高，能夠有效促進(jìn)親蝦的性腺發(fā)育[2]。但在使用過程中，這些生物餌料也出現(xiàn)越來越多的弊端。例如，攜帶對蝦致病源[3]、產(chǎn)量和質(zhì)量隨氣候變化波動大、價格昂貴、投喂量大等。隨著對蝦養(yǎng)殖業(yè)的不斷擴(kuò)增，研究生產(chǎn)出營養(yǎng)搭配合理、能夠有效促進(jìn)親蝦性腺發(fā)育的人工配合飼料具有重大的實(shí)際意義。目前市場上雖已有商品化的親蝦配合飼料，但效果不理想，不能完全取代鮮活餌料。本實(shí)驗(yàn)考慮到這方面的現(xiàn)實(shí)問題，首先選取親蝦培育過程中的第一階段，即營養(yǎng)強(qiáng)化階段進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

南極磷蝦粉具有較高的營養(yǎng)價值，目前越來越多的飼料研究選擇其作為飼料原料[4]，粗蛋白含量約為59.4%～62.3%[5]，粗脂肪含量約為9.3%～15.1%[6]；并且氨基酸組成適宜，多不飽和脂肪酸含量豐富[7]。樓喬明等[8]研究南極磷蝦粉脂肪酸組成時發(fā)現(xiàn)其ΣPUFA含量占總脂肪酸含量的47.98%，其中，EPA和DHA含量高達(dá)21.42%和19.22%；并且，不飽和脂肪酸中以n-3系列脂肪酸為主，占45.41%，n-6系列脂肪酸的含量僅為2.24%。

本試驗(yàn)參考親蝦繁殖期間的營養(yǎng)研究結(jié)果并結(jié)合親蝦天然餌料的營養(yǎng)組成，設(shè)計(jì)了3組磷蝦粉比例不同的人工配合飼料(磷蝦粉含量分別為0，10%和20%，相應(yīng)的飼料編號為K0、K10和K20)，并以沙蠶為對照組，對凡納濱對蝦親蝦進(jìn)行為期60天的營養(yǎng)強(qiáng)化培養(yǎng)，比較研究了配合飼料與沙蠶的脂肪酸組成以及營養(yǎng)強(qiáng)化期間的營養(yǎng)積累對凡納濱對蝦親蝦繁殖效果的影響，旨在為開發(fā)優(yōu)質(zhì)的親蝦人工配合飼料提供有價值的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 親蝦來源 試驗(yàn)所用的凡納濱對蝦親蝦來源于河北省鑫海水產(chǎn)生物技術(shù)有限公司，12月齡，前期無營養(yǎng)強(qiáng)化處理。試驗(yàn)之初，雌蝦平均體長(13.11±0.85) cm，平均體重(34.63±4.71) g，無性腺發(fā)育情況；雄蝦平均體長(12.08±0.74) cm，平均體重(29.83±4.14) g。

1.1.2 人工配合飼料 試驗(yàn)飼料配方組成及常規(guī)營養(yǎng)成分含量見表1。所有原料粉碎后過60目篩，采用逐級放大的方法混勻后加水?dāng)嚢?，進(jìn)制粒機(jī)壓制成規(guī)格為1.5 mm×3.0 mm的親蝦飼料。烘干后，儲存于陰涼避光處保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 養(yǎng)殖用水 試驗(yàn)用水取自渤海灣，經(jīng)沉淀、沙濾、消毒后使用，營養(yǎng)強(qiáng)化期間的水溫維持在27～28 ℃、鹽度28～33、pH8.0～8.5、溶氧>5 mg/L、總氨氮<0.5 mg/L、亞硝酸鹽<0.1 mg/L、水深50～60 cm。

繁殖產(chǎn)卵期間，產(chǎn)卵孵化用水在正常海水處理基礎(chǔ)之上，需要加入10 mg/L的EDTA和0.5 mg/L聚維酮碘液以絡(luò)合水體中的重金屬離子及對水體進(jìn)行消毒處理。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)分4個處理組，每個處理組兩個平行，各平行組有40尾蝦，雌雄比例1：1；分別投喂飼料K0、飼料K10、飼料K20和沙蠶(沙蠶采用活體投喂，投喂前用濃度為50 mg/L的高錳酸鉀溶液浸泡2～3 min后清水洗凈)。試驗(yàn)開始時，在每尾親蝦的一側(cè)眼柄上套上眼標(biāo)，以區(qū)分個體。營養(yǎng)強(qiáng)化結(jié)束后，對全部的雌親蝦采用鑷燙法進(jìn)行單側(cè)眼柄摘除手術(shù)。鑒于目前國內(nèi)外仍沒有可完全替代鮮活餌料的人工配合飼料[9]，術(shù)后，全部處理組均改投喂鮮活沙蠶，采用人工授精的方法，采集繁殖和幼體發(fā)育數(shù)據(jù)。

注：復(fù)合維生素(mg/kg or g/kg飼料)：硫胺素，25mg；核黃素，45mg；鹽酸吡哆醇，20mg；維生素B12，0.1mg；維生素K3，10mg；肌醇，800mg；泛酸，60mg；煙酸，200mg；葉酸，20mg；生物素，1.20mg；維生素A，32mg；維生素D，5mg；維生素E，120mg；次粉18.67 g。復(fù)合礦物質(zhì)(mg/kg or g/kg飼料)：氟化鈉，2mg；碘化鉀，0.8mg；氯化鈷，50mg；硫酸銅，10mg；硫酸鐵，80mg；硫酸鋅，50mg；硫酸鎂，1200mg；磷酸二氫鈣，3000mg；氯化納，100mg；沸石粉，15.51g。粗蛋白、粗脂肪、灰分以干物質(zhì)含量計(jì)算(水分除外)。

Note: Vitamin premix(mg/kg or g/kg diet):thiamine 25mg,riboflavin 45mg,pyridoxine 20mg,vitamin B120.1mg,menadione 10mg,inositol 800mg,pantothenate 60mg,tocopherol acetate 200mg,folic acid 20mg,biotin 1.2mg,vitamin A 32mg,vitamin D 5mg,vitamin E 120 mg,wheat flour 18.67g. Mineral premix(mg/kg or g/kg)diet: NaF 2mg;KI 0.8mg;CoCl2·6H2O 50mg;CuSO4·5H2O 10mg;FeSO4·7H2O 80g;ZnSO4·7H2O 50mg;MnSO4·4H2O 1200mg; Ca(H2PO4)2·H2O 3000g;NaCl 100g;Mordenzeo15.51g. The percentage compositions of crude protein,crude fat and ash are the dry matter content(without the moisture).

本試驗(yàn)中，經(jīng)過60天的營養(yǎng)強(qiáng)化培養(yǎng)后，雌性親蝦在10月13日接受單側(cè)眼柄摘除手術(shù)，術(shù)后的第一天即10月14日，4個處理組均有性腺發(fā)育完全的雌性親蝦，即各處理組雌性親蝦性腺發(fā)育完全同步?？紤]到剛剪眼柄，性腺發(fā)育可能不穩(wěn)定，14日當(dāng)天沒有進(jìn)行人工授精操作，人工授精是從10月15日一直持續(xù)到11月7日，共計(jì)24天。

1.3 樣品采集及分析方法

人工授精后，統(tǒng)計(jì)各處理組產(chǎn)卵量、受精卵孵化率及無節(jié)幼體變態(tài)率；計(jì)算各處理組的雌性親蝦產(chǎn)卵率、多次產(chǎn)卵率、平均產(chǎn)卵次數(shù)。從每個處理組的前10次產(chǎn)卵中各取50粒左右受精卵，保存在濃度為4%的甲醛溶液中，用于測量受精卵的卵徑；同時從每個處理組的前10次產(chǎn)卵中，每次收集大約0.2 g的受精卵保存在液氮中，用于卵脂肪酸測量。其中，

雌性親蝦產(chǎn)卵率=產(chǎn)卵的雌性親蝦數(shù)量/受精產(chǎn)卵期間存活的雌性親蝦總數(shù)量×100%；

多次產(chǎn)卵率=多次(兩次及以上)產(chǎn)卵的雌性親蝦數(shù)量/產(chǎn)卵的雌性親蝦數(shù)量×100%；

平均產(chǎn)卵次數(shù)=受精產(chǎn)卵期間各平行組總產(chǎn)卵次數(shù)/產(chǎn)卵的雌性親蝦數(shù)量；

卵徑=(長徑+短徑)/2。

飼料常規(guī)成分分析：干物質(zhì)含量的測定參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 6435-1986，飼料樣品在105 ℃下烘干至恒重，采用失重法測定干物質(zhì)含量；粗蛋白含量測定參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 6432-1994采用凱式定氮法，用意大利VELP半自動凱氏定氮儀——UDK129測定；粗脂肪含量測定參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 6433-1994，以石油醚為抽提液，用丹麥FOSS脂肪測定儀SOXTEC 2050測定；灰分的測定參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T6438-1992，在550℃馬福爐中灼燒至恒重后測定。

飼料和受精卵中的脂肪酸含量測定參考 Mourente等[10]，采用氣相色譜法(GS，HP6890，USA)，各種脂肪酸的定性采用與標(biāo)準(zhǔn)樣品保留時間比較的方法，定量采用面積歸一化法計(jì)算。

利用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行ANOVA單因素分析和Duncan's多重比較(P<0.05)分析。

2 結(jié)果

2.1 各處理組產(chǎn)卵量、受精卵孵化率和無節(jié)幼體變態(tài)率

不同處理組的親蝦產(chǎn)卵繁殖情況如表2所示，從表中可以看出，對照組的產(chǎn)卵量最大，顯著高于K0組(P<0.05)，但與K10、K20組不存在顯著性差異(P>0.05)，K10與K20組比較，K20組的產(chǎn)卵量顯著高于K10組(P<0.05)。

4個處理組的受精卵孵化率在45.02%～49.26%之間，其中對照組最高，但各處理之間不存在顯著差異(P>0.05)。無節(jié)幼體變態(tài)率在對照組最高，顯著高于K0組(P<0.05)，但與K10和K20組差異不顯著(P>0.05)。

注：不同的上標(biāo)字母代表差異顯著(P<0.05)，下同。

Note: Different superscript letters mean significant difference(P<0.05).The same as the following.

2.2 各處理組產(chǎn)卵率、多次產(chǎn)卵率和平均產(chǎn)卵次數(shù)

雌性親蝦產(chǎn)卵率、多次產(chǎn)卵率和平均產(chǎn)卵次數(shù)如表3所示，從表中可以看出，K0組、K10組、K20組3組親蝦的產(chǎn)卵率不存在顯著差異(P>0.05)，且均顯著高于對照組(P<0.05)。K20組的多次產(chǎn)卵率最大，達(dá)(55.00±7.07)%，顯著高于對照組(P<0.05)，其余各組間差異不顯著(P>0.05)。

平均產(chǎn)卵次數(shù)在K20組最大，為2.00±0.28，顯著高于對照組和K0組(P<0.05)，與K10組差異不顯著(P>0.05)，K0組、K10組與對照組相比也未產(chǎn)生顯著性差異(P>0.05)。

2.3 各處理組受精卵卵徑大小

各處理組受精卵卵徑測量結(jié)果如表4所示。從表中可以看出，卵徑最大的是K20組，為(267.84±7.19) μm，顯著高于對照組和K0組(P<0.05)，但K0、K10與對照組之間未產(chǎn)生顯著性差異(P>0.05)。

2.4 不同配方飼料及沙蠶體內(nèi)的脂肪酸組成

3組人工配合飼料及沙蠶的脂肪酸組成測量結(jié)果如表5所示。從表中可以看出，總多不飽和脂肪酸(ΣPUFA)含量在沙蠶體內(nèi)最高，為(46.68±0.68)%；飼料K10和飼料K20的ΣPUFA分別為(37.31±1.13)%和(38.23±0.15)%，飼料K0的含量最低，僅為(28.94±0.60)%，單因素方差分析表明，飼料K10與飼料K20差異不顯著(P>0.05)，其余各組差異顯著(P<0.05)。EPA(C20:5n-3)、DHA(C22:6n-3)和AA(C20:4n-6)含量在沙蠶體內(nèi)的含量均高于3組人工配合飼料，但飼料K10和飼料K20的EPA、DHA和AA含量與沙蠶更接近。

n-6和n-3系列PUFA的含量均在沙蠶體內(nèi)最高，分別為(13.63±0.01)%和(33.05±0.67)%，且均顯著高于其余各組(P<0.05)。但，Cn-3/Cn-6數(shù)值K20最大，為(3.17±0.02)，顯著高于K10、沙蠶和K0(P<0.05)。

續(xù)表5

注：脂肪酸含量以各脂肪酸甲酯占總脂肪酸甲酯的比例表示。下同。

Note: Ratios of fatty acid methyl ester to total fatty acid methyl esters.The same as the following.

2.5 各處理組受精卵脂肪酸組成

各處理組受精卵脂肪酸組成如表6所示。凡納濱對蝦卵中的主要飽和脂肪酸是軟脂酸(C16:0)，主要單不飽和脂肪酸是油酸(C18:1n-9)和棕櫚油酸(C16:1n-7)。對照組卵中的ΣPUFA含量最高，為(24.59±1.18)%，其次是K10組，(23.62±0.48)%，2組之間差異不顯著(P>0.05)；K20組ΣPUFA為(22.93±1.01)%，與K10組間不存在顯著性差異(P>0.05)，K0組ΣPUFA含量最低，為(19.14±0.07)%，與其余3組差異顯著(P<0.05)。對照組卵中EPA含量最高，為(9.16±1.03)%，K10組、K20組中的含量分別為(8.37±0.02)%、(8.88±0.04)%，3組間不存在顯著差異(P>0.05)；K0組的EPA含量為(7.60±0.38)%，與對照組差異性顯著(P<0.05)。AA含量在對照組受精卵里的含量低于K10組和K20組，但高于K0組，K20組含量最高，為(1.48±0.28)%。DHA含量在K0組的受精卵中含量最低，并且與其余3組存在顯著差(P<0.05)，K10組、K20組和對照組之間差異不顯著(P>0.05)。4個處理組中Cn-3/Cn-6比值介于(1.21±0.14)～(1.36±0.25)之間，4組間不存在顯著差(P>0.05)，K20組最大，為1.36±0.25，K10組次之。

3 討論

3.1 不同南極磷蝦粉配比飼料進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化對親蝦產(chǎn)卵量、孵化率和無節(jié)幼體變態(tài)率的影響 Palaeios等[11]研究表明，在一定飼料蛋白含量之內(nèi)，凡納濱對蝦親蝦的產(chǎn)卵量與飼料蛋白含量正相關(guān)，本試驗(yàn)的結(jié)果與此基本一致。南極磷蝦粉中蛋白含量較高，約為64.44%[12]，未添加南極磷蝦粉的飼料K0比添加了南極磷蝦粉的飼料K10、飼料K20蛋白含量低，僅為(48.64±0.27)%，K0組的產(chǎn)卵量在3組中也最低，為(18.06±0.68)萬；飼料K10和飼料K20的蛋白含量分別為(51.62±0.14)%和(52.26±0.02)%，其產(chǎn)卵量分別為(22.53±0.70)萬和(21.74±2.86)萬；沙蠶的平均粗蛋白含量為58.65%[13]，其產(chǎn)卵量在4個處理組間也是最高的，達(dá)(23.45±0.63)萬。Wouters等[14]的研究結(jié)果表明，性腺發(fā)育期間的凡納濱對蝦親蝦需從餌料中攝食大量的營養(yǎng)物質(zhì)用于性腺發(fā)育和成熟，性腺指數(shù)在此期間急劇增長，甚至能在3天內(nèi)增加8倍。凡納濱對蝦親蝦產(chǎn)卵次數(shù)多、性腺再次發(fā)育速度快，更需要充足的、營養(yǎng)豐富的餌料。

脂類對受精卵的正常孵化與變態(tài)極為重要。Lytle等[15]研究表明，幼體在開口前無外源性營養(yǎng)的攝入，只能依靠受精卵中已有的脂肪作為能源來實(shí)現(xiàn)受精卵的孵化以及無節(jié)幼體的變態(tài)。Wouters等[16]研究發(fā)現(xiàn)，受精卵中的脂肪是由親蝦性腺發(fā)育過程中的餌料所提供，因此，提供營養(yǎng)豐富的餌料有利于受精卵質(zhì)量的提高，并且能夠促進(jìn)無節(jié)幼體成活率。加工之后的南極磷蝦粉其粗脂肪含量約為(9.3～15.1)%[6]，本試驗(yàn)中，飼料K10和飼料K20其粗脂肪含量分別為(16.69±0.22)%和(16.59±0.31)%，略高于飼料K0粗脂肪含量(15.06±0.37)%，3組的受精卵孵化率維持在(45.02±1.20)%～(48.97±3.66)%之間。沙蠶體內(nèi)的粗脂肪含量為7.48%[13]，小于3組配合飼料中的粗脂肪含量，但對照組的孵化率為(49.26±0.82)%。可能的解釋有兩點(diǎn)：一是沙蠶體內(nèi)的粗脂肪含量已經(jīng)達(dá)到凡納濱對蝦親蝦產(chǎn)卵孵化期間的脂肪需求量；二是沙蠶體內(nèi)的粗脂肪含量雖然較人工配合飼料低，但其脂肪酸組成合理，有效促進(jìn)親蝦受精卵孵化的脂肪酸含量高。另外，K10組、K20組的變態(tài)率與對照組的變態(tài)率也沒有顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果說明，用飼料K10和飼料K20進(jìn)行前期營養(yǎng)強(qiáng)化的凡納濱對蝦親蝦，在繁殖產(chǎn)卵期間可以基本滿足受精卵孵化與無節(jié)幼體變態(tài)的需求。

3.2 不同南極磷蝦粉配比飼料進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化對親蝦產(chǎn)卵率、多次產(chǎn)卵率和平均產(chǎn)卵次數(shù)的影響 雌性親蝦產(chǎn)卵率指產(chǎn)卵雌性親蝦數(shù)量占總雌性親蝦數(shù)量的比例，反映出雌性親蝦的性腺成熟能力；而多次產(chǎn)卵率指多次(2次及以上)產(chǎn)卵的雌性親蝦數(shù)量占產(chǎn)卵雌性親蝦數(shù)量的比例，反映出雌性親蝦性腺再成熟的能力，雌性親蝦的產(chǎn)卵率和多次產(chǎn)卵率與其性腺發(fā)育過程中的營養(yǎng)供給有關(guān)。Lim[19]的研究發(fā)現(xiàn)，凡納濱對蝦親蝦產(chǎn)卵中的磷脂含量占總脂肪含量的50%時，凡納濱對蝦的產(chǎn)卵頻率會增加，他建議親蝦飼料中的磷脂含量為2%，我們設(shè)計(jì)的3組人工配合飼料中的磷脂含量均為2%，與之相符。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，4個處理組的產(chǎn)卵率介于(59.17±1.18)%～(74.16±1.18)%之間，K10組的產(chǎn)卵率最高，為(74.16±1.18)%，對照組的產(chǎn)卵率最低，為(59.17±1.18)%。用人工配合飼料進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化的親蝦產(chǎn)卵率均比用沙蠶進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化的親蝦產(chǎn)卵率高，并且差異性顯著(P<0.05)?？赡艿慕忉屖牵喝斯づ浜巷暳蠣I養(yǎng)配比較完善，在營養(yǎng)強(qiáng)化期間較有效的促進(jìn)親蝦積累營養(yǎng)物質(zhì)，加之繁殖產(chǎn)卵期間又改投鮮活餌料，達(dá)到了營養(yǎng)互補(bǔ)的效果；而對照組一直投喂單一活餌，缺少其他餌料的營養(yǎng)互補(bǔ)。董超等[20]在研究克氏原螯蝦攝食的過程中也發(fā)現(xiàn)，單一投喂魚肉丸對克氏原螯蝦的生長并沒有利處，反而采用魚肉丸和配合飼料混合間隔投喂會取得更好的結(jié)果。產(chǎn)卵率和多次產(chǎn)卵率方面的結(jié)果表明，凡納濱對蝦親蝦營養(yǎng)強(qiáng)化期間投喂人工配合飼料比單一投喂沙蠶要起到更好的培養(yǎng)效果，這方面的內(nèi)容還需進(jìn)一步的試驗(yàn)加以驗(yàn)證。

值得注意的一點(diǎn)是，隨著飼料中南極磷蝦粉添加比例的增加，凡納濱對蝦親蝦的多次產(chǎn)卵率從(38.18±2.57)%增加到(55.00±7.07)%，相應(yīng)的平均產(chǎn)卵次數(shù)從(1.48±0.71)次增加到(2.00±0.28)次?？梢娕浜巷暳现刑砑右欢ê康哪蠘O磷蝦粉有利于促進(jìn)親蝦的性腺再成熟能力，這方面的結(jié)果可能與南極磷蝦粉特定的營養(yǎng)組成相關(guān)，比如磷脂。南極磷蝦粉的脂肪酸多以磷脂的形式存在[8]，而磷脂能夠增加凡納濱對蝦的產(chǎn)卵頻率[19]，這方面的內(nèi)容還需要更加深入的研究。

3.3 不同南極磷蝦粉配比飼料進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化對受精卵卵徑的影響 凡納濱對蝦親蝦所產(chǎn)受精卵卵徑的大小，反映出了性腺發(fā)育期間用于卵巢發(fā)育的營養(yǎng)與能量的多少。凡納濱對蝦性腺發(fā)育期間，親蝦攝入的營養(yǎng)物質(zhì)通過肝胰腺往性腺進(jìn)行輸送，用于性腺發(fā)育。卵徑越大，說明親蝦體內(nèi)的消化酶活力越高，也會有更多的營養(yǎng)與能量用于卵巢發(fā)育。本試驗(yàn)中，K0組卵徑最小，對照組的卵徑小于K10組和K20組的卵徑，且與K20組的卵徑存在顯著差(P<0.05)。結(jié)果說明，凡納濱對蝦親蝦用添加一定磷蝦粉含量的配合飼料進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化培養(yǎng)能取得較好的卵子質(zhì)量。

3.4 飼料脂肪酸組成與卵脂肪酸組成的分析

餌料中的脂肪酸組成對于親蝦的生殖活動具有重要意義，親蝦的性腺成熟及繁殖產(chǎn)卵過程中需要大量的PUFA，但蝦類無法自行合成PUFA，只能從所食餌料中獲取[17,21]，Lim[19]的研究結(jié)果表明PUFA在飼料里的含量不僅影響親蝦的產(chǎn)卵率，同樣也影響受精卵的孵化率及無節(jié)幼體的變態(tài)率；Bray等[22]的研究表明，斑節(jié)對蝦的產(chǎn)卵率和孵化率隨著親蝦飼料中∑n-3/∑n-6比值的增加而提高。Wouters等[14]的研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，親蝦飼料中∑n-3/∑n-6比值的提高及較高的∑n-3含量更有利于凡納濱對蝦受精卵的孵化和無節(jié)幼體的變態(tài)。黃建華等[23]在斑節(jié)對蝦親蝦性成熟過程中脂肪酸需求的研究中發(fā)現(xiàn)，斑節(jié)對蝦親蝦在性腺發(fā)育過程中，需要大量的DHA、EPA、AA、LA(C18:2n-6)等n-3系列、n-6系列PUFA。Xu等[24]的研究發(fā)現(xiàn)，餌料EPA含量與中國對蝦親蝦產(chǎn)卵量正相關(guān)，而DHA與孵化率正相關(guān)。

本試驗(yàn)中，ΣPUFA含量在4組飼料中差異較大，沙蠶體內(nèi)的ΣPUFA含量最高，達(dá)(46.68±0.68)%，顯著高于3組人工配合飼料ΣPUFA含量(P<0.05)；而人工配合飼料中的ΣPUFA含量隨南極磷蝦粉添加比例的增加，依次為(28.94±0.60)%、(37.31±1.13)%和(38.23±0.15)%。樓喬明等[8]研究南極磷蝦粉體內(nèi)脂肪酸組成發(fā)現(xiàn)其ΣPUFA含量占總脂肪酸含量的47.98%，其中，EPA和DHA含量高達(dá)21.42%和19.22%；并且，不飽和脂肪酸中以n-3系列脂肪酸為主，占45.41%，n-6系列脂肪酸的含量僅為2.24%。由此可以發(fā)現(xiàn)，南極磷蝦粉中含有較高比例的ΣPUFA，進(jìn)而導(dǎo)致飼料K10和飼料K20的ΣPUFA含量顯著高于K0飼料(P<0.05)。另外，比較4組的產(chǎn)卵量和無節(jié)幼體變態(tài)率可以看出，隨著投喂餌料內(nèi)ΣPUFA含量的升高，產(chǎn)卵量和變態(tài)率也相應(yīng)的增加，但是餌料ΣPUFA含量對受精卵的孵化率無明顯的影響。EPA和DHA在沙蠶體內(nèi)含量最高，分別達(dá)到了(14.43±0.26)%和(17.87±0.46)%；比較3組人工配合飼料的EPA和DHA含量可以發(fā)現(xiàn)，隨著南極磷蝦粉添加比例的增加，飼料內(nèi)的EPA((8.55±0.36)%、(11.04±0.23)%、(11.53±0.02)%)、DHA((11.10±0.13)%、(15.47±0.24)%、(16.99±0.07)%)和AA((0.12±0.00)%、(0.80±0.08)%、(0.81±0.02)%)含量也相應(yīng)的增大?！苙-3/∑n-6比值方面，飼料K20最大，3.17±0.02；飼料K10次之，2.85±0.10；沙蠶2.42±0.04，飼料K0最小，2.20±0.03。∑n-3/∑n-6比值的不同可能是由磷蝦粉內(nèi)高比值的∑n-3/∑n-6引起，且隨著磷蝦粉添加量的增加，飼料中∑n-3/∑n-6比值急劇增大。分析發(fā)現(xiàn)，飼料內(nèi)∑n-3/∑n-6比值與凡納濱對蝦親蝦產(chǎn)卵受精卵卵徑正相關(guān)，并且與凡納濱對蝦親蝦的平均產(chǎn)卵次數(shù)也有一定的相關(guān)性。

本試驗(yàn)中，卵脂肪酸組成與所投喂餌料的脂肪酸組成正相關(guān)。4組受精卵中，對照組的ΣPUFA含量最高，(24.59±1.18)%，其次依次為K10組、K20組和飼料K0組，分別為(23.62±0.48)%、(22.93±1.01)%和(19.14±0.07)%。分析表明，受精卵中的EPA含量與飼料中的EPA含量絕對正相關(guān)，DHA和AA含量也近乎正相關(guān)；∑n-3/∑n-6比值也遵從飼料中的比值，即K10組、K20組∑n-3/∑n-6比值大于K0組和對照組∑n-3/∑n-6比值。在幼體發(fā)育的早期，開口攝食之前，幼體無外源性營養(yǎng)的攝入，只能依靠卵脂肪中的脂肪酸提供能源來滿足孵化和無節(jié)幼體變態(tài)的需求，因此卵脂肪酸對幼體發(fā)育極為重要。而卵脂肪酸組成模式又受餌料脂肪酸組成模式的影響，因此餌料脂肪酸組成是親蝦飼料的重點(diǎn)。

4 結(jié)語

凡納濱對蝦親蝦營養(yǎng)強(qiáng)化期間，飼料中添加10%～20%的南極磷蝦粉可較好的促進(jìn)親蝦體內(nèi)的營養(yǎng)積累，提高繁殖產(chǎn)卵水平。

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責(zé)任編輯 朱寶象

Effect of Antarctic Krill Meal in Diet on the Fecundity ofLitopenaeusvannameiBroodstocks in Nutrient Enrichment Phase

ZHANG Yu-Ling1,2，KONG Jie2,3，LIANG Meng-Qing2,3，LUO Kun2,3，LUAN Sheng2,3，CAO Bao-Xiang2,3
(1. Collage of Marine Life Sciences, Ocean University of China, Qingdao 266003, China;2. The Key Laboratory for Sustainable Utilization of Marine Fisheries Resources of Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;3. Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266071, China)

To study the function of Antarctic krill meal toLitopenaeusvannameibroodstocks in their nutrient enrichment phase, we designed three kinds of artificial formula diets with different krill meal content (0, 10%, 20%), which were numbered Diet K0, Diet K10and Diet K20, respectively, in this study. Three kinds of artificial formula diets were used to feedL.vannameibroodstocks in their nutrient enrichment phase for 60 days, while the fresh bait,Nereididae, was used as the control. After 60 days’ nutrient enrichment phase, the females were subjected to unilateral eyestalk ablation, then mature females were subjected to artificial fertilization. The number of eggs (fecundity) was estimated, as well as the egg hatchability and metamorphism rate. In addition, the egg diameter and fatty acids profile were also measured. Fatty acids profile of the three kinds of artificial formula diets was analyzed, so did the fresh bait. The spawning rate, continuous spawning rate and average spawning times in four treatment groups were calculated. The results showed that the female broodstocks in control group had the highest fecundity, but had no significant difference (P>0.05) with Diet K10and Diet K20group. There was no significant difference (P>0.05) between the four groups about egg hatchability. As to metamorphism rate, the control group, Diet K10and Diet K20group had no significant difference (P>0.05) with each other, and had significant difference (P<0.05) with Diet K0group. Diet K0, Diet K10and Diet K20groups had higher spawning rate, continuous spawning rate and average spawning times than the control group. Diet K20group had the maximal egg diameter, had no significant difference (P>0.05) with Diet K10group, and had significant difference (P<0.05) with Diet K0group and control group. Fatty acids profile analysis showed that there was a positive correlation between the fatty acids profiles in eggs and in diets partly. Furthermore, the egg fatty acids profiles in Diet K10and Diet K20groups had the similar even superior status than that in control group. We concluded that Diet K10and Diet K20which contained certain content krill meal (10%～20%) could be the excellent artificial formula diets inL.vannameibroodstocks’ nutrient enrichment phase.

Litopenaeusvannameibroodstock; antarctic artificial formula feed; krill meal; nutrient enrichment; fertilized quality; fatty acids profiles

中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(20603022016006)；山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“凡納濱對蝦耐鹽堿品種選育及健康養(yǎng)殖技術(shù)研究”(2016GSF115030)資助 Supported by Central Public-interest Scientific Institution Basal Research Fund，YSFRI,CAFS(20603022016006)and Key Research and Development Project of Shandong Province“Study on Breeding and Healthy Cultivation Techniques ofLitopenaeusvannameiin Saline-alkali Water”(2016GSF115030)

2016-11-02；

2017-01-20

張玉玲(1992-)，女，碩士生，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動物營養(yǎng)及育種。E-mail：chenxiyuling@126.com

?? 通訊作者：E-mail：jakmail@163.com

張玉玲1，2， 孔 杰2，3， 梁萌青2，3， 羅 坤2，3??， 欒 生2，3， 曹寶祥2，3
(1.中國海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院，山東 青島 266003；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071；3.青島海洋科學(xué)與技術(shù)國家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071)

S963

A

1672-5174(2017)06-069-09

10.16441/j.cnki.hdxb.20160370

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