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miRNA在結(jié)直腸癌中的作用研究進(jìn)展

2017-01-11 21:57:13來(lái)建飛丁蕾竇曉兵
浙江臨床醫(yī)學(xué) 2017年2期
關(guān)鍵詞:基因簇結(jié)腸癌靶向

來(lái)建飛 丁蕾 竇曉兵?

miRNA在結(jié)直腸癌中的作用研究進(jìn)展

來(lái)建飛 丁蕾 竇曉兵?

結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)是最常見(jiàn)的消化道腫瘤之一,其發(fā)病率居世界惡性腫瘤第三位,是全球第四大癌癥死因[1]。引起CRC的危險(xiǎn)因素包括吸煙、肥胖、缺乏運(yùn)動(dòng)等。2015年的研究數(shù)據(jù)顯示[2],早期診斷出結(jié)直腸癌的患者存活率約為60%,高于2005年至2009年的平均數(shù)據(jù)[3]。結(jié)直腸癌發(fā)生是多基因參與、多步驟發(fā)生的過(guò)程,其生物過(guò)程及分子機(jī)制尚不明確。1993年科學(xué)家首次在線(xiàn)蟲(chóng)發(fā)現(xiàn)微小RNA(microRNA,miRNA)lin-4[4]后,越來(lái)越多關(guān)于miRNA的問(wèn)題引起關(guān)注,其在人體多種疾病中扮演重要角色,包括各種癌癥。對(duì)miRNA的相關(guān)研究將有助于闡明其功能及分子機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn),多種miRNA在結(jié)直腸癌患者中表達(dá)失衡,參與癌癥發(fā)生與發(fā)展過(guò)程。miRNA是一類(lèi)非編碼小分子單鏈RNA,是一類(lèi)重要的基因表達(dá)調(diào)控因子,可靶向結(jié)合mRNA,通過(guò)沉默癌細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)基因的表達(dá)[5],促進(jìn)或抑制腫瘤的生長(zhǎng)。miRNA可作為結(jié)直腸癌早期診斷、治療、預(yù)后的新的分子生物學(xué)標(biāo)志物,也可作為體內(nèi)CRC治療的靶點(diǎn)[6]。

1 miRNA 的分子結(jié)構(gòu)和生物功能

miRNA是一類(lèi)在多種真核細(xì)胞和病毒中發(fā)現(xiàn)的進(jìn)化上保守、長(zhǎng)度為19~22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)上千種miRNA。miRNA的產(chǎn)生過(guò)程及生物功能各不相同,其核內(nèi)生成過(guò)程如下[7]:編碼miRNA的基因片段通過(guò)RNA聚合酶Ⅱ或聚合酶Ⅲ轉(zhuǎn)錄合成初級(jí)miRNA(primiRNA),pri-miRNA包含一個(gè)DROSHA蛋白和兩個(gè)DGCR8蛋白,經(jīng)過(guò)DROSHA酶切后,形成發(fā)夾狀前體miRNA(pre-miRNA),長(zhǎng)度為70~100nt;pre-miRNA在轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Exportin-5和GTP酶共同作用下從核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì),被核酸酶Dicer切割成21~25個(gè)堿基的雙鏈miRNA;該雙鏈解旋為兩條miRNA,其中一條為成熟的miRNA,另一條通常被降解。成熟miRNA分子可與其他蛋白質(zhì)組成RNA-誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RNA-induced silencing complex,RISC)。成熟miRNA 5' 端高度保守的種子序列(seed region)可與mRNA 3'端非編碼區(qū)域(3'UTR)完全或不完全識(shí)別結(jié)合,對(duì)其進(jìn)行剪切、降解或去腺苷酸化調(diào)控,影響mRNA 完整性,誘導(dǎo)靶分子mRNA降解或遏制其翻譯,在轉(zhuǎn)錄后水平影響基因或蛋白的表達(dá)。

2 miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展

2.1 miRNA與腫瘤的作用機(jī)制 不同種類(lèi)的miRNA生物學(xué)功能取決于其所結(jié)合的mRNA功能[8]。miRNA參與體內(nèi)多種調(diào)控機(jī)制和細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,一條單鏈miRNA可作用于多條mRNA,同時(shí)一條mRNA可被多條miRNA作用[9];而同一miRNA在不同的腫瘤中作用不同,多種miRNA也可以作用于同一靶基因發(fā)揮作用。miRNA與腫瘤的作用方式主要包括[10]:(1)miRNA與靶mRNA 的3'-UTR不完全配對(duì),阻斷其翻譯過(guò)程,從而下調(diào)靶mRNA的表達(dá)。(2)miRNA與靶mRNA的3'-UTR完全配對(duì),引起靶基因互補(bǔ)區(qū)特異性斷裂,從而將基因沉默,使其無(wú)法表達(dá)。(3) miRNA可通過(guò)加速靶mRNA 3' 端polyA的脫腺苷酸化,從而迅速降解靶mRNA。miRNA家族中,部分為癌性基因,部分為抑癌基因,通過(guò)其下游基因或某些信號(hào)通路控制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[11],參與調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移與侵襲[12]。

2.2 miRNA參與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和預(yù)后 近兩年又發(fā)現(xiàn)有多種miRNA參與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和預(yù)后過(guò)程。2015年Cell上一篇文章表明[13],一些miRNA在基因組上成簇存在,以多順?lè)醋有问睫D(zhuǎn)錄。miR-17-92基因簇是一個(gè)高度保守的基因簇,編碼miRNA-17、miRNA-18a、miRNA-19a、miRNA-20a、miRNA-19b-1和miRNA-92a這6個(gè)成熟miRNA,參與哺乳動(dòng)物多個(gè)器官發(fā)育,與多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。miRNA-17-92基因簇在結(jié)直腸癌、胃癌、肝癌等多種腫瘤細(xì)胞中高度表達(dá)。因此精確調(diào)控這一miRNA基因簇,以及基因簇中各個(gè)miRNA的相對(duì)表達(dá)對(duì)于發(fā)育和腫瘤相關(guān)疾病有重大作用。

例如,Zhang G等研究發(fā)現(xiàn)[14],miRNA-92a在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CRC患者中表達(dá)顯著升高,PTEN基因是其下游靶基因之一;miRNA-92a誘導(dǎo)上皮細(xì)胞至間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)化(EMT),通過(guò)下調(diào)PTEN表達(dá)調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和入侵。臨床病理特點(diǎn)表明,miRNA-92a超表達(dá)與臨床晚期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移以及低氧化應(yīng)激水平(OS)密切相關(guān),推測(cè)miRNA-92a可作為CRC預(yù)后標(biāo)志[15]。2015年,Chang C等[16]發(fā)現(xiàn),miRNA-339-5p可靶向結(jié)合mRNA PRL-1的3'UTR從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖和遷移。體外實(shí)驗(yàn)證明miRNA-339-3p過(guò)度表達(dá)會(huì)抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,而PRL-1表達(dá)不受miRNA- 339-3p調(diào)控。表明miRNA-339-5p和miRNA-339-3p作用的目標(biāo)mRNA可能不同,miRNA-339-3p的目標(biāo)基因仍有待確定。因此,研究不同miRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制具有重要意義。

3 miRNA在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義

目前CRC的篩選方法包括結(jié)腸鏡檢查和糞便隱血試驗(yàn)等常用的方法,但是這些方法受限于低特異性、敏感性、高侵襲性、高成本和高風(fēng)險(xiǎn)[17]。越來(lái)越多研究報(bào)道,miRNA作為潛在CRC診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物,廣泛存在于CRC患者糞便、血清、血漿和組織中。

3.1 miRNA在結(jié)腸癌組織中的表達(dá) 2015年,Raheleh A等[18]根據(jù)關(guān)于熒光素酶報(bào)告基因文獻(xiàn),總結(jié)近10年發(fā)表的77篇文獻(xiàn)制訂出一份關(guān)于結(jié)直腸癌患者異常表達(dá)的不同miRNA及其靶基因信息表,列舉了多種miRNA靶基因及其在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控作用。一篇Oncology 文獻(xiàn)報(bào)道[19],miRNA-143靶向作用于MACC1的3'UTR,下調(diào)MACC1表達(dá);提示miRNA-143可能直接作用于其靶分子MACC1,抑制癌細(xì)胞侵襲。2016年,Zhou B等[20]發(fā)現(xiàn)miRNA-382在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)異常下調(diào),經(jīng)熒光素酶報(bào)告基因分析證實(shí)miRNA-382直接作用于NR2F2的3'UTR;NR2F2在CRC組織中相對(duì)表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織;敲除NR2F2可抑制CRC細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、和入侵。因此,miRNA-382/ NR2F2可作為一個(gè)潛在機(jī)制調(diào)控CRC的發(fā)生發(fā)展。最近,Bo L等[21]發(fā)現(xiàn)在CRC細(xì)胞系和組織樣本中miRNA-152表達(dá)下調(diào);恢復(fù)CRC細(xì)胞中miRNA-152表達(dá)后,CRC細(xì)胞增殖、遷移和入侵顯著減少;PIK3R3是miRNA-152直接和功能性下游靶目標(biāo),PIK3R3表達(dá)和miRNA-152表達(dá)呈負(fù)相關(guān);下調(diào)PIK3R3表達(dá)使miRNA-152超表達(dá),抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。

3.2 miRNA在結(jié)腸癌患者血清中的表達(dá) 目前miRNA在結(jié)腸癌患者外周血中表達(dá)水平研究較少,但其在結(jié)直腸癌早期的診斷治療中具有重要意義。2015年,F(xiàn)ang Z等[22]研究發(fā)現(xiàn),CRC患者血清中miRNA-24、miRNA-320a和miRNA-423-5p表達(dá)水平明顯低于正常組標(biāo)本;手術(shù)后這三個(gè)分子濃度明顯增加。因此血清中miRNA-24,miRNA-320a和miRNA-423-5p表達(dá)水平有潛力作為CRC早期階段的新型生物標(biāo)志物檢測(cè),且優(yōu)于目前臨床生物標(biāo)志物。2016年,Hu J等[23]表明在CRC細(xì)胞中miRNA-1914和miRNA-1915作用于NFIX RNA的3'UTR,下調(diào)NFIX RNA的表達(dá);其過(guò)度表達(dá)會(huì)減弱5-FU和Oxaliplatin的抗腫瘤作用,降低CRC細(xì)胞的化學(xué)抵抗能力。因此miRNA-1914和miRNA-1915可能在結(jié)直腸癌治療和診斷中發(fā)揮重大作用。

3.3 miRNA在結(jié)腸癌患者糞便中的表達(dá) 為了在CRC初期進(jìn)行切除腫瘤,降低結(jié)直腸癌的發(fā)病率和病死率,進(jìn)行結(jié)直腸癌早期篩查非常必要。Lee JK等[24]發(fā)現(xiàn),miRNA具有高度穩(wěn)定性,能夠抵抗核酸酶(Rnases)的消化,適合在血清/血漿等體液,甚至糞便樣本中進(jìn)行檢測(cè)。因此可以通過(guò)檢測(cè)糞便中miRNA表達(dá)來(lái)作為篩查結(jié)直腸癌的一種新方法。2015年,Zhu Y等[25]表明,與正常健康人比較,CRC患者糞便中miRNA-29a(P<0.001),miRNA-223(P<0.001)和miRNA-224(P<0.001)表達(dá)水平均顯著降低;miR-29a水平在直腸癌患者糞便中的表達(dá)也顯著高于結(jié)腸癌患者(P<0.001)。因此miRNA可以成為一個(gè)CRC的篩查和早期診斷的生物標(biāo)志物。

4 miRNA與結(jié)直腸癌的診斷治療

4.1 miRNA與CRC的早期診斷 CRC傳統(tǒng)化療主要基于5氟尿嘧啶(5-FU)。與目前廣泛應(yīng)用的腫瘤標(biāo)記物不同,miRNA表達(dá)譜具有高度特異性,通過(guò)其特征對(duì)腫瘤進(jìn)行早期診斷[26]。Lekun F等[27]在295位CRC患者樣本中發(fā)現(xiàn),化療抵抗患者中,miRNA-17-5p表達(dá)水平比化療敏感患者高,miR-17-5p高表達(dá)的CRC患者預(yù)后效果較差,推測(cè)miRNA-17-5p可以作為對(duì)化療反應(yīng)的預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物。2016年,Ghanbari R等[28]證實(shí),CRC患者血清和糞便中l(wèi)et-7a-5p和let-7f-5p miRNA表達(dá)顯著降低,這可能是CRC早期檢測(cè)潛在分子生物標(biāo)志物。通過(guò)人為改變miRNA表達(dá)量控制癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)等,miRNA表達(dá)譜可用于評(píng)估腫瘤治療效果。

4.2 miRNA與CRC的靶向治療 隨著CRC研究不斷深入,個(gè)性化靶向治療得到發(fā)展,人類(lèi)腫瘤發(fā)生過(guò)程中miRNA成為一個(gè)新型特異性分子靶標(biāo)[29-30]。Min-Bin C等發(fā)現(xiàn)[31],miRNA-451在結(jié)腸癌組織中過(guò)度表達(dá),抑制AMPK活化機(jī)制,導(dǎo)致哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白復(fù)合體(mTORC1)過(guò)度活化和肌動(dòng)蛋白束蛋白(FSCN1)上調(diào),增強(qiáng)癌細(xì)胞遷移和增殖能力;若敲除miRNA-451基因或使用miRNA-451抑制劑,結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移和增殖被抑制。2015年,YANG等[32]發(fā)現(xiàn),miRNA-499在結(jié)直腸癌組織中異常表達(dá),miRNA-499-5p靶向結(jié)合FOXO4和PDCD4,促進(jìn)大腸癌細(xì)胞侵襲和腫瘤轉(zhuǎn)移。由此可見(jiàn)miRNA-499-5p在結(jié)直腸癌的侵襲和生長(zhǎng)中起著重要的調(diào)控作用,有望成為CRC臨床診斷治療的潛在靶點(diǎn)。這些研究表明有多種miRNA促進(jìn)或抑制結(jié)直腸腫瘤入侵與轉(zhuǎn)移過(guò)程,通過(guò)調(diào)整相關(guān)基因?yàn)榭罐D(zhuǎn)移策略提供潛在治療靶點(diǎn),為CRC的靶向治療提供重要線(xiàn)索。

5 展望

miRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要作用,是目前研究的前沿。今后,若能在正常人、結(jié)直腸癌癌前病變患者及不同階段結(jié)直腸癌患者中建立系統(tǒng)完善的miRNA差異表達(dá)譜,將有助于闡明結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制,為結(jié)直腸癌的診斷治療帶來(lái)新的研究方向和思路。如何特異性地將miRNA的激活劑及抑制劑引入腫瘤細(xì)胞,以及如何利用miRNA的表達(dá)譜為早期結(jié)直腸癌提供診斷依據(jù),都是未來(lái)的研究方向。miRNA或許可成為結(jié)直腸癌早期診斷、特異性治療及評(píng)估預(yù)后的小分子標(biāo)志物。因此,miRNA在結(jié)直腸癌診療中具有重要意義。

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310053浙江中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

*通信作者

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