王晨飛，于文蒞，顧亞麗

（1.赤峰市人民政府辦公廳督查室；2.赤峰市博物館，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

《黃蒿素》
——一本40年前的青蒿素研究報告匯編

王晨飛1，于文蒞2，顧亞麗3

（1.赤峰市人民政府辦公廳督查室；2.赤峰市博物館，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

青蒿素的研制成功是舉全國之力中國抗瘧科研團隊集體攻關(guān)的成果.以云南省藥物研究所為首的云南省抗瘧研究單位，在青蒿素的安全純凈提取、確定優(yōu)質(zhì)藥源地、青蒿素及其衍生藥品產(chǎn)業(yè)化研發(fā)、推進等方面，貢獻巨大.《黃蒿素》收錄的9篇研究報告，是1974～1976年青蒿素研究最為關(guān)鍵階段，云南省抗瘧研究單位在這一領(lǐng)域的主要研究成果.成功提取之初，云南省藥物研究所曾暫命名為“黃蒿素”.從1974年始，云南、廣東等省的抗瘧研究單位，使用云南省藥物研究所生產(chǎn)的“黃蒿素”，做了大量臨床試驗.試驗證明，“黃蒿素”具有高效、速效、低毒的抗瘧效果，可以用來搶救腦型瘧與兇險型瘧疾病人.

黃蒿素；瘧疾；青蒿素；黃花蒿；溶劑汽油提取法；酉陽；高效速效低毒

2015年度內(nèi)蒙古優(yōu)秀藏書家劉懷軍先生的望星樓藏書中，珍藏有一本珍貴的1974～1976年云南省抗瘧研究單位關(guān)于青蒿素的研究報告匯編，名為《黃蒿素》[1].該匯編由云南省藥物研究所編寫，印行于1976年2月，屬科研機密材料，僅供內(nèi)部交流使用.保密期過后，流散出來.90年代被劉懷軍先生有幸收藏至今.

1 導(dǎo)言：《黃蒿素》編寫的時代背景

青蒿素是中國首次從植物黃花蒿（中藥本草青蒿）中提取的一種高效、速效抗瘧藥.成功提取之初，云南省藥物研究所曾命名為“黃蒿素”.劉懷軍先生珍藏的《黃蒿素》為十六開包背裝鉛字印刷簡裝本.淺藍色紙質(zhì)封面，背折過四分子一為封底.封面正中偏上印藍色橫排黑體“黃蒿素”三字.封面近右側(cè)邊為一組藍色豎條組成的裝飾帶，條帶上印藍色豎排空心草書“研究資料匯編”六字.封面近下端印藍色橫排宋體“云南省藥物研究所”八字，上加蓋“云南省藥物研究所情報資料室”紅色圓形印記.封面近上端左側(cè)印有紅色宋體“機密”二字.封面近上端正中蓋長方形紅色印記，印文分三排，從上至下分別為“贈閱”、“請指正請交換”、“云南省藥物研究所情報資料室”.本匯編共計64頁，3萬余字.前55頁為黑色宋體鉛印，后加附9頁為藍色宋體鉛印.內(nèi)含各類圖表35個.隨文夾附藍線描圖2張，曲線圖3張.內(nèi)夾勘誤表1張.

圖1 《黃蒿素》封面

《黃蒿素》共收入1974～1976年（標識的最早和最晚的兩篇研究報告完結(jié)時間分別為1974年12月和1976年1月））云南省抗瘧研究單位關(guān)于“黃蒿素”（青蒿素）的化學、藥理、臨床研究報告9篇.其中化學、病理研究報告4篇，臨床研究報告5篇.

“黃蒿素”化學、病理研究報告

（1）報告一，云南省藥物研究所抗瘧藥物研究組《抗瘧藥黃蒿素的初步研究報告》，1974年12月.

（2）報告六，云南省藥物研究所抗瘧組《黃蒿素小試驗初步研究》，1976年1月.

（3）報告七，云南省藥物研究所抗瘧藥研究組《黃蒿素注射劑的研究》，1975年11月.

（4）報告八，云南省藥物研究所抗瘧藥研究組藥理小組（黃蒿素藥理學研究二）《黃蒿素與周效磺胺的配伍及注射劑的藥理研究》，1976年1月.（在本匯編報告七：云南省藥物研究所抗瘧藥研究組《黃蒿素注射劑的研究》一文中，參考文獻標示的日期為1975年11月.）

“黃蒿素”臨床研究報告

（1）報告二，云南省藥物研究所抗瘧藥研究小組、廣東中醫(yī)學院五·二三小組《黃蒿素治療瘧疾18例小結(jié)》，1974年12月.

（2）報告三，云南省藥物研究所抗瘧藥研究組、云南省瘧疾防治所《黃蒿素治療瘧疾三例小結(jié)》，1974年12月.

（3）報告四，昆明醫(yī)學院、附一院、附二院瘧疾防治組、保山縣防疫站《青蒿治療惡性瘧20例臨床報告》.（報告未標識完結(jié)時間）

（4）報告五，云南地區(qū)瘧疾防治研究領(lǐng)導(dǎo)小組辦公室《云南地區(qū)黃蒿素治療84例瘧疾臨床研究小結(jié)》，1975年11月.

（5）報告九，云南省藥物研究所抗瘧藥研究組《黃蒿素注射劑治療13例瘧疾臨床小結(jié)》.（報告未標識完結(jié)時間）

9篇研究報告中，云南省藥物研究所獨立研究報告5篇，合作研究報告2篇，其他單位研究報告2篇.

近段時間以來，因中國藥學家屠呦呦發(fā)現(xiàn)青蒿素而獲得2015年度諾貝爾生理學或醫(yī)學獎，瘧疾、青蒿素成為大家熱議的話題.瘧疾是一種嚴重影響人們身體健康甚至危及生命的惡性傳染病.瘧疾對于中國人并不陌生，在出土的3500年前的殷商甲骨文中，就有“瘧”字.數(shù)千年來，中國傳統(tǒng)醫(yī)藥學在探索瘧疾發(fā)病機理、癥候、辯證施治、方劑配伍、藥物炮制等方面積累了豐富的經(jīng)驗.傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為，“痎瘧者，瘧之總稱也.”（見明·馬蒔著《黃帝內(nèi)經(jīng)素問注證發(fā)微》）明·吳昆《素問吳注》解釋為：“痎，音皆……夜發(fā)謂之痎，晝發(fā)謂之瘧.”關(guān)于瘧疾的病機，全元起本《素問·陰陽應(yīng)象大論第六十三》認為，“夏傷于暑，秋為痎瘧.”[2]全元起本《素問·瘧論第三十八》又曰：“夫痎瘧皆生于風”.“瘧先寒而后熱者……名曰寒瘧.”“先熱而后寒者……名曰溫瘧.”“但熱而不寒者……名曰癉瘧.”[3]“丹溪（元代醫(yī)家朱震亨，人稱丹溪翁）曰：有暑瘧、有風瘧、有溫瘧、有痰瘧、有食瘧……邪在氣分，則發(fā)之早；邪在血分，則發(fā)之晚……又有纏綿不休，邪氣伏藏脅肋，結(jié)為癥塊者，謂之瘧母.”[4]

常用的治瘧中藥材有常山、檳郎、草果、蜀漆、仙鶴草、鱉甲、柴胡、青蒿等.相傳起源于神農(nóng)氏、在東漢時期集結(jié)整理成書的《神農(nóng)本草經(jīng)》中，最早明確記載了植物常山有治瘧的功效.關(guān)于青蒿入藥，最早見于湖南長沙馬王堆三號（西）漢墓出土帛書《五十二病方》.[5]其后的《神農(nóng)本草經(jīng)》、東晉葛洪著《肘后備急方》、明代的《補遺雷公炮制便覽》、《本草綱目》等中醫(yī)藥典籍都有中藥青蒿治病的記載.“柴胡截瘧飲”、“柴胡桂姜湯”、“何人飲”、“達原飲”、“截瘧散”、“截瘧青蒿丸”、“蜀漆散”、“清脾飲”、“柴平湯”等都是中國古代醫(yī)家較為常用的治瘧方劑.

圖2 東晉葛洪著《肘后備急方》

近現(xiàn)代以來，中外科學家一直沒有停止對瘧疾的研究.因在這一研究領(lǐng)域的突出貢獻，有三位科學家先后獲得諾貝爾獎.1888年，法國軍醫(yī)拉佛朗在非洲瘧疾患者血液的紅細胞中，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致瘧疾的元兇——瘧原蟲，拉佛朗因這一發(fā)現(xiàn)于1907年被授予諾貝爾生理學或醫(yī)學獎.1897年，英國微生物學家羅斯（Ronald ross）在印度發(fā)現(xiàn)“按蚊”體內(nèi)瘧原蟲的卵囊，并闡明了人體內(nèi)與蚊體內(nèi)瘧原蟲的發(fā)育史以及瘧疾的傳播方式——瘧疾是由感染了瘧原蟲的蚊子傳播的，羅斯因此獲得1902年的諾貝爾生理學或醫(yī)學獎.第三位獲得該獎項的是中國藥學家屠呦呦，2015年10月5日，屠呦呦“因創(chuàng)制新型抗瘧藥——青蒿素和雙氫青蒿素”，獲得2015年度諾貝爾生理學或醫(yī)學獎，這也是中國科學家在本土進行的科學研究第一次獲得諾貝爾獎.

2015年10月6日，屠呦呦在接受新華社記者采訪時表示：青蒿素研究獲獎是當年研究團隊集體攻關(guān)的成績，是中國科學家集體的榮譽，也標志中醫(yī)研究科學得到國際科學界的高度關(guān)注.[6]

青蒿素的研究發(fā)端于上世紀60年代的越南戰(zhàn)爭.越南熱帶叢林中瘧疾流行，瘧原蟲已經(jīng)對當時的治瘧特效藥氯喹產(chǎn)生了抗藥性，能否找到有效的抗瘧新藥，成為決定美、越雙方戰(zhàn)爭勝負的重要因素之一.美國聯(lián)合英、法、澳等國的研究機構(gòu)和歐洲一些大藥廠開展抗瘧新藥的研究.越南政府則緊急向中國求援.中國政府決定支援“同志加兄弟”的越南，以軍工項目的名義緊急研制抗瘧新藥.兩年下來，由中國醫(yī)學科學院主抓的研究工作進展緩慢.1967年5月23日，按照毛澤東主席的指示，國家科委、中國人民解放軍總后勤部聯(lián)合，在北京召開會議，下達了中央關(guān)于研制新型抗瘧藥物的命令，并將開會日期5月23日確定為項目保密代號“523”.周恩來總理作出重要批示，要求調(diào)動全國的力量，大打一場研發(fā)抗瘧新藥的戰(zhàn)役.很快，來自全國七個省區(qū)、六十多個單位、五百多人積極行動起來，一支大協(xié)作的科研隊伍，在全國“523”領(lǐng)導(dǎo)小組的統(tǒng)一規(guī)劃和各地區(qū)“523辦公室”的共同協(xié)調(diào)下，誕生了.以云南省藥物研究所為首的云南省科研單位，在青蒿素的安全純凈提取、確定優(yōu)質(zhì)藥源地、青蒿素及其衍生藥品產(chǎn)業(yè)化研發(fā)、推進等方面，貢獻巨大.《黃蒿素》收錄的這9篇研究報告，正是1974～1976年青蒿素研究最為關(guān)鍵階段，云南省抗瘧研究單位在這一領(lǐng)域的主要研究成果.在此，筆者想就這本研究報告匯編提供的信息，選取其中的四個內(nèi)容與大家一起分享.

2 青蒿素、黃蒿素定名之爭

正如屠呦呦所講，青蒿素的研制成功是舉全國之力中國抗瘧科研團隊集體攻關(guān)的成果.以屠呦呦為組長的中國中醫(yī)研究院中藥研究所（下文簡稱北京中藥研究所）抗瘧藥物研究團隊首先取得了重要發(fā)現(xiàn).經(jīng)過大量的反復(fù)篩選工作后，1971年起，屠呦呦團隊工作重點集中在中藥青蒿上.1971年9月，受東晉（公元3～4世紀）葛洪《肘后備急方》記載的“青蒿一握，以水二升漬，絞取汁，盡服之”可治寒熱諸瘧的啟發(fā)，屠呦呦改變以前高溫提取青蒿有效成分的方法，設(shè)計使用乙醚作溶劑低溫提取青蒿有效成分，取得令人振奮的結(jié)果，青蒿乙醚粗提物對鼠瘧抑制率明顯提高.

中藥制劑有丸、散、湯、膏，也有液、酒漬等等，或“去大病”，或“去急病”，或“不能速去病，舒緩而治之”.在制作時，“各有所宜，不得違制.”“液者，搗鮮藥而絞自然真汁是也”[7]，是中藥鮮藥炮制常用的方法之一.北京中藥研究所隨后的系列實驗證明，屠呦呦借鑒中藥炮制工藝而對青蒿提取方法所做的調(diào)整，是后來青蒿素成功提取的關(guān)鍵.

中國傳統(tǒng)醫(yī)藥學理論和臨床實踐對于現(xiàn)代醫(yī)藥學研究的啟發(fā)和靈感何止屠呦呦一人，青蒿素一種.治療白血病的三氧化二砷（俗稱砒霜），是和青蒿素齊名的中國上個世紀最重要的兩項來自中藥的藥物發(fā)現(xiàn)之一.1970年代早期，年輕的研究者張亭棟在觀察、驗證和改進鄉(xiāng)村中醫(yī)的實踐中受到啟發(fā)（上世紀70年代，黑龍江林甸縣民主公社出現(xiàn)大批癌癥患者.省衛(wèi)生廳派出哈醫(yī)大一院專家組前往調(diào)研，組長是研究血液病的張亭棟.他從當?shù)鼗颊呖谥兄酪晃焕现嗅t(yī)的一個秘方，就是用中藥砒霜、輕粉、蟾蜍等毒物配制驗方，治療淋巴結(jié)核，后來還治好了皮膚癌.），首先發(fā)現(xiàn)了砒霜化學成分三氧化二砷（As2O3）對白血病的治療作用，至1979年完全搞清楚其最佳適應(yīng)癥為APL（急性早幼粒細胞白血?。?[8]2015年，年近83歲的血液病專家張亭棟因為這項成就，獲得了2015年求是杰出科學家獎.

圖3 三氧化二砷，俗稱砒霜

1971年10月4日，屠呦呦在第191次試驗中得到的青蒿乙醚中性提取物，即標號191#樣品，對鼠瘧原蟲的近期抑制率達到100%.1972年8～10月，北京中藥研究所開展了青蒿乙醚中性提取物的臨床研究，30例惡性瘧和間日瘧病人全部顯效.1972年11月，北京中藥研究所從青蒿提取物中發(fā)現(xiàn)三種結(jié)晶成分，并在其中確定了一個具有抗瘧效果的有效單體化合物結(jié)晶，定名為“青蒿素Ⅱ”.1972年底，中科院生物物理所確定其化學分子式為C15H22O5，分子量282，明確了青蒿素為不含氮元素的倍半萜類化合物，是一種完全不同于喹啉類藥物的抗瘧新藥.1974年起，北京中藥研究所與中國科學院上海有機化學研究所和生物物理所相繼開展了青蒿素結(jié)構(gòu)協(xié)作研究工作，確認青蒿素是含有過氧基的新型倍半萜內(nèi)酯（參見2015年12月7日屠呦呦在卡羅林斯卡學院演講報告《青蒿素的發(fā)現(xiàn)：傳統(tǒng)中醫(yī)獻給世界的禮物》）.

1972年11月，北京中藥研究所雖然成功提取到了具有抗瘧效果的有效單體化合物“青蒿素Ⅱ”，但在隨后的動物試驗和臨床試驗中，均發(fā)現(xiàn)“青蒿素Ⅱ”抗瘧效果不穩(wěn)定，并且出現(xiàn)了心臟毒副作用.“還沒來得及分析原因，‘523’項目研究單位遍布全國的大協(xié)作方式顯現(xiàn)了奇效.”1972年底，時任昆明“523”辦公室主任的付良書在參加全國“523”任務(wù)會議時了解到，北京中藥研究所的青蒿中性提物有抗瘧功效.返回昆明后，付良書提出將云南省抗瘧藥物的研究重點從“金不換”、“管蘭香”（藥物）轉(zhuǎn)移到菊科蒿屬近緣植物上，并要求云南省藥物研究所從云南境內(nèi)200多種菊科蒿屬植物中篩選抗瘧成分.1973年4月，云南省藥物研究所研究人員羅澤淵，在當?shù)乇唤凶隹噍锏囊环N蒿屬植物中，成功提取到了抗瘧有效單體（從采集植物到提取成功，耗時約兩個月）.[9]根據(jù)植物的民間稱謂，暫名為“苦蒿結(jié)晶Ⅲ”.“苦蒿結(jié)晶Ⅲ”對抗瘧原蟲100%有效，動物與人體試驗均顯示效果出奇地好，沒有出現(xiàn)心臟毒性.與此同時，山東省寄生蟲病研究所與山東省中醫(yī)藥研究所合作，“也從本省一種叫黃花蒿的蒿屬植物中提取到有效單體，試驗后同樣沒有出現(xiàn)心臟毒性.”[10]鑒于云南省藥物研究所在青蒿素提取中做出的突出貢獻，“1974年開始，云南藥物研究所參加了與北京中藥研究所、山東中醫(yī)藥研究院有關(guān)青蒿素的協(xié)作研究.”（參見黃衡、羅澤淵2008年1月25日合寫紀念周克鼎同志的回憶文章《永遠的懷念》）

經(jīng)植物學家鑒別認定，北京、云南、山東這些具有抗瘧作用的植物，其實全部是植物黃花蒿（中藥本草青蒿）.云南省藥物研究所實驗用的苦蒿，按植物學分類叫“大頭黃花蒿”，屬于黃花蒿大頭變型.根據(jù)鑒定結(jié)果，云南省藥物研究所把“苦蒿結(jié)晶Ⅲ”定名為“黃蒿素”，1970年代，云南地區(qū)的抗瘧研究單位一直沿用這一名稱，這就是劉懷軍先生望星樓藏書珍藏的這本關(guān)于青蒿素的研究報告匯編以《黃蒿素》而非《青蒿素》命名的由來.

經(jīng)過一年的樣品積累和基礎(chǔ)研究，云南省藥物研究所的研究成果《抗瘧藥黃蒿素的初步研究報告》終于在1974年12月完結(jié).《抗瘧藥黃蒿素的初步研究報告》是《黃蒿素》收錄的第一篇研究報告，是對“黃蒿素”的化學、藥理及臨床的初步研究成果.報告分為3部分：（1）植物形態(tài)描述及其分布；（2）黃蒿素的初步化學研究；（3）黃蒿素毒性及藥理初步研究.[11]云南省藥物研究所針對“黃花蒿”和“大頭黃花蒿”植物種屬的研究見于報告第一部分，研究者從植物形態(tài)、藥用、分布三方面比較二者的異同.文后附“黃花蒿”和“大頭黃花蒿”描圖各一張，兩種植物的區(qū)別直觀明了.[12]

圖4 大頭黃花蒿描圖

當時，國內(nèi)對提取到的抗瘧有效成分的命名，出現(xiàn)了不同意見.一種意見認為這種從植物黃花蒿中提取到的有效單體應(yīng)該命名為黃花蒿素（山東）或黃蒿素（云南）.另外一種意見則認為，從植物黃花蒿中提取到的抗瘧有效單體還是應(yīng)該稱為青蒿素.因為本草青蒿（植物黃花蒿）是祖國傳統(tǒng)中藥一直沿用的名稱，而且北京中藥研究所從一開始就稱其為青蒿素.事實上，早在上世紀30年代，生藥學家趙燏黃就對中藥青蒿的來源植物進行了考證，懷疑中藥本草青蒿不是植物學上的“青蒿”，而基本都是植物學上的黃花蒿.藥學界屠呦呦、胡世林、植物學分類學家林有潤等也都做過考證.[13]直到上世紀八九十年代，這個問題才最終解決.《中華人民共和國藥典》按中藥稱謂習慣，將中藥青蒿對應(yīng)的植物只保留植物黃花蒿一種，而其抗瘧成分則隨傳統(tǒng)中藥正式定名為青蒿素.[14]修改后的《中華人民共和國藥典》關(guān)于“青蒿”原植物的敘述為：“本品為菊科植物黃花蒿Artemisia annua的干燥地上部分”.[15]

3 云南省藥物研究所發(fā)明的 “溶劑汽油提取法”，實現(xiàn)了“黃蒿素”（青蒿素）的安全、純凈、大規(guī)模提取

在翻閱《黃蒿素》時，有兩篇研究報告引起了筆者的注意，分別為報告一：《抗瘧藥黃蒿素的初步研究報告》，報告六：《黃蒿素小試驗初步研究》.兩篇報告的研究單位均為云南省藥物研究所抗瘧藥研究組.在這兩篇研究報告中，都提到了使用溶劑汽油來提取“黃蒿素”（青蒿素）.通過查閱有關(guān)資料，筆者了解到，使用溶劑汽油代替乙醚實現(xiàn)“黃蒿素”的安全、純凈、大規(guī)模提取，是云南省藥物研究所的一項重大發(fā)明.

前文曾提到，1972年底，屠呦呦成功從中藥本草青蒿（植物黃花蒿）中提取到了一種新的抗瘧活性化合物青蒿素，當時使用的溶劑是乙醚.乙醚是一種無色透明液體，易揮發(fā)、燃燒和爆炸，屠呦呦的實驗室還因此被燒過.青蒿素的成功提取，只是抗瘧藥產(chǎn)業(yè)化的第一步.由于北京地區(qū)的青蒿資源并不豐富，再加上提取工藝不過關(guān)（用于臨床試驗時，發(fā)現(xiàn)其心臟毒性大，抗瘧性差），無法滿足藥理和臨床試驗對青蒿素的大批量需求.在了解到云南省藥物研究所提取到的“黃蒿素”動物與人體試驗效果很好且沒有出現(xiàn)心臟毒性的情況后，全國“523”辦公室要求云南省藥物研究所采集大量青蒿，制備更多的青蒿素，以滿足藥理和臨床試驗對青蒿素的大批量需求.

1973年初，羅澤淵在做從大頭黃花蒿中提取“黃蒿素”的實驗中，用沙氏提取器采用石油醚、乙醚、醋酸乙酯、甲醇作溶劑，獲得4個樣品.然后又用相同重量的植物用水做了個浸膏.5個樣品“都有殺死瘧原蟲的效果，而乙醚提取樣品效果最好，達到了100%有效.”最后，羅澤淵用硅膠柱色譜法，成功獲取“苦蒿Ⅲ號”結(jié)晶體.[16]實驗中提到的石油醚，就是溶劑汽油.相對于溶劑乙醚，溶劑汽油性能比較穩(wěn)定，沸點高，不易揮發(fā)；而且，用溶劑汽油提取制備“黃蒿素”，溶解度大，毒性小，生產(chǎn)工藝簡單，可以實現(xiàn)“黃蒿素”的安全、純凈提取.至1974年初，云南省藥物研究所發(fā)明并進一步完善了“溶劑汽油提取法”，“黃蒿素”的制備周期大幅度縮短，提取工藝簡化為三步，為大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)奠定了重要基礎(chǔ).

《黃蒿素》收錄的第一篇研究報告《抗瘧藥黃蒿素的初步研究報告》（云南省藥物研究所抗瘧組，1976年1月），在報告第二部分“黃蒿素的初步化學研究”中，記錄了云南省藥物研究所抗瘧藥研究組使用乙醚和溶劑汽油提取“黃蒿素”（青蒿素）的比較實驗.實驗顯示：用乙醚提取“黃蒿素”所用原料為黃花蒿或大頭黃花蒿葉干粉；所需試劑包括乙醚、乙醇、活性炭、硅膠柱四種；提取過程分為“乙醚提取”（2～3次）、“乙醇提取”（5～6次）、“活性炭脫色”、“乙醚萃取”（2次）、“硅膠柱層析”、“乙醚重結(jié)晶”等6道工序.用溶劑汽油提取“黃蒿素”所用原料為黃花蒿或大頭黃花蒿葉干粉；所需試劑包括120 #溶劑汽油、50%乙醇兩種；提取過程僅需溶劑汽油“浸提三次”、“減壓濃縮”、“乙醇重結(jié)晶”等3道工序.[17]比較試驗結(jié)果，用溶劑汽油提取“黃蒿素”生產(chǎn)工序少，工藝簡單，收率高.

《黃蒿素》收錄的第六篇試驗報告名為《黃蒿素小試驗初步研究》，試驗由云南省藥物研究所抗瘧組獨立完成.這次試驗屬于“黃蒿素”走出實驗室進入“工業(yè)生產(chǎn)”前的“中間試驗”環(huán)節(jié)，是關(guān)于“黃蒿素工業(yè)生產(chǎn)工藝”的一次研究性試驗，這也是“黃蒿素”能否進行大規(guī)模“工業(yè)生產(chǎn)”的最為關(guān)鍵的一步.試驗用原料“取黃花蒿（中藥川青蒿）Artemisia annua的葉子曬干磨成中等粉”.所用溶劑為“120號溶劑汽油”和“藥用酒精”.主要設(shè)備有普通鋼板制“冷滲罐”、不銹鋼制“2千立升一套減壓蒸餾罐”、“vg500立升一套真空罐”（據(jù)《黃蒿素》內(nèi)附勘誤表，“真空罐”應(yīng)改作“真空泵”）.生產(chǎn)程序為：（1）使用溶劑汽油將黃花蒿葉子粉在冷滲罐“冷浸”（3次）；（2）每次浸泡液使用蒸餾罐、真空泵“減壓濃縮”可得粗晶；（3）“精制”，即把粗晶用活性炭脫色和乙醇重結(jié)晶，可供片劑使用，“供針劑使用時，需再用50%乙醇”結(jié)晶一次.試驗中分兩次投料，共消耗原料黃花蒿葉子粉1048公斤，得黃花蒿結(jié)晶3350克，總收率3.2%.本次試驗在節(jié)約溶劑汽油單位消耗量（每克單耗尚不到0.19kg）、第三次浸泡液濃縮問題（不需要濃縮，可供下批浸泡用）、重結(jié)晶時所用乙醇濃度（以50%乙醇為好，超過60%不易除蠟，影響純度）以及“降低消耗，提高勞動生產(chǎn)率”、改進提取設(shè)備等方面積累了一定經(jīng)驗.根據(jù)本報告的研究結(jié)論，支持用“溶劑汽油提取法”進行中間試驗：“黃花蒿葉子以120號溶劑汽油冷浸減壓濃縮，可得粗晶，再以50%乙醇重結(jié)晶2次，可得純品，該法生產(chǎn)工藝簡單，收率高，不需特殊設(shè)備、試劑，可作為中間試驗方法的參考.”[18]

圖5 云南省藥物研究所對“黃蒿素”所做的中間試驗流程

使用自主發(fā)明的“溶劑汽油提取法”，云南省藥物研究所實現(xiàn)了青蒿素的安全、純凈、大規(guī)模提取.“523”任務(wù)后續(xù)進行的動物藥理、毒性試驗和臨床試驗研究，用的大多都是該法生產(chǎn)制備的“黃蒿素”.

4 云南省藥物研究所發(fā)現(xiàn)了優(yōu)質(zhì)本草青蒿 （植物黃花蒿）產(chǎn)地

中國研制的青蒿素是從中藥本草青蒿中得到的一種具有全新化學結(jié)構(gòu)的化合物.青蒿素進入人體后，會引起紅細胞中鐵元素的狀態(tài)變化，從而使靠吞噬血紅蛋白為生的瘧原蟲無法攝食，饑餓而死.按現(xiàn)代藥物研制流程，弄清楚青蒿素的物質(zhì)結(jié)構(gòu)，就可以人工合成了.但是人們發(fā)現(xiàn)，如果以化學合成方法生產(chǎn)青蒿素，工藝復(fù)雜，成本極高，青蒿素還是得從本草青蒿中提取.青蒿素產(chǎn)業(yè)化之路離不開青蒿.

對于云南省藥物研究所來說，找到合適的溶劑提取青蒿素，于它的產(chǎn)業(yè)化歷程而言，已經(jīng)完成了最為關(guān)鍵的一步，但并不意味著青蒿素可以投產(chǎn).不同產(chǎn)地的本草青蒿（植物黃花蒿）中，青蒿素的產(chǎn)率差異很大.不同于實驗室提取，用于工業(yè)提取的原料黃花蒿，要求其青蒿素產(chǎn)率越大越好.云南省藥物研究所在1973年4月成功提取到“黃蒿素”（青蒿素）時，所用的的原料大頭黃花蒿，“黃蒿素”含量不高，提取產(chǎn)率只有0.03%.一次偶然事件，云南省藥物研究所的研究人員發(fā)現(xiàn)了提取“黃蒿素”所需的優(yōu)質(zhì)本草青蒿產(chǎn)地.

中藥方劑配伍中，除炮制技術(shù)外，藥材的產(chǎn)地、采收季節(jié)、藥用部位等，都是影響療效的重要因素之一.同一種藥材，產(chǎn)地、采收季節(jié)、藥用部位不同，藥性和藥效差異很大.中醫(yī)大夫在開列方劑時，對此都會特別標記.如《炮炙大法》記載，“黃連，非真川黃連不效.”“五味子，遼東者佳.”“忍冬，花四月采，藤葉不拘時采，但陰干，不見日、火.”[19]川青蒿自古就是中醫(yī)使用青蒿進行方劑配伍（復(fù)方或單方）時的首選品種.借用中醫(yī)藥理論思維，對抗瘧研究人員來說，優(yōu)質(zhì)中藥本草青蒿和青蒿素提取產(chǎn)率之間，應(yīng)該存在必然聯(lián)系.這一問題的解決，因重慶市酉陽縣川青蒿的出現(xiàn)有了重大轉(zhuǎn)機.

在接到全國“523”辦公室要求云南省藥物研究所制備更多的“黃蒿素”用于藥理和臨床研究的重任后，云南省藥物研究所積極行動起來.“當浩浩蕩蕩的人馬采回了大量青蒿時，才發(fā)現(xiàn)出了問題.”當時已是6月，云南地區(qū)青蒿的花期已過，青蒿葉片開始掉落.“黃蒿素”主要存在于葉片之中，采回來的青蒿桿已沒有提取價值.這時，云南省藥物研究所里一位四川籍工作人員戚育英提出，四川的‘青蒿’與云南的大頭黃花蒿類似，花期比云南晚，可以看看在四川是否能采購到.于是，藥物所委派戚育英和詹爾益趕赴四川，在重慶市藥材公司找到了500多公斤川青蒿（當時這批川青蒿因質(zhì)量不合格，有葉無花，正待處理）.經(jīng)查證，這批川青蒿的產(chǎn)地是重慶市酉陽縣.后來的實驗中，羅澤淵驚奇地發(fā)現(xiàn)，云南大頭黃花蒿中“黃蒿素”的含量在0.03%左右，而這批川青蒿的“黃蒿素”含量卻高出十幾倍，竟然高達0.3%以上.[20]“誰也不曾想到，這次緊急采購，為日后青蒿素的發(fā)展，奠定了重要基礎(chǔ).”[21]

在《黃蒿素》收錄的第一篇研究報告《抗瘧藥黃蒿素的初步研究報告》中，云南省藥物研究所就云南產(chǎn)大頭黃花蒿和酉陽產(chǎn)黃花蒿（中藥川青蒿）提取“黃蒿素”的比率，做過對比實驗研究.在報告第二部分“黃蒿素的初步化學研究”中，研究人員寫道：“以上兩法以重慶售黃花蒿為原料，產(chǎn)率為0.2%，以昆明產(chǎn)大頭黃花蒿為原料，產(chǎn)率為0.03%”.[22]《黃蒿素》收錄的第六篇研究報告《黃蒿素小試驗初步研究》，是云南省藥物研究所關(guān)于“黃蒿素”工業(yè)生產(chǎn)工藝的試驗研究報告.試驗用于提取“黃蒿素”的原料為黃花蒿（中藥川青蒿）Artemisia annua的葉子，曬干磨成中等粉供用.報告顯示的試驗總收率為3.2%.[23]面對如此高的“黃蒿素”提取比率，云南省抗瘧研究人員果斷放棄本地產(chǎn)大頭黃花蒿，研究重心開始轉(zhuǎn)移并定格在了優(yōu)質(zhì)中藥本草川青蒿上.

圖6 實驗得出的大頭黃花蒿和川青蒿提取“黃蒿素”產(chǎn)率對比數(shù)據(jù)

中藥本草青蒿（植物黃花蒿），別名蒿、草蒿、方潰、犱蒿、臭蒿、香蒿、三庚草、蒿子、草青蒿、草蒿子、細葉蒿、香青蒿、苦蒿、臭青蒿、香絲草、酒餅草等.據(jù)《中華人民共和國藥典》2005年版一部，青蒿“為菊科植物黃花蒿Artemisia annua L.的干燥地上部分.苦、辛，寒.歸肝、膽經(jīng).”有“清熱解暑、除蒸、截瘧”之效.用于“暑邪發(fā)熱、陰虛發(fā)熱、夜熱早涼、骨蒸勞熱、瘧疾寒熱、濕熱黃疸”[24]等癥.在不同生態(tài)環(huán)境中生長，青蒿會產(chǎn)生生態(tài)變異.北宋時期，沈括等人發(fā)現(xiàn)本草青蒿（或叫做草蒿）具有不同的形態(tài)：“蒿之類至多.如青蒿一類，自有兩種，有黃色者，有青色者，《本草》謂之青蒿，亦恐有別也.”[25]明·李時珍《本草綱目》第十五卷《草部四》收錄有“青蒿”和“黃花蒿”兩個本草條目.在“青蒿”條目下，時珍列舉的別名有“草蒿”、“香蒿”、“方潰”、“菣”、“犱蒿”等.其性味“苦、寒，無毒”.在“黃花蒿”條目下，列舉的別名僅“臭蒿”一個.葉“辛、苦，涼，無毒.”子“辛，涼，無毒.”時珍認為：“香蒿（青蒿）臭蒿（黃花蒿）通可名草蒿.此蒿（黃花蒿）與青蒿相近，但此蒿色綠帶淡黃，氣辛臭不可食，采以罨黃酒曲者是也.”[26]植物分類學博士劉冰根據(jù)歷代本草書中記載的分布、花期、氣味等關(guān)鍵特征，確定《本草綱目》等古代本草書中的“青蒿”和“黃花蒿”兩味中藥本草都是植物學上的黃花蒿.[27]現(xiàn)代學者通過觀察，發(fā)現(xiàn)了野生黃花蒿眾多不同的生態(tài)型：從稈色來看，有白青稈、紫紅稈、紫稈、深綠稈；從葉色來看，有淡黃葉、淡綠葉；從葉形來看，有稀裂葉、稀寬裂葉、分裂葉.研究還表明，不同生態(tài)型在青蒿素的含量上也有差異.

中藥本草青蒿（植物黃花蒿）資源在我國分布比較廣泛.《本草綱目》引南朝梁著名醫(yī)藥家陶弘景言，“草蒿，處處有之，即今青蒿，人亦取雜香菜食之”.[28]本草青蒿（植物黃花蒿）雖然系世界廣布品種，但青蒿素含量隨產(chǎn)地、生態(tài)型不同差異極大.除中國重慶東部、福建、廣西、海南部分地區(qū)外，世界絕大多數(shù)地區(qū)生長的青蒿（植物黃花蒿）中的青蒿素含量都很低.中國科學院上海藥物研究所研究員李英曾談到：“我們國家的青蒿資源非常豐富，就其含量在西南地區(qū)，（青蒿素）含量是世界最高的.”[29]重慶市酉陽縣的中藥本草川青蒿中“黃蒿素”含量更高達0.3%以上，是全球青蒿素高含量的富集區(qū).“羅澤淵等人的這一發(fā)現(xiàn)，加快了全國青蒿素研究的進程，得到了業(yè)內(nèi)肯定.《遲到的報告》一書對此如此評價：在尚未開展青蒿資源普查之前，他們初步確定了酉陽地區(qū)為優(yōu)質(zhì)黃花蒿產(chǎn)地，為后來青蒿素研究工作，提供了優(yōu)質(zhì)黃花蒿藥源.他們的發(fā)現(xiàn)也是后來確定酉陽作為青蒿的種植基地和青蒿素生產(chǎn)基地的依據(jù)之一.”[30]自此，酉陽從一個貧困縣，一舉成為全世界最大的青蒿種植基地，其青蒿生產(chǎn)種植技術(shù)已通過國家GAP認證，享有“世界青蒿之鄉(xiāng)”的美譽，全球有80%的原料青蒿產(chǎn)自酉陽.

5 “黃蒿素”（青蒿素）具有高效、速效、低毒的抗瘧效果，可以用來搶救腦型瘧與兇險型瘧疾病人

從1974年始，云南、廣東等省的抗瘧研究單位，使用云南省藥物研究所生產(chǎn)的“黃蒿素”，做了大量臨床試驗.首次臨床試驗由廣州中醫(yī)學院的李國橋小組在云南完成，結(jié)果出人意料地好，藥效幾乎“立竿見影”：惡性瘧疾病人服藥“6小時后，原蟲數(shù)明顯減少，一般到16小時原蟲被消滅90%，20小時被消滅95%以上.”[31]

《黃蒿素》總共收錄了5篇“黃蒿素”臨床研究報告.使用“黃蒿素”片劑臨床研究報告4篇：《黃蒿素治療瘧疾18例小結(jié)》，《黃蒿素治療瘧疾三例小結(jié)》，《青蒿治療惡性瘧20例臨床報告》，《云南地區(qū)黃蒿素治療84例瘧疾臨床研究小結(jié)》.使用“黃蒿素”針劑臨床研究報告1篇：《黃蒿素注射劑治療13例瘧疾臨床小結(jié)》.綜合5篇研究報告結(jié)語，大致可歸納為：使用“黃蒿素”治療瘧疾具有高效、速效、低毒的特點，可以用來搶救腦型瘧與兇險型瘧疾病人.“盡管黃蒿素在長效方面仍存在問題，但是在搶救兇險型瘧疾中，黃蒿素的高效、速效特點是目前各種抗瘧藥中所難以比美的.”[32]“青蒿與氯喹對殺滅瘧原蟲有相同作用，不論從治愈率、平均退熱時間上均無顯著差異……青蒿組殺滅瘧原蟲的時間比氯喹組快.青蒿組具有迅速殺滅紅細胞內(nèi)無性體瘧原蟲的作用，故可以用來搶救腦型、兇險型瘧疾病人.”[33]“從臨床觀察研究發(fā)現(xiàn)黃蒿素的治愈率與氯喹相同，并且在退熱時間、瘧原蟲陰轉(zhuǎn)時間均比氯喹快……黃蒿素殺滅血液內(nèi)瘧原蟲無性體的速度比氯喹快，毒性低，對孕婦亦未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng).故可以用來搶救腦型瘧與兇險型病人.”[34]“黃蒿素注射劑治療13例瘧疾病患者，療效達100%，血液內(nèi)原蟲無性體轉(zhuǎn)陰也較口服為快，除保持了原有的高效、速效等特點外，并且比口服大大減少了劑量，無毒性作用，達到了預(yù)期的目的.”[35]

圖7 臨床報告《黃蒿素治療瘧疾18例小結(jié)》得出“黃蒿素”具有“高效、速效”的抗瘧特點

“1975年后，由于青蒿素在云南臨床基地的試驗取得了良好的結(jié)果，更多的省、市、軍區(qū)和科研單位加入了攻關(guān)的行列.”（參見黃衡、羅澤淵2008年1月25日合寫紀念周克鼎同志的回憶文章《永遠的懷念》）1978年，青蒿素通過國家鑒定.1986年，青蒿素獲得衛(wèi)生部新藥證書.

業(yè)界有學者認為，除屠呦呦之外，離諾貝爾獎最近的還有一人，她就是從“大頭黃花蒿”里提取出有效抗瘧單體“黃蒿素”并在李國橋進行的首次臨床試驗中驗證有效（李國橋首次進行臨床試驗時，使用的是羅澤淵發(fā)現(xiàn)的“黃蒿素”并取得抗瘧成果）、確定優(yōu)質(zhì)黃花蒿產(chǎn)地的羅澤淵.[36]2010年，因在青蒿素研發(fā)方面取得的成就，屠喲喲、李國橋及羅澤淵獲得了具有諾貝爾獎“風向標”之稱的拉斯克獎候選提名.2011年9月，屠喲喲獲得拉斯克臨床醫(yī)學獎.2015年10月5日，屠呦呦再次斬獲2015年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎.

6 結(jié)語

從數(shù)千年前中醫(yī)使用青蒿等中草藥治療瘧疾，到青蒿素及其衍生藥品神奇的抗瘧效果，中國人在抗瘧、治瘧這條道路上一路走來，腳步從未停歇.可以毫不夸張地說，青蒿素從它研制成功的那天起，就已打上了深深的中國印記.“呦呦鹿鳴，食野之蘋（蘋，在這里指蒿類植物）”（《詩經(jīng)·小雅·鹿鳴》），以”呦呦“為名，注定了屠呦呦和中藥青蒿的不解之緣；依靠傳統(tǒng)中醫(yī)藥治瘧思路，屠呦呦從數(shù)千種中藥材中選中本草青蒿進行實驗研究；受中醫(yī)古籍《肘后備急方》的啟發(fā)，屠呦呦改進提取方法，首先發(fā)現(xiàn)中藥青蒿的乙醚提取物有高效抑制瘧原蟲的成分，她的發(fā)現(xiàn)，在抗瘧疾新藥青蒿素的開發(fā)過程中起到關(guān)鍵性的作用；因化學合成方法生產(chǎn)青蒿素工藝復(fù)雜，成本極高，從本草青蒿中提取青蒿素成為工業(yè)化生產(chǎn)的首選；中國西南地區(qū)尤其是重慶市酉陽縣優(yōu)質(zhì)、豐富的青蒿資源，使得中國在青蒿素及其衍生物研制和生產(chǎn)領(lǐng)域具有別國不具備的得天獨厚的優(yōu)勢；低廉的價格，“高效、速效、低毒”的抗瘧效果，青蒿素類制劑成為瘧疾患者的首選藥物.迄今為止，青蒿素及其衍生物制劑已在全球范圍內(nèi)挽救了數(shù)以百萬人的生命.

回顧40年前青蒿素的研制歷程，作為中國人，我由衷地為博大精深的中國傳統(tǒng)中醫(yī)藥文化成就及其影響力自豪不已，也為當年無數(shù)個像屠呦呦、羅澤淵、李國橋等為抗瘧新藥研發(fā)協(xié)同作戰(zhàn)、不畏險阻、刻苦攻關(guān)的科研人員而感動.僅以此文拋磚引玉，希望更多的國人學習經(jīng)典，傳承文化，發(fā)展創(chuàng)新，福澤子孫.

最后，我想用屠呦呦2015年12月7日在瑞典卡洛琳斯卡醫(yī)學院醫(yī)學禮堂獲獎演講中的一段話與大家共勉：

“中國醫(yī)藥學是一個偉大（的）寶庫，應(yīng)當努力發(fā)掘，加以提高.”（毛澤東主席的講話）青蒿素正是從這一寶庫中發(fā)掘出來的.通過抗瘧藥青蒿素的研究經(jīng)歷，深感中西醫(yī)藥各有所長，二者有機結(jié)合，優(yōu)勢互補，當具有更大的開發(fā)潛力和良好的發(fā)展前景.大自然給我們提供了大量的植物資源，醫(yī)藥學研究者可以從中開發(fā)新藥.中醫(yī)藥從神農(nóng)嘗百草開始，在幾千年的發(fā)展中積累了大量臨床經(jīng)驗，對于自然資源的藥用價值已經(jīng)有所整理歸納.通過繼承發(fā)揚，發(fā)掘提高，一定會有所發(fā)現(xiàn)，有所創(chuàng)新，從而造福人類.

〔1〕云南省藥物研究所.黃蒿素[G].云南:云南省藥物研究所, 1972.

〔2〕〔3〕段逸山.《素問》全元起本研究與輯復(fù)[M].上海:上?？茖W技術(shù)出版社,2001.177,129.

〔4〕無名氏,劉一仁.醫(yī)學傳心錄 [M].北京:學苑出版社, 2014.55.

〔5〕馬王堆漢墓帛書整理小組.馬王堆漢墓出土醫(yī)書釋文（二）[J].文物,1975,232(9):42-43.

〔6〕吳晶,胡浩.中國諾獎得主屠呦呦：青蒿素研究獲獎是中國科學家集體的榮譽[R/OL].新華網(wǎng)北京,2015-10-06 [2016-03-29].http://news.xinhuanet.com/2015-10/06/ c_1116745192.htm.

〔7〕〔21〕繆希雍.炮炙大法[M].山西:山西科學技術(shù)出版社, 2009.48,10,14.

〔8〕〔14〕饒毅,黎潤紅,張大慶.中藥的科學研究豐碑[J].科學文化評論,2011,8(4):27-44.

〔9〕〔16〕〔20〕〔36〕成錦.瘧疾肆虐時代：離諾貝爾獎最近的人——羅澤淵[R/OL].網(wǎng)易云南,2015-10-13[2016-03-29].http://yn.news.163.com/15/1013/00/B5P462RS03230 LFT.html.

〔10〕〔21〕〔29〕中央電視臺“探索發(fā)現(xiàn)”欄目.發(fā)現(xiàn)青蒿素（上）·中國特效藥[Z/OL].央視網(wǎng)視頻?探索發(fā)現(xiàn),2015-10-30[2016-03-29].http://tv.cntv.cn/video/C14092/81d0e 85f25f04158b50f7d2e3135e32.

〔11〕〔12〕〔17〕〔22〕云南省藥物研究所抗瘧藥物研究組.抗瘧藥黃蒿素的初步研究報告 [R]//云南省藥物研究所.黃蒿素.云南:云南省藥物研究所,1976.3-25,4,6,4.

〔13〕a.屠呦呦.中藥青蒿的正品研究[J].中藥通報,1987,12(4): 2-5；b.林有潤.中國古本草書艾蒿類植物的初步考訂[J].植物研究,1991,11(1):1-24；c.林镕,林有潤.中國植物志·第76卷·第2分冊[M].北京:科學出版社,1911.

〔15〕〔24〕國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(2005年版一部)[M].北京：化學工業(yè)出版社.2005.137.

〔18〕〔23〕云南省藥物研究所抗瘧組.黃蒿素小試驗初步研究[R]//云南省藥物研究所.黃蒿素.云南:云南省藥物研究所,1976:50-53,51.

〔25〕沈括.夢溪筆談[M].閻佳,周曉風,譯.四川:巴蜀書社, 1995.196.

〔26〕〔28〕李時珍.本草綱目·第十五卷·草之四·黃花蒿[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社，1998.410-411,410.

〔27〕ArtemisiaLiu（劉冰）.青蒿素、青蒿、黃花蒿，究竟什么關(guān)系？[R/OL].果殼網(wǎng)（guokr.com）,2015-10-09[2016-03-29].http://www.guokr.com/article/440801/.

〔30〕記者梁斌,攝影雷遠東.與諾貝爾獎失之交臂？四川人也曾提取出青蒿素[N/OL].華西都市報客戶端,2015-10-07[2016-03-29].http://bbs.zg163.net/thread-3531413-1-1.html.

〔31〕〔32〕云南省藥物研究所抗瘧藥研究小組,廣東中醫(yī)學院五·二三小組.黃蒿素治療瘧疾18例小結(jié)[R]//云南省藥物研究所.黃蒿素.云南:云南省藥物研究所, 1976.29,33.

〔33〕昆明醫(yī)學院,附一院,附二院瘧疾防治組,保山縣防疫站.青蒿治療惡性瘧20例臨床報告 [R]//云南省藥物研究所.黃蒿素.云南:云南省藥物研究所,1976.41.

〔34〕云南地區(qū)瘧疾防治研究領(lǐng)導(dǎo)小組辦公室.云南地區(qū)黃蒿素治療84例瘧疾臨床研究小結(jié) [R]//云南省藥物研究所.黃蒿素.云南:云南省藥物研究所,1976.50.

〔35〕云南省藥物研究所抗瘧藥研究組.黃蒿素注射劑治療13例瘧疾臨床小結(jié)[R]//云南省藥物研究所.黃蒿素.云南:云南省藥物研究所,1976:(附頁)8.

R284

A

1673-260X（2016）12-0087-07

2016-10-23

顧亞麗