■林俊宏 朱 輝 林琨杰 胡勝蘭 胡文鋒*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，廣東廣州510642；2.東莞市林氏生物技術(shù)股份有限公司，廣東東莞523560）

隨著我國民眾生活水平的提高，肉蛋奶的需求量不斷增加，飼料工業(yè)和畜牧業(yè)發(fā)展迅猛，從而導(dǎo)致飼料原料尤其是蛋白質(zhì)飼料缺乏的問題日益嚴(yán)重。利用現(xiàn)代生物工程技術(shù)的生物轉(zhuǎn)化開發(fā)新的蛋白飼料來源，同時(shí)通過生物轉(zhuǎn)化作用提高蛋白飼料的利用率和消化水平，提高其使用價(jià)值十分必要。

我國飼料蛋白包括以豆粕為主，輔之其他雜粕的植物性蛋白；以魚粉和血漿蛋白粉為主，輔之動(dòng)物毛發(fā)水解蛋白以及昆蟲蛋白的動(dòng)物性蛋白；以及少量的藻類、酵母、霉菌和細(xì)菌制成的微生物蛋白等。其中以血漿蛋白粉價(jià)格最高，用于斷奶仔豬飼料中養(yǎng)殖效益最好，其次為魚粉[1-2]。目前，國內(nèi)外魚粉加工工藝簡(jiǎn)單，很少引入現(xiàn)代生物工程技術(shù)。僅有的生產(chǎn)發(fā)酵魚粉的工藝和產(chǎn)品，也多用于制作堆肥，沒有研究替代血漿蛋白粉的可能。微生物發(fā)酵處理使動(dòng)物蛋白成分由大分子變成小分子的氨基酸和肽，這些成分具有很高的利用價(jià)值[1，3]。用這種方法制成的魚粉具有更高的附加值，勢(shì)必會(huì)受到市場(chǎng)的歡迎。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及試劑

1.1.1 試驗(yàn)材料

魚粉購自東莞市林氏生物技術(shù)股份有限公司；枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院應(yīng)用微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 試驗(yàn)試劑

枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基：胰蛋白胨（Tryptone）10 g、酵母提取物（Yeast extract）5 g、氯化鈉（NaCl）10 g、蒸餾水1 L，調(diào)節(jié)pH值至7.0,121℃滅菌30 min。

嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基：胰蛋白胨（Tryptone）10 g、牛肉膏（Beef Extract）10 g、酵母膏（YEF）5 g、檸檬酸氫二銨[(NH4)2HC6H5O7]2 g、葡萄糖（C6H12O6·H2O）20 g、吐溫80 1.0 ml、乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）5.0 g、磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）2.0 g、硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.58 g、硫酸錳（MnSO4·H2O）0.25 g，蒸餾水1 L，調(diào)節(jié)pH值至6.2～6.6，121 ℃滅菌30 min。

固體發(fā)酵培養(yǎng)基：魚粉、水。

鹽酸溶液(CHCl=6 mol/l)∶將優(yōu)級(jí)純鹽酸與水等體積混合。

稀釋上機(jī)用檸檬酸鈉緩沖液(CNa+=0.2 mol/l，pH值2.2)：稱取檸檬酸三鈉19.6 g，用水溶解后加入優(yōu)級(jí)純鹽酸16.5 ml，硫二甘醇5.0 ml，苯酚1 g，加水定容至1 000 ml，搖勻，用G4垂熔玻璃砂芯漏斗過濾，備用。

總抗氧化能力（T-AOC）檢測(cè)試劑盒（比色法）：購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種的篩選

活化枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌，分別在添加了一定量魚粉的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行平板涂布，放置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，觀察菌株生長(zhǎng)狀況。選擇生長(zhǎng)速度快、菌落特征明顯的菌落，采用劃線分離法進(jìn)行純化，重復(fù)若干次后，獲得單一菌株。

1.2.2 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

將篩選得到的枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌進(jìn)行液體培養(yǎng)，測(cè)定生長(zhǎng)曲線。枯草芽孢桿菌按1%接種量接入液體培養(yǎng)基中，裝液量為50 ml/250 ml，于37℃、150 r/min搖床培養(yǎng)；嗜酸乳桿菌按1%接種量接入液體培養(yǎng)基中，裝液量為50 ml/250 ml，于37℃靜置培養(yǎng)。采用比濁法，每2 h測(cè)定枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌的OD600nm值，繪制生長(zhǎng)曲線。

1.2.3 發(fā)酵條件的優(yōu)化

將篩選得到的菌株活化后，按1%接種量制備種子液?？莶菅挎邨U菌在37℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)12 h，嗜酸乳桿菌在37℃靜置培養(yǎng)16 h后將菌液接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，從菌種接種比（3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3）、料水比（1∶0.6、1∶0.8、1∶1、1∶1.2、1∶1.4）、接種量（1%、3%、5%、7%、9%）、發(fā)酵溫度（25、30、35、40、45 ℃）和發(fā)酵時(shí)間（12、24、36、48、60 h）5個(gè)因素進(jìn)行發(fā)酵工藝優(yōu)化。發(fā)酵完成后測(cè)定發(fā)酵產(chǎn)物中的小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量。

1.3 指標(biāo)測(cè)定方法

1.3.1 小肽含量的測(cè)定

酸溶性蛋白含氮量測(cè)定方法：稱取發(fā)酵魚粉干樣2.00 g，加入15%三氯乙酸（TCA）溶液10 ml，混合均勻，靜置5 min。將溶液定量轉(zhuǎn)移，在4 000 r/min下離心10 min后，取5 ml上清液放入凱氏燒瓶中，采用凱氏定氮法測(cè)定含氮量，具體操作和計(jì)算參照GB/T 6432—1994[4-5]。

發(fā)酵魚粉含氮量測(cè)定方法：稱取發(fā)酵魚粉干樣0.50 g放入凱氏燒瓶中，采用凱氏定氮法測(cè)定含氮量，具體操作和計(jì)算參見酸溶性蛋白含量的測(cè)定方法。

1.3.2 揮發(fā)性鹽基氮含量的測(cè)定

稱取10.0 g發(fā)酵魚粉置于錐形瓶中，加入100 ml蒸餾水，于磁力攪拌器上攪拌30 min后過濾，取10 ml濾液采用微量擴(kuò)散法測(cè)定揮發(fā)性鹽基氮的含量，具體操作和計(jì)算參照GB/T 5009.44—2003[6]。

1.3.3 發(fā)酵魚粉總抗氧化能力的測(cè)定

稱取10 g發(fā)酵魚粉于錐形瓶中，加入90 ml蒸餾水，經(jīng)磁力攪拌器攪拌30 min后過濾，獲得10%勻漿液作為待測(cè)液，采用總抗氧化能力（T-AOC）檢測(cè)試劑盒（比色法）測(cè)定發(fā)酵魚粉的總抗氧化能力。

1.3.4 發(fā)酵魚粉氨基酸組成成分的測(cè)定

稱取試樣（約含蛋白7.5～25 mg）于20 ml安瓿瓶中準(zhǔn)確至 0.1 mg，加10.00 ml鹽酸(CHCl=6 mol/l)，置液氮中冷凍，然后抽真空至7 Pa后封口。將水解管放在(110±1)℃恒溫干燥箱中，水解22～24 h。冷卻，混勻，開管，過濾，用移液管吸取適量的濾液于燒杯中，60℃蒸發(fā)至干，加少許水，重復(fù)蒸干2次。加入3～5 ml，pH值2.2稀釋上機(jī)用檸檬酸鈉緩沖液，使樣液中氨基酸濃度達(dá)50～250 nmol/ml，搖勻，過濾，利用氨基酸自動(dòng)分析儀檢測(cè)氨基酸組成成分及含量。具體操作參照GB/T 18246—2000[7]。

2 結(jié)果與討論

2.1 菌株生長(zhǎng)曲線（見圖1、圖2）

圖2 嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)曲線

在工業(yè)發(fā)酵的過程中，種子液的培養(yǎng)時(shí)間對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品的品質(zhì)至關(guān)重要。經(jīng)過培養(yǎng)達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末期的種子液，活菌數(shù)達(dá)到最大值，且菌體保持較高的活性，有利于縮短發(fā)酵時(shí)的延滯期從而提高生產(chǎn)效率。通過研究發(fā)酵菌株的生長(zhǎng)曲線，能確定種子液的最佳培養(yǎng)時(shí)間[8]。由圖1可知，培養(yǎng)6 h后枯草芽孢桿菌進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，12 h時(shí)到達(dá)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末期，培養(yǎng)14 h后進(jìn)入穩(wěn)定生長(zhǎng)期，培養(yǎng)18 h后進(jìn)入衰亡期。由圖2可知，培養(yǎng)4 h后嗜酸乳桿菌進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，16 h時(shí)到達(dá)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末期，培養(yǎng)18 h后進(jìn)入穩(wěn)定生長(zhǎng)期，培養(yǎng)22 h后進(jìn)入衰亡期。故枯草芽孢桿菌種子液培養(yǎng)時(shí)間為12 h，嗜酸乳桿菌種子液培養(yǎng)時(shí)間為16 h。

2.2 菌種接種比對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響（見圖3）

圖3 嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌的接種比對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響

稱取50 g魚粉加入250 ml錐形瓶中，按料水比1∶1、混合菌接種量5%、發(fā)酵溫度35℃、發(fā)酵時(shí)間24 h進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn)，根據(jù)嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌菌種接種比（3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3）設(shè)置試驗(yàn)組。由圖3可見，隨著枯草芽孢桿菌比例的提高和嗜酸乳桿菌比例的降低，小肽含量由19.60%提高至23.52%，增加了3.92%；揮發(fā)性鹽基氮含量由38.9 mg/100 g提高至44.8 mg/100 g，增加了5.9 mg/100 g。枯草芽孢桿菌比例的提高使蛋白酶的產(chǎn)量上升，魚粉中更多的大分子蛋白轉(zhuǎn)化為小分子的肽，表現(xiàn)為小肽含量的提高。但枯草芽孢桿菌在發(fā)酵的過程中產(chǎn)生了大量的代謝產(chǎn)物，同時(shí)也增加了揮發(fā)性鹽基氮的含量。相反，在嗜酸乳桿菌比例較高的情況下，雖然小肽含量相對(duì)減少，但避免了魚粉中蛋白質(zhì)的過度分解。同時(shí)，嗜酸乳桿菌產(chǎn)生的乳酸也能在一定程度上抑制雜菌的生長(zhǎng)和減少揮發(fā)性鹽基氮的產(chǎn)生。王凱英等[9]發(fā)現(xiàn)添加了乳酸的飼料低溫保存45 d后，其酸價(jià)、羰基值和揮發(fā)性鹽基氮含量均低于同等保存條件下的普通飼料，大腸桿菌菌落數(shù)和腹瀉率也有所下降，這與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。在嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌的接種比為1∶2時(shí)，發(fā)酵魚粉小肽含量為23.36%，較1∶1菌種接種比增長(zhǎng)率為5.94%；揮發(fā)性鹽基氮含量為43.9 mg/100 g，較1∶1菌種接種比增長(zhǎng)率為5.78%，小肽含量增長(zhǎng)率高于揮發(fā)性鹽基氮含量增長(zhǎng)率。當(dāng)進(jìn)一步提高枯草芽孢桿菌的比例至1∶3時(shí)，發(fā)酵魚粉小肽含量為23.52%，增長(zhǎng)率僅為0.68%，而揮發(fā)性鹽基氮含量增長(zhǎng)率為2.05%，高于小肽含量增長(zhǎng)率。綜合考慮，確定嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌接種比為1∶2。

2.3 料水比對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響（見圖4）

圖4 料水比對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響

稱取50 g魚粉加入250 ml錐形瓶中，按菌種接種比（嗜酸乳桿菌∶枯草芽孢桿菌）1∶2、混合菌接種量5%、發(fā)酵溫度35℃、發(fā)酵時(shí)間24 h進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn)，根據(jù)料水比（1∶0.6、1∶0.8、1∶1、1∶1.2、1∶1.4）設(shè)置試驗(yàn)組[10]。由圖4可見，隨著含水量的提高，發(fā)酵魚粉小肽含量先增加后減少，在料水比為1∶1時(shí)達(dá)到最大值23.32%；當(dāng)料水比介于1∶0.6至1∶1之間時(shí)，揮發(fā)性鹽基氮含量先增加后減少，在料水比為1∶1時(shí)達(dá)到最小值43.4 mg/100 g。當(dāng)含水量高于50%（料水比1∶1）后，揮發(fā)性鹽基氮含量迅速上升，在料水比1∶1.4時(shí)達(dá)到70.9 mg/100 g，這可能是因?yàn)樵诟邷?、高水分條件下，微生物生長(zhǎng)旺盛，蛋白酶活性增強(qiáng)，導(dǎo)致魚粉蛋白被過度分解，產(chǎn)生大量的揮發(fā)性鹽基氮[11]。試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，在料水比為1∶1.2和1∶1.4的條件下，發(fā)酵底物較稀濕粘連，發(fā)酵后期更是液化嚴(yán)重，不利于發(fā)酵產(chǎn)物下游處理。綜合考慮，確定料水比為1∶1。

2.4 接種量對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響（見圖5）

稱取50 g魚粉加入250 ml錐形瓶中，按菌種接種比（嗜酸乳桿菌∶枯草芽孢桿菌）1∶2、料水比1∶1、發(fā)酵溫度35℃、發(fā)酵時(shí)間24 h進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn)，根據(jù)接種量（1%、3%、5%、7%、9%）設(shè)置試驗(yàn)組。揮發(fā)性鹽基氮是指動(dòng)物性食品由于酶和細(xì)菌的作用，在腐敗過程中，使蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生氨以及胺類等堿性含氮物質(zhì)。揮發(fā)性鹽基氮含量反映了發(fā)酵魚粉的氨基酸損失和腐敗程度，因此在發(fā)酵生產(chǎn)中應(yīng)盡量減少揮發(fā)性鹽基氮的產(chǎn)生[12]。由圖5可見，隨著接種量的增大，小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量總體上都增加。當(dāng)接種量為9%時(shí)，小肽含量達(dá)到25.90%，揮發(fā)性鹽基氮含量也高達(dá)59.9 mg/100 g。接種量為5%的發(fā)酵魚粉，揮發(fā)性鹽基氮僅為42.5 mg/100 g，相對(duì)于接種量9%的發(fā)酵魚粉降低了29.05%；小肽含量為24.77%，僅比接種量9%的發(fā)酵魚粉低1.13%。綜合考慮，確定接種量為5%。

圖5 接種量對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響

2.5 發(fā)酵溫度對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響（見圖6）

圖6 發(fā)酵溫度對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響

稱取50 g魚粉加入250 ml錐形瓶中，按菌種接種比（嗜酸乳桿菌∶枯草芽孢桿菌）1∶2、料水比1∶1、混合菌接種量5%、發(fā)酵時(shí)間24 h進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn)，根據(jù)發(fā)酵溫度（25、30、35、40、45 ℃）設(shè)置試驗(yàn)組。溫度通過綜合影響各類代謝反應(yīng)對(duì)微生物的生長(zhǎng)產(chǎn)生作用，具體表現(xiàn)在兩方面：一是隨著環(huán)境溫度的上升，微生物細(xì)胞中生物化學(xué)反應(yīng)速度加快；二是隨著溫度的上升，細(xì)胞中對(duì)溫度較為敏感的組分（蛋白質(zhì)、核酸等）可能會(huì)受到不可逆的破壞。溫度過高會(huì)破壞細(xì)胞膜中的結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)基的溶氧量[13]。由圖6可見，隨著溫度的上升，小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量總體逐漸升高。當(dāng)發(fā)酵溫度為45℃時(shí)，小肽含量達(dá)到24.97%，揮發(fā)性鹽基氮含量也高達(dá)72.3 mg/100 g。揮發(fā)性鹽基氮過高不僅使發(fā)酵魚粉產(chǎn)生氨臭味、適口性變差，嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物中毒[12]。發(fā)酵溫度為35℃的發(fā)酵魚粉，揮發(fā)性鹽基氮僅為56 mg/100 g，相對(duì)于發(fā)酵溫度為45℃的發(fā)酵魚粉揮發(fā)性鹽基氮含量降低了22.54%；小肽含量為23.55%，僅比發(fā)酵溫度為45℃的發(fā)酵魚粉低1.42%。綜合考慮，確定發(fā)酵溫度為35℃。

2.6 發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響（見圖7）

圖7 發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵魚粉小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量的影響

稱取50 g魚粉加入250 ml錐形瓶中，按菌種接種比（嗜酸乳桿菌∶枯草芽孢桿菌）1∶2、料水比1∶1、混合菌接種量5%、發(fā)酵溫度35℃進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn)，根據(jù)發(fā)酵時(shí)間（12、24、36、48、60 h）設(shè)置試驗(yàn)組。由圖7可見，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，菌群大量生長(zhǎng)，在微生物的作用下小肽含量逐漸升高。但微生物的代謝產(chǎn)物也不斷累積，揮發(fā)性鹽基氮含量也逐漸升高。發(fā)酵60 h時(shí)，小肽含量達(dá)到22.97%，但揮發(fā)性鹽基氮含量也高達(dá)117.6 mg/100 g。發(fā)酵24 h時(shí)，小肽含量達(dá)到22.47%，揮發(fā)性鹽基氮含量達(dá)到77 mg/100 g。隨后小肽含量增長(zhǎng)速度減緩，到發(fā)酵60 h時(shí)，小肽含量?jī)H增長(zhǎng)0.5%，增長(zhǎng)率僅為2.23%。但揮發(fā)性鹽基氮含量迅速增加，到發(fā)酵60 h時(shí)，揮發(fā)性鹽基氮含量增加40.6 mg/100 g，增長(zhǎng)率為52.73%。綜合考慮，選擇發(fā)酵時(shí)間為24 h。

2.7 發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵魚粉總抗氧化活性的影響（見圖8）

圖8 發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵魚粉總抗氧化活性的影響

稱取50 g魚粉加入250 ml錐形瓶中，按菌種接種比（嗜酸乳桿菌∶枯草芽孢桿菌）1∶2、料水比1∶1、混合菌接種量5%、發(fā)酵溫度35℃進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn)。利用水浸提法提取發(fā)酵魚粉小肽，采用總抗氧化能力（T-AOC）檢測(cè)試劑盒（比色法）測(cè)定發(fā)酵魚粉的總抗氧化能力。由圖8可見，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)酵魚粉總抗氧化活性總體逐漸上升。發(fā)酵前24 h，發(fā)酵魚粉總抗氧化能力提升速度最快，增長(zhǎng)率為69.02%；發(fā)酵24～48 h，發(fā)酵魚粉總抗氧化能力提升速度放緩，增長(zhǎng)率為11.46%；發(fā)酵48 h后，發(fā)酵魚粉總抗氧化能力維持在1.61～1.65單位/mg prot.之間。與小肽含量變化規(guī)律（圖7）相結(jié)合分析可以發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵前24 h魚粉的小肽含量高速增長(zhǎng)，使發(fā)酵魚粉的總抗氧化能力也增長(zhǎng)迅速；發(fā)酵24～48 h，雖然小肽含量增長(zhǎng)率僅為0.62%，但發(fā)酵魚粉總抗氧化能力增長(zhǎng)率仍維持在11.46%。Chen等[14]研究表明，小肽具有的抗氧化活性來源于其包含的能與自由基反應(yīng)的某些特殊的供氫基團(tuán)，而這些基團(tuán)只有當(dāng)小肽分子量合適時(shí)，才能得到最大的暴露并與自由基充分作用，發(fā)揮較強(qiáng)的抗氧化作用。發(fā)酵24～48 h，總抗氧化能力增長(zhǎng)率高于小肽含量增長(zhǎng)率是因?yàn)樾‰脑谖⑸锏淖饔孟赂嗑哂锌寡趸δ艿幕鶊F(tuán)得到暴露，抗氧化活性得到提高。并且小肽分子量進(jìn)一步降低，也直接影響其清除自由基的能力[15-16]。同時(shí)，肽分子量的降低必然導(dǎo)致?lián)]發(fā)性鹽基氮的大量產(chǎn)生，這也與揮發(fā)性鹽基氮含量變化規(guī)律（圖7）試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

2.8 發(fā)酵魚粉的氨基酸組成成分分析(見表1)

表1 發(fā)酵魚粉的氨基酸組成成分分析

稱取50 g魚粉加入250 ml錐形瓶中，按菌種接種比（嗜酸乳桿菌：枯草芽孢桿菌）1∶2、料水比1∶1、混合菌接種量5%、發(fā)酵溫度35℃、發(fā)酵時(shí)間24 h進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn)，其發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)酸水解后測(cè)定氨基酸組成成分及其含量。由表1可見，魚粉經(jīng)發(fā)酵處理后，各類氨基酸含量均有所提高，總提高率為30.52%，其中脯氨酸（Pro）提高率最大為57.22%。目前，已知的豬限制性氨基酸有賴氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸、組氨酸等[17]。其他研究也表明，組氨酸、酪氨酸和蛋氨酸等氨基酸具有一定的抗氧化活性[18-19]，且甲硫氨酸易從體內(nèi)流失，需在食物中大量補(bǔ)充[20]。試驗(yàn)結(jié)果表明，魚粉經(jīng)發(fā)酵處理，賴氨酸（Lys）含量提高27.75%、蘇氨酸（Thr）含量提高43.81%、蛋氨酸（Met）含量提高30.00%、組氨酸（His）含量提高32.00%、酪氨酸（Tyr）含量提高33.54%，限制性氨基酸和抗氧化能力都獲得了顯著提高，適合應(yīng)用于豬飼料。

3 結(jié)論

本文以兩個(gè)重要參數(shù)小肽含量和揮發(fā)性鹽基氮含量作為指標(biāo)，從菌種接種比、料水比、接種量、發(fā)酵溫度和發(fā)酵時(shí)間等5個(gè)因素對(duì)混合菌固態(tài)發(fā)酵制備發(fā)酵魚粉的工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳固態(tài)發(fā)酵魚粉的條件是：菌種接種比(嗜酸乳桿菌：枯草芽孢桿菌)1∶2、料水比1∶1、接種量5%、發(fā)酵溫度35℃、發(fā)酵時(shí)間24 h，此條件下，發(fā)酵魚粉小肽含量為24.77%，較普通魚粉提高率為25%以上；揮發(fā)性鹽基氮為42.5 mg/100 g，較普通魚粉降低55%以上，符合GB/T 19164—2003對(duì)魚粉揮發(fā)性鹽基氮含量的要求[21]?？偪寡趸芰?.44單位/mg prot.，較普通魚粉提升70%以上，具有清除生物體內(nèi)過量自由基的巨大潛力，可應(yīng)用于預(yù)防自由基誘發(fā)的疾病[5]。另外，發(fā)酵魚粉中，賴氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸、組氨酸等限制性氨基酸的含量都有了顯著提高，符合豬飼料對(duì)限制性氨基酸的要求，能有效保障動(dòng)物體內(nèi)對(duì)限制性氨基酸的需求。綜上，發(fā)酵魚粉較傳統(tǒng)的普通魚粉有巨大的優(yōu)勢(shì)，應(yīng)用于飼料中具有廣闊的市場(chǎng)前景。