賓冬梅，戴麗丹，2，李玉中

（1.衡陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)與環(huán)境學(xué)院，湖南衡陽(yáng)421008；2.婁底市第一中學(xué)城南校區(qū)，湖南婁底417000）

青霉啤酒糟培養(yǎng)基配方優(yōu)化研究

賓冬梅1，戴麗丹1，2，李玉中1

（1.衡陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)與環(huán)境學(xué)院，湖南衡陽(yáng)421008；2.婁底市第一中學(xué)城南校區(qū)，湖南婁底417000）

為了更好地利用啤酒糟，從富含纖維素的土壤中分離和篩選纖維素高效降解的青霉，在純啤酒糟中加入不同比例的N源、C源配制不同的培養(yǎng)基，接種等量活化后的青霉孢子懸浮液，觀察菌絲生長(zhǎng)情況以及測(cè)定菌株的酶活力和產(chǎn)生的孢子數(shù)，篩選促進(jìn)菌株生長(zhǎng)的最優(yōu)配方。結(jié)果表明，最優(yōu)N源是胰蛋白胨，最適比例為25∶1；最優(yōu)C源是乳糖，最適比例為25∶1；這2種化合物混合，N源、C源分別為25∶1，30∶1時(shí)，菌絲生長(zhǎng)最旺盛，產(chǎn)孢子數(shù)最多，為7.80×109個(gè)/mL；N源、C源分別為30∶1，25∶1時(shí)，羧甲基纖維素鈉（CMCNa）酶活力最高，達(dá)476 U/mL。表明啤酒糟可以作為青霉的優(yōu)良培養(yǎng)基，對(duì)選育優(yōu)良的啤酒糟纖維素分解菌具有一定的指導(dǎo)意義。

青霉1-4；啤酒糟；N源；C源；纖維素酶

啤酒糟是生產(chǎn)啤酒的主要原料大米、麥芽等經(jīng)糊化、糖化工藝進(jìn)行過(guò)濾或壓濾之后殘留的固體物質(zhì)，主要成分包括蛋白質(zhì)、纖維組分、維生素、脂肪、礦物質(zhì)及淀粉[1]等，且含水量大，容易變質(zhì)。啤酒企業(yè)直接將啤酒糟作為粗飼料銷售，因纖維含量高、適口性差，養(yǎng)殖戶不能完全接收[2-5]，不少企業(yè)將其作為廢棄物排放，不僅造成資源浪費(fèi)，甚至產(chǎn)生嚴(yán)重的環(huán)境污染。針對(duì)啤酒糟粗纖維及粗蛋白高的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)，優(yōu)選出纖維素酶高產(chǎn)菌，將纖維素分解成可供利用的糖類，再經(jīng)酵母菌和枯草芽孢桿菌進(jìn)行二次混菌發(fā)酵，生產(chǎn)出高微生物蛋白啤酒糟飼料或微生態(tài)制劑，達(dá)到立體開(kāi)發(fā)啤酒糟的目的。

目前，國(guó)內(nèi)外產(chǎn)纖維素酶的主要菌種有曲酶、木霉等[6-11]，暫時(shí)無(wú)利用青霉菌種的報(bào)道。本試驗(yàn)從富含纖維素的土壤中分離和篩選纖維素高效降解青霉，以啤酒糟為主料，以加入不同C源、N源的比例來(lái)觀察青霉生長(zhǎng)數(shù)目與形態(tài)，從而得出青霉產(chǎn)纖維素酶活性最高的培養(yǎng)配方，為啤酒糟開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料試驗(yàn)所用啤酒糟取自衡陽(yáng)燕京啤酒廠，經(jīng)過(guò)干燥，過(guò)0.149 mm篩，儲(chǔ)存?zhèn)溆?；從富含纖維的土壤中提取活性菌種，在實(shí)驗(yàn)室鑒定為青霉。

1.1.2 富集培養(yǎng)基濾紙條液體培養(yǎng)基：NaCl 0.1 g，（NH4）2SO43.0 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.005 g，KH2PO41.0 g，MnSO4·H2O 0.001 6 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，ZnSO4· 7H2O 0.001 7 g，CaCl20.1 g，CoCl20.002 g，蒸餾水1 000 mL（將5 mL混合液加入試管，之后再放入1 cm×6 cm的濾紙條滅菌即是濾紙條液體培養(yǎng)基），pH值6.5。活化培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂18 g，蒸餾水1 000 mL。參照方中達(dá)[12]方法配制。剛果紅纖維素瓊脂培養(yǎng)基[13]：KH2PO40.5 g，MgSO40.25 g，瓊脂14 g，明膠2 g，纖維素粉1.88 g（纖維素粉預(yù)先經(jīng)1 mmol/L鹽酸冷處理12 h，以水清洗無(wú)鹽酸后用來(lái)配制培養(yǎng)基），剛果紅0.2 g，蒸餾水1 000 mL，pH值7.0。

1.1.3 試驗(yàn)儀器DHG-9240型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，寧波江南儀器廠；722S可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；FA2004N電子天平，河南兄弟儀器設(shè)備有限公司；HH-（S）6數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市安普實(shí)驗(yàn)儀器廠；SW-SJ-1F單人雙面潔凈工作臺(tái)，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；SPX-150BSH-Ⅲ生化培養(yǎng)箱，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；BXM-30R立式壓力蒸汽滅菌器，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；移液槍，上海壘固儀器有限公司。

1.1.4 試驗(yàn)用品錐形瓶（若干），培養(yǎng)皿（若干），接種環(huán)，酒精燈，1 000 μL規(guī)格移液槍，1 mL規(guī)格移液槍頭（若干），50～100 mL規(guī)格小燒杯（若干），滴管，血球計(jì)數(shù)板，酒精，無(wú)菌薄膜，脫脂棉，紗布，細(xì)線，標(biāo)簽紙，廢報(bào)紙等。

1.1.5 試驗(yàn)藥品葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉、麥芽糖、胰蛋白胨、酵母粉、硫酸銨、牛肉膏、尿素、滅菌水、吐溫-80、NaOH溶液，酒石酸鉀鈉、結(jié)晶酚、無(wú)水亞硫酸鈉、磷酸氫二鈉液、3，5-二硝基水楊酸、羧甲基纖維素鈉（CMCNa）、1 g/mL標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 青霉的分離與鑒定在衡陽(yáng)市的郊區(qū)及祁東縣采集稻田土壤樣本，經(jīng)無(wú)菌水混合，充分振蕩，滅菌紗布過(guò)濾，靜置，上清液接種于濾紙條液體培養(yǎng)基進(jìn)行富集培養(yǎng)3 d，取富集后的培養(yǎng)液涂布接種到PDA培養(yǎng)基平板（倒平板之前加100 μL/mL的青霉液和硫酸鏈霉素）上，恒溫培養(yǎng)，進(jìn)行菌株分離，將分離純化得到的菌株活化并配制成孢子懸浮液，分別點(diǎn)接到剛果紅纖維素瓊脂培養(yǎng)基中，3次重復(fù)，恒溫培養(yǎng)，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑和透明圈直徑。根據(jù)菌落生長(zhǎng)狀態(tài)、透明圈大小、透明圈清晰程度及菌落和透明圈的比值，篩選菌株。用顯微鏡觀察菌絲及孢子梗形狀，并用油鏡觀察其孢子形態(tài)，參閱《中國(guó)真菌志》[14]等鑒定為青霉，命名為青霉1-4。

1.2.2 C源、N源的最優(yōu)配方

1.2.2.1 青霉1-4孢子液的制備將青霉1-4接種于活化培養(yǎng)基上，于25℃培養(yǎng)5～6 d進(jìn)行活化后，取10 mL無(wú)菌生理鹽水洗下孢子，加1滴吐溫-80打散孢子團(tuán)塊，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，調(diào)整孢子濃度至106個(gè)/mL，用于下面的接種試驗(yàn)。

1.2.2.2 最適N源的篩選與比例分別以酵母粉、硫酸銨、胰蛋白胨、牛肉膏、尿素為N源，使加入的總N量為5%，加入10 g啤酒糟中，每種N源3個(gè)重復(fù)，接種青霉1-4，用封口膜封口，置于25℃恒溫箱中培養(yǎng)6 d，觀察菌株長(zhǎng)勢(shì)，選出最優(yōu)的N源。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)定啤酒糟的量和最優(yōu)N源的比例分別為5∶1，10∶1，15∶1，20∶1，25∶1，40∶1等6個(gè)處理，即往6個(gè)35 g滅菌的啤酒糟中分別加入7.0，3.5，2.3，1.8，1.4，0.9 g最優(yōu)N源混勻，每處理各分裝入已滅菌的3個(gè)培養(yǎng)皿（直徑90 mm）中，然后接種青霉1-4，用封口膜封口，置于25℃恒溫箱中培養(yǎng)6 d，觀察結(jié)果。

1.2.2.3 最適C源的篩選與比例取C源分別為淀粉、葡萄糖、蔗糖、乳糖各0.5 g，加入10 g的啤酒糟中，每種C源3個(gè)重復(fù)，接種青霉1-4，用封口膜封口，置于25℃恒溫箱中培養(yǎng)6 d，觀察菌株長(zhǎng)勢(shì)，選出最優(yōu)C源。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)定啤酒糟的量和最優(yōu)C源的比例分別為20∶1，25∶1，30∶1，35∶1，40∶1等5個(gè)處理，即往10 g滅菌的啤酒糟中分別加入0.5，0.4，0.33，0.29，0.25 g最優(yōu)C源混勻，每處理各分裝入已滅菌的3個(gè)培養(yǎng)皿（直徑90 mm）中，然后接種青霉1-4，用封口膜封口，置于25℃恒溫箱中培養(yǎng)6 d，觀察結(jié)果。

1.2.2.4 C源、N源的最優(yōu)配方根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)定啤酒糟的量，最佳C源、N源同啤酒糟的質(zhì)量比例分別設(shè)為（20∶1，20∶1），（20∶1，25∶1），（20∶1，30∶1），（25∶1，20∶1），（25∶1，25∶1），（25∶1，30∶1），（30∶1，20∶1），（30∶1，25∶1），（30∶1，30∶1）9組進(jìn)行處理，另設(shè)置一個(gè)不加C源、N源的空白對(duì)照組，每處理3個(gè)重復(fù)。每處理根據(jù)比例分別加入30 g啤酒糟中混勻，各分裝入已滅菌的3個(gè)培養(yǎng)皿（直徑90 mm）中，然后接種青霉1-4，用封口膜封口，置于25℃恒溫箱中培養(yǎng)6 d，觀察試驗(yàn)。

1.2.3 酶活力與孢子數(shù)測(cè)定

1.2.3.1 試劑的配制DNS試劑：將6.3 g的3，5-二硝基水楊酸和2 mol/L NaOH溶液262 mL，加到500 mL含有185 g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5 g結(jié)晶酚和5 g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加蒸餾水定容至1 000 mL，貯于棕色瓶中保存，靜置7 d后使用。

pH值為5.0的檸檬酸緩沖液：制取0.2 mol/L磷酸氫二鈉液（稱取7.16 g磷酸氫二鈉溶解于蒸餾水中，定容至100 mL）和0.1 mol/L的檸檬酸液（稱取2.1 g檸檬酸溶解于蒸餾水中定容至100 mL），取磷酸氫二鈉液24.3 mL、檸檬酸液25.7 mL混勻。

羧甲基纖維素溶液：準(zhǔn)確稱取2.0 g羧甲基纖維素鈉鹽溶于200 mL水中，沸水浴中加熱至溶化，過(guò)濾，取濾液100 mL，加檸檬酸緩沖液20 mL、蒸餾水40 mL，混勻，貯存于冰箱中備用。

1 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取80℃烘至恒質(zhì)量的葡萄糖（AR）100 mg，置于小燒杯中，加入少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100 mL，混勻，4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取7支25 mL具塞刻度試管編號(hào)，分別加入質(zhì)量濃度為1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL，蒸餾水2，1.8，1.6，1.4，1.2，1.0，0.8 mL和DNS試劑1.5 mL，搖勻并在水浴中準(zhǔn)確加熱5 min后取出，冰浴至室溫，蒸餾水定容至25 mL，加塞后混勻，在波長(zhǎng)540 nm處測(cè)定光密度值，以光密度值為縱坐標(biāo)、葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3.3 羧甲基纖維素鈉酶活力的測(cè)定[15-16]各培養(yǎng)基中的啤酒糟及空白對(duì)照的啤酒糟加蒸餾水100 mL，40℃水浴振蕩浸提1 h，脫脂棉過(guò)濾，濾液于3500r/min下離心5min，上清液即粗酶液。25mL具塞試管中加入1.5 mL以pH值5.0檸檬酸緩沖液配制的1%羧甲基纖維素鈉溶液，置于50℃水浴中預(yù)熱5 min。加入0.5 mL粗酶液，搖勻，50℃準(zhǔn)確反應(yīng)40 min，之后加入DNS試劑1.5 mL，放入沸水浴顯色5 min，取出后立即置于冰水中冷卻至室溫，定容至10 mL，搖勻。在波長(zhǎng)540 nm條件下測(cè)定其吸光值。

酶活單位的定義：上述反應(yīng)條件下，每分鐘催化纖維素水解生成1 μg葡萄糖的酶量為1個(gè)酶活力單位，用U/mL表示。

其中，S為樣品平均吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上相對(duì)應(yīng)的葡萄糖含量（mg）；D為定容的體積（mL）；V為參與反應(yīng)的粗酶液體積（mL）；T為反應(yīng)時(shí)間（min）。1.2.3.4孢子數(shù)的測(cè)定用生理鹽水洗脫下生長(zhǎng)于啤酒糟培養(yǎng)基上（每皿1/8體積）的青霉孢子（每皿加入10 mL滅菌生理鹽水，用三角玻璃涂棒在菌落上輕輕劃動(dòng)，使孢子洗下），加入一滴吐溫-80將孢子打散，取一滴用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)。

使用1 mm×1 mm方格計(jì)數(shù)，25×16型的血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)公式：酵母細(xì)胞數(shù)（個(gè)/mL）＝80個(gè)小方格細(xì)胞總數(shù)/80×400×10 000×稀釋倍數(shù)×8。

2 結(jié)果與分析

2.1 N源的篩選

2.1.1 最適N源在分別加有酵母粉、硫酸銨、胰蛋白胨、牛肉膏、尿素5種不同N源的啤酒糟培養(yǎng)基中，于恒溫培養(yǎng)箱中25℃下培養(yǎng)5～6 d后，觀察青霉菌株的長(zhǎng)勢(shì)發(fā)現(xiàn)，加入了硫酸銨、尿素、牛肉膏的啤酒糟比較濕潤(rùn)黏稠，表面未見(jiàn)菌絲和孢子生長(zhǎng)。對(duì)加入了酵母粉和胰蛋白胨的培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，加入了胰蛋白胨的培養(yǎng)皿中青霉1-4的菌絲覆蓋啤酒糟的面積更加密集（圖1）。因此，最優(yōu)N源為胰蛋白胨。

2.1.2 最適N源的比例確定根據(jù)已得知的最優(yōu)N源，將等量啤酒糟與所加N源的量設(shè)置成梯度分別為5∶1，10∶1，15∶1，20∶1，25∶1，40∶1的培養(yǎng)基，于25℃恒溫培養(yǎng)箱中統(tǒng)一培養(yǎng)5～6 d，經(jīng)觀察，胰蛋白胨為25∶1的培養(yǎng)基中白色絨毛狀的菌絲覆蓋密集度大于其他比例，而5∶1和10∶1這2個(gè)處理中的菌絲生長(zhǎng)非常稀疏，明顯差于15∶1的處理，因而，將其中的4個(gè)生長(zhǎng)較好的處理進(jìn)行了拍照對(duì)比（圖2）。

為減少試驗(yàn)誤差，按上述方法重復(fù)試驗(yàn)，培養(yǎng)相同的時(shí)間，發(fā)現(xiàn)2次試驗(yàn)都是一致的，25∶1含氮培養(yǎng)基中的青霉1-4長(zhǎng)勢(shì)最好，所以，得出最適N源比例為25∶1。

2.2 C源的篩選

2.2.1 C源的篩選在分別加有葡萄糖、乳糖、淀粉、蔗糖4種不同C源的啤酒糟培養(yǎng)基中，于恒溫培養(yǎng)箱中25℃下培養(yǎng)5～6 d后，觀察青霉菌株的長(zhǎng)勢(shì)發(fā)現(xiàn)，加入了乳糖的啤酒糟中表面有覆蓋灰綠色絨毛狀的孢子，啤酒糟間還長(zhǎng)有白色菌絲，其長(zhǎng)勢(shì)比加入淀粉、葡萄糖、蔗糖的啤酒糟要明顯，所以，最優(yōu)C源為乳糖，下一步將通過(guò)設(shè)定啤酒糟的量和最優(yōu)C源的不同比例，來(lái)研究青霉1-4最適生長(zhǎng)比例（圖3）。

2.2.2 最適C源的比例確定根據(jù)已得知的最優(yōu)C源，將等量啤酒糟與所加C源的量設(shè)置成梯度分別為20∶1，25∶1，30∶1，35∶1，40∶1的培養(yǎng)基，于25℃恒溫培養(yǎng)箱中統(tǒng)一培養(yǎng)，經(jīng)觀察，乳糖比例為30∶1，35∶1，40∶1的3組培養(yǎng)基菌絲和孢子長(zhǎng)勢(shì)不明顯，所以，將乳糖比例為20∶1，25∶1以及空白對(duì)照組進(jìn)行了對(duì)比拍照，發(fā)現(xiàn)乳糖為25∶1的培養(yǎng)基中基本被灰綠色絨毛狀的菌絲和孢子所覆蓋，而且蓋度大于乳糖20∶1以及空白對(duì)照組（圖4）。

為減少試驗(yàn)誤差，按上述方法重復(fù)試驗(yàn)，培養(yǎng)相同的時(shí)間，發(fā)現(xiàn)2次試驗(yàn)都是25∶1的含C培養(yǎng)基中的青霉1-4長(zhǎng)勢(shì)最好，所以，得出最適C源比例為25∶1。

2.3 N源、C源的最佳配比

根據(jù)篩選試驗(yàn)結(jié)果可知，最優(yōu)N源胰蛋白胨產(chǎn)青霉菌絲最多，其比例為25∶1，最優(yōu)C源乳糖產(chǎn)青霉孢子數(shù)最多，其比例也為25∶1，將N源20∶1，25∶1，30∶1的比例與C源20∶1，25∶1，30∶1的比例混合交叉于等量啤酒糟中，于25℃恒溫培養(yǎng)箱中統(tǒng)一培養(yǎng)（圖5），根據(jù)測(cè)定各比例的啤酒糟的酶活力以及孢子數(shù)目，可得出適宜青霉生長(zhǎng)的最優(yōu)條件為胰蛋白胨比例25∶1，乳糖比例25∶1。

2.4 羧甲基纖維素鈉酶活力測(cè)定結(jié)果

2.4.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線通過(guò)測(cè)定不同含量葡萄糖的吸光值，制作出葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖6），根據(jù)y＝0.441 4x＋0.091 6可以計(jì)算出待測(cè)液中的葡萄糖含量。

2.4.2 CMCNa酶活力測(cè)定在2.3試驗(yàn)的10組培養(yǎng)皿中，觀察青霉的長(zhǎng)勢(shì)情況，挑出一個(gè)長(zhǎng)勢(shì)最好組（胰25∶1、乳30∶1），2個(gè)長(zhǎng)勢(shì)較好組（胰30∶ 1、乳25∶1和胰25∶1、乳25∶1），一個(gè)長(zhǎng)勢(shì)較差組（胰20∶1、乳25∶1）以及空白對(duì)照培養(yǎng)基，分別對(duì)其進(jìn)行酶活力的測(cè)定。由表1可知，胰30∶1、乳25∶1組的酶活力最大，為476 U/mL，明顯高于外觀長(zhǎng)勢(shì)好的CMCNa酶活力，即胰蛋白胨30∶1、乳糖25∶1混合時(shí)酶活力最高。

表1 酶活力的測(cè)定結(jié)果

2.5 不同培養(yǎng)基上青霉1-4產(chǎn)孢子數(shù)

通過(guò)血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)可知，外觀長(zhǎng)勢(shì)最好組產(chǎn)孢子數(shù)量最多，為7.80×109個(gè)/mL，即胰蛋白胨為25∶1、乳糖為30∶1混合時(shí)孢子數(shù)最多（表2）。

表2 孢子數(shù)的測(cè)定

3 結(jié)論與討論

為提高青霉對(duì)啤酒糟的利用率，通過(guò)以啤酒糟為主料研究青霉的培養(yǎng)基配方，探究不同的N源、C源及其比例對(duì)青霉生長(zhǎng)及酶活力的影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明，適宜青霉生長(zhǎng)的最佳N源是胰蛋白胨，最適比例是25∶1；最佳C源是乳糖，最適比例是25∶1；N源胰蛋白胨與C源乳糖混合比為25∶1，30∶1時(shí)，產(chǎn)孢子數(shù)最多，為7.80×109個(gè)/mL，菌絲生長(zhǎng)也最茂盛，但是其酶活力不及胰蛋白胨30∶1、乳糖25∶1組，胰蛋白胨25∶1、乳糖25∶1組和胰蛋白胨20∶1、乳糖25∶1組；N源胰蛋白胨與C源乳糖混合比為30∶1，25∶1時(shí)，CMCNa酶活力達(dá)到476 U/mL。顯示出菌絲生長(zhǎng)的茂盛程度與其產(chǎn)生的孢子數(shù)成正比，但與酶活力并不成正比。表明青霉在基質(zhì)條件適合下處于生長(zhǎng)的旺盛時(shí)期，主要進(jìn)行細(xì)胞的分裂與增生，因而，表現(xiàn)出分泌的酶類相對(duì)減少，可以根據(jù)使用目的選擇不同的培養(yǎng)基質(zhì)。

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Optimization Study of the Penicillium Medium Formula with Brewer's Grains

BIN Dong-mei1，DAI Li-dan1，2，LI Yu-zhong1
（1.College of Life Science and Environment，Hengyang Normal University，Hengyang421008，China；2.Loudi No.1 Middle School，Loudi 417000，China）

To better utilize the brewer's grain,Penicilliumwith efficient degradation of cellulose was separated and screened from soil rich in cellulose.The paper chose some factors including different N source,C source and different proportion of inoculation amount after the activation of spore suspension ofPenicillium,observed mycelium growth situation and determined the number of spores and enzyme activity of strains,screened the optimal formula to promote the growth of the strain.The results showed that the best medium compositions were as follows:the optimal N source was tryptone,the optimal ratio of25∶1;the optimal C source was lactose,the optimal ratio of 25∶1;N source and C source were 25∶1 and 30∶1,respectively,and the mycelium growth was the most vigorous,the maximum number of spore was 7.80×109cells/mL,CMCNa enzyme activity was the highest up to476 U/mL.It shows that brewer's grain can be used as a good medium formula of the Penicillium,and it has a certain guiding significance for the selection of the efficient degradation of cellulose bacteria.

Penicillium sp.1-4;brewer's grains;Nsource;Csoure;cellulase

TS262.5

A

1002-2481（2016）02-0164-06

10.3969/j.issn.1002-2481.2016.02.08

2015-11-03

湖南省自然科學(xué)基金省市聯(lián)合基金項(xiàng)目（14JJ5001）

賓冬梅（1970-），女，湖南衡陽(yáng)人，教授，主要從事農(nóng)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)與利用的教學(xué)及研究工作。