魏麗娜，周文靈，陳迪文，黃 瑩，敖俊華，江 永，盧穎林

(廣東省生物工程研究所(廣州甘蔗糖業(yè)研究所)/ 廣東省甘蔗改良與生物煉制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510316)

銨硝營養(yǎng)對番茄幼苗根系中NR、GS活性及表達(dá)的影響

魏麗娜，周文靈，陳迪文，黃 瑩，敖俊華，江 永，盧穎林*

(廣東省生物工程研究所(廣州甘蔗糖業(yè)研究所)/ 廣東省甘蔗改良與生物煉制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510316)

番茄；全根；分根；NR；GS；基因表達(dá)

1 材料與方法

1.1 植物培養(yǎng)

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用全根和分根2種培養(yǎng)方式。

所有處理均設(shè)置6個(gè)重復(fù)。處理及代碼見表1。

1.3 根系干重測定

收獲時(shí)將地上部和根分開采樣，根系用去離子水洗凈后用吸水紙吸干，經(jīng)殺青(105 ℃，30 min)后70 ℃烘至恒重，分別稱重，為樣品的干重。

1.4 組織中NR、GS活性的測定

參照董園園等[9]的方法。

1.5 番茄組織目的基因表達(dá)分析

參考沈靜等[10]對水稻質(zhì)膜質(zhì)子泵基因表達(dá)的方法并進(jìn)行了必要的修改?？俁NA用Trizol提取，提取的RNA樣品經(jīng)1.5 %瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠(ethidium bromide, EB)染色后觀察清晰、無拖尾現(xiàn)象和其他雜帶，認(rèn)為RNA樣品質(zhì)量可靠，然后用RNA直接進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA產(chǎn)物，保存于-20 ℃冰箱。

表1 試驗(yàn)處理及代碼

表2 試驗(yàn)中所用到的引物序列

根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的Lycopersiconesculentumnitrate reductase (NR)的mRNA序列(X14060)和Lycopersiconesculentumglutathione synthetase (GS)的mRNA序列(U15059)設(shè)計(jì)引物。用primer premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物，同時(shí)設(shè)計(jì)Actin基因引物，以作為內(nèi)參之用(表2，引物由南京金思特科技有限公司合成)。先以肌動(dòng)蛋白基因Actin作為內(nèi)參進(jìn)行PCR擴(kuò)增。在此基礎(chǔ)上，分別對LeNR、LeGS基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增。所有PCR產(chǎn)物都進(jìn)行測序驗(yàn)證。

2 結(jié)果與分析

2.1 銨硝營養(yǎng)對番茄幼苗根系干重的影響

圖中不同字母表示處理間差異顯著性達(dá)P < 0.05Different letters indicate significant differences (P < 0.05) between treatments by Fisher’s-test (LSD)圖1 不同形態(tài)N素對番茄幼苗根系干重的影響Fig.1 Effects of different N forms on root dry weight of tomato seedling

圖中不同字母表示處理間差異顯著性達(dá)(P<0.05)Different letters indicate significant differences (P<0.05) between treatments by Fisher’s-test (LSD)圖2 不同形態(tài)N素對番茄幼苗根系中NR(A)和GS(B)活性的影響Fig.2 Effects of different N forms on NR (A) and GS (B) activity in root of tomato seedling

2.2 銨硝營養(yǎng)對番茄幼苗根系中NR和GS活性的影響

2.3 銨硝營養(yǎng)對番茄幼苗根系中NR、GS基因表達(dá)的影響

A，B和C分別代表為100∶0，75∶25和50∶50；D代表N|N處理中供側(cè)；E和F分別代表N|A處理中供側(cè)和供側(cè)；G和H分布代表N|NA處理中側(cè)和供側(cè)圖3 不同形態(tài)N素對番茄幼苗根系中NR和GS基因表達(dá)的影響Fig.3 Effects of different N forms on gene expression of NR and GS in root of tomato seedling

3 討論與結(jié)論

3.1 銨硝營養(yǎng)對根系干重的影響

3.2 銨硝營養(yǎng)對NR、GS活性的影響

3.3 銨硝營養(yǎng)對NR、GS基因表達(dá)的影響

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(責(zé)任編輯 李 潔)

Effects of Different Nitrogen Forms on Activity and Expression of NR and GS in Root of Tomato Seedlings

WEI Li-na, ZHOU Wen-ling, CHEN Di-wen, HUANG Ying, AO Jun-hua, JIANG Yong，LU Ying-lin*

(Guangdong Bioengineering Institute(Guangzhou Sugarcane Industry Research Institute)/ Guangdong Key Lab of Sugarcane Improvement & Biorefinery, Guangdong Guangzhou 510316, China)

Tomato; Whole-root system; Split-root system; NR; GS; Gene expression

1001-4829(2016)09-2093-07

10.16213/j.cnki.scjas.2016.09.015

2015-06-30

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2016A020221018)；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015B070701001)；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014B070705002)；廣東省教育部產(chǎn)學(xué)研結(jié)合項(xiàng)目(2010B090400431)

魏麗娜(1981-)，女，碩士研究生，主要研究方向植物營養(yǎng)和生理生態(tài)研究，E-mail:Tel：020-34275633，*為通訊作者：盧穎林，E-mail:luyinglinbox@126.com。

Q945.1;S641.2

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