許志成

（江蘇省鹽城市亭湖區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇鹽城224002）

江蘇省鹽城市亭湖區(qū)豬口蹄疫O型滅活疫苗免疫效果分析

許志成

（江蘇省鹽城市亭湖區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇鹽城224002）

口蹄疫Aftosa（屬一類傳染?。┧酌翱诏彙?、“辟癀”，是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。其臨診特征為口腔黏膜、蹄部和乳腺皮膚發(fā)生水皰。國(guó)家對(duì)豬口蹄疫的預(yù)防實(shí)行強(qiáng)制免疫政策。近年來江蘇省鹽城市亭湖區(qū)使用O型口蹄疫濃縮滅活疫苗進(jìn)行口蹄疫預(yù)防接種工作。本試驗(yàn)通過對(duì)亭湖區(qū)部分豬場(chǎng)母豬、商品豬的跟蹤免疫和監(jiān)測(cè)來觀察O型口蹄疫抗體消長(zhǎng)規(guī)律，分析存在的問題和原因，為制定適合亭湖區(qū)生豬養(yǎng)殖的口蹄疫疫苗免疫方案提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

在亭湖區(qū)鹽東鎮(zhèn)、新興鎮(zhèn)、黃尖鎮(zhèn)選擇9戶養(yǎng)豬戶（其中一家為亭湖區(qū)東南種豬場(chǎng)，8戶為小型養(yǎng)豬戶）開展試驗(yàn)工作，試驗(yàn)前對(duì)被選場(chǎng)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、臨床檢查，均為健康自繁自養(yǎng)豬群。

1.2 試驗(yàn)疫苗

為政府采購苗，由某公司生產(chǎn)豬口蹄疫O型滅活疫苗（O/Mya98/XJ/2010株+O/GX/09-7株），批號(hào)1510001。

1.3 檢測(cè)試劑

口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒為中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所產(chǎn)品，批號(hào)20150415101-1、2015090101-1。

1.4 主要器材

微量移液器、生化培養(yǎng)箱、微量振蕩器、酶標(biāo)分析儀，檢測(cè)環(huán)境20～25℃。

1.5 方法

1.5.1 試驗(yàn)時(shí)間2015年6月10日至12月25日。

1.5.2 試驗(yàn)分組1）在被選的種豬場(chǎng)中，開展免疫效果比較試驗(yàn)，隨機(jī)選取60頭經(jīng)產(chǎn)二元母豬，分成A、B兩個(gè)組，每組30頭，分別于孕豬產(chǎn)前第30天接種疫苗，其中：A組為說明書標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量，B組為雙倍劑量。2）在其余被選場(chǎng)中，隨機(jī)選取10頭種豬，分成C、D兩個(gè)組，每組5頭，分別于孕豬產(chǎn)前第30天接種疫苗，其中：C組為說明書標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量，D組為雙倍劑量。4組試驗(yàn)豬所產(chǎn)仔豬35日齡首免、60日齡二免。3）由于按照標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量免疫接種的A組試驗(yàn)豬所產(chǎn)商品豬二免后免疫效果不佳，在該組中選取10頭母豬所產(chǎn)健康商品豬再次分為E、F兩個(gè)組，其中：E組于90日齡進(jìn)行三免，免疫劑量同二免標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量；F組為E組的空白對(duì)照組，只進(jìn)行二免，不進(jìn)行三免。

1.5.3 觀察反應(yīng)每次疫苗接種后1～3 d，檢測(cè)直腸溫度，觀察飼料攝入情況，記錄應(yīng)激性倒地及嘔吐等疫苗接種后的副反應(yīng)。

1.5.4 采血日齡對(duì)接種疫苗的所有試驗(yàn)孕豬分別在接種疫苗前和產(chǎn)仔后1 d內(nèi)采血，所產(chǎn)仔豬分別在吮初乳前（0日齡）和產(chǎn)后第1、8、16、24、32日齡采血，商品豬一免后1、7、15、23 d，二免后10、20、30 d，三免后10、20、30 d，分離血清，每窩仔豬隨機(jī)采集半數(shù)仔豬的血清樣本，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)血清中口蹄疫抗體的滴度。

1.5.5 免疫抗體效價(jià)測(cè)定用液相阻斷ELISA方法檢測(cè)口蹄疫O型滅活疫苗免疫抗體效價(jià)，試驗(yàn)采用的口蹄疫O型檢測(cè)試劑盒購自于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，試驗(yàn)步驟按照說明書要求進(jìn)行。抗體檢測(cè)在江蘇省鹽城市亭湖區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.5.6 免疫效果判定口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA的抗體效價(jià)≥26判定為合格，存欄家畜免疫抗體合格率≥80%判定為合格。

1.5.7 數(shù)據(jù)分析采用Excel軟件統(tǒng)計(jì)分析，用lg法將OD值轉(zhuǎn)換為以10為底的負(fù)對(duì)數(shù)表示不同組的仔豬口蹄疫抗體水平。

1.5.8 試驗(yàn)要求1）試驗(yàn)?zāi)肛i接種疫苗前后7 d內(nèi)未使用抗病毒藥物。2）產(chǎn)下的仔豬斷奶前沒有接種豬瘟疫苗和口蹄疫疫苗（本試驗(yàn)均為30～35日齡斷奶）。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)?zāi)肛i口蹄疫抗體檢測(cè)情況

試驗(yàn)組70頭母豬在接種疫苗后，注射4 mL/頭口蹄疫滅活苗的B組，其產(chǎn)生的抗體水平高于注射2 mL/頭的A組，其余各組口蹄疫O型抗體水平生物統(tǒng)計(jì)分析，差異均不顯著。

2.2 仔豬吃初乳前后口蹄疫母源抗體檢測(cè)結(jié)果

母豬體內(nèi)口蹄疫O型抗體水平合格的前提下，其仔豬在吃初乳前的平均抗體水平經(jīng)檢測(cè)為0。吃初乳后的24日齡左右仔豬口蹄疫O型母源抗體水平上升到26以上，達(dá)到頂峰，仔豬O型母源抗體水平基本與母豬體內(nèi)抗體水平相當(dāng)，隨后開始下降（表1）。

表1 部分母豬接種疫苗產(chǎn)生的抗體及其仔豬抗體水平的動(dòng)態(tài)變化

2.3 35日齡閹割仔豬時(shí)注射疫苗和60日齡時(shí)加強(qiáng)免疫注射疫苗后免疫抗體產(chǎn)生情況

結(jié)果表明各組的抗體水平動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)基本一致，即在首免后2～4周，抗體水平并未呈現(xiàn)迅速上升趨勢(shì)，推測(cè)與母源抗體水平影響有關(guān)。從組間不同時(shí)間抗體水平比較看，B組免疫效果最好，其抗體水平上升速度顯著高于其他各組，一免抗體水平上升較緩，23 d時(shí)抗體陽性率為44%；二免后抗體合格率進(jìn)一步上升，并在30 d時(shí)達(dá)到88%。A組在首免后23 d僅31.8%抗體合格，二免后30 d只有59%免疫抗體合格。C組免疫效果最差。見表2、表3。

表2 35日齡首免后仔豬口蹄疫抗體水平的動(dòng)態(tài)變化

表3 60日齡二免后仔豬口蹄疫抗體水平的動(dòng)態(tài)變化

2.4 種豬場(chǎng)和小型養(yǎng)豬戶口蹄疫抗體檢測(cè)情況

免疫保護(hù)率差異較大。通過抗體檢測(cè)情況表明，被檢血樣中，規(guī)模戶和散戶免疫抗體有效保護(hù)率分別為74.47%和47.06%，口蹄疫有效免疫抗體平均合格率規(guī)模戶比散戶高出27.41個(gè)百分點(diǎn)。

2.5 90日齡時(shí)商品豬三免注射疫苗后免疫抗體產(chǎn)生情況

結(jié)果表明，對(duì)照組F組在60～90日齡期間抗體水平基本不變，E組在三免后抗體合格率進(jìn)一步上升，并在接種后30 d時(shí)達(dá)到89.5%，高于F組34個(gè)百分點(diǎn)。見表4。

表4 90日齡三免后商品豬口蹄疫抗體水平的動(dòng)態(tài)變化

3 討論

3.1 種豬場(chǎng)免疫抗體水平高于小型養(yǎng)豬戶

種豬規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)通?？梢宰龅椒忾]式飼養(yǎng)，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件較好，能夠根據(jù)自身的具體情況制定較為合理的疫苗免疫程序，各類疫苗分期免疫有利于充分激活動(dòng)物機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。并且疫苗從冷凍狀態(tài)取出到使用不需要再次經(jīng)過運(yùn)輸環(huán)節(jié)，開啟后基本可以一次用完，從而產(chǎn)生較高的抗體水平。

經(jīng)觀察和分析，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件差是散養(yǎng)戶抗體偏低的主要原因。在試驗(yàn)場(chǎng)中有3戶的免疫工作由村級(jí)專職防疫員負(fù)責(zé)，由于工作量較大，在免疫過程中通常采取口蹄疫及豬瘟疫苗同時(shí)注射的方法，其雖然配備有疫苗保溫箱，但開啟后的疫苗經(jīng)過再次的運(yùn)輸與反復(fù)的取用，在一定程度上影響了免疫效果。

3.2 不同免疫劑量對(duì)免疫抗體影響顯著

從抗體檢測(cè)結(jié)果可知，不同劑量免疫組產(chǎn)生的抗體水平差異較大，加倍劑量的B組二免后抗體水平明顯提高，但是因其劑量加大1倍，成本也增加1倍，其免疫副反應(yīng)也明顯加大。目前，在實(shí)際的防疫工作中，O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果普遍低下，通過本試驗(yàn)的比對(duì)可以反向推測(cè)：1）疫苗產(chǎn)品濃度偏低，按照標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量免疫，免疫效果不佳；2）養(yǎng)殖戶不重視疫苗的2次免疫，由于目前使用的滅活疫苗對(duì)豬刺激性相對(duì)較大，二免劑量達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)，從而導(dǎo)致免疫效果不佳。

3.3 3次免疫對(duì)免疫合格率提升明顯

從追加的商品豬三免對(duì)比試驗(yàn)組E組和F組的抗體檢測(cè)結(jié)果可知，進(jìn)行三免的E組商品豬免疫合格率顯著高于對(duì)照組F組。口蹄疫三免在原來的2次免疫基礎(chǔ)上增加了1次免疫注射工作，對(duì)生豬總體免疫程序的時(shí)間安排造成壓力，成本有所增加（介于A組和B組之間），但是由于沒有增加免疫劑量，免疫副反應(yīng)沒有增加，總體效果優(yōu)于雙倍劑量的B組。

（編輯：郭玉翠）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0113-03

2016-07-26

許志成（1982-），男，江蘇鹽城人，獸醫(yī)師，主要從事規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)動(dòng)物疫病的防控與獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室診斷工作. E-mail:xzc821121@sohu.com