蒲小明，沈會芳，陳永明，張景欣，邱妙文，孫大元，張雷斌，林壁潤

（1.廣東省農(nóng)科院植物保護研究所/廣東省植物保護新技術(shù)重點實驗室，廣東 廣州 510640；2. 廣東省煙草南雄科學(xué)研究所，廣東 南雄 512400）

廣東煙葉主要真菌病害無公害化學(xué)防治藥劑篩選試驗

蒲小明1，沈會芳1，陳永明2，張景欣1，邱妙文2，孫大元1，張雷斌1，林壁潤1

（1.廣東省農(nóng)科院植物保護研究所/廣東省植物保護新技術(shù)重點實驗室，廣東 廣州 510640；2. 廣東省煙草南雄科學(xué)研究所，廣東 南雄 512400）

煙草黑脛病和赤星病已成為廣東煙葉生產(chǎn)的重要真菌病害，開展其無公害化學(xué)藥劑篩選和應(yīng)用研究勢在必行。以煙草黑脛病菌和赤星病菌為研究對象，室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明：烯酰嗎啉和氟吡菌胺的對煙草黑脛病菌的毒力最高（EC50分別為0.56 μg/mL和0.25 μg/mL），苯酰菌胺對煙草黑脛病菌的毒力次之（EC50為1.14 μg/mL）；咪鮮胺對煙草赤星病菌的毒力最高（EC50為0.26 μg/mL），75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑對煙草赤星病菌的毒力較高（EC50為2.66 μg/mL）。田間試驗結(jié)果表明：處理后15 d，推薦藥劑50%烯酰嗎啉可濕性粉劑1 500倍和80%苯酰菌胺可溶性粉劑2 500倍輪換施用防治煙草黑脛病的效果為87.23%；推薦藥劑45%咪鮮胺水乳劑2 000倍和75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑2 500倍輪換施用對煙草赤星病的效果為82.53%；均顯著高于對照藥劑的防治效果。研究結(jié)果為煙葉真菌病害化學(xué)防控提供了技術(shù)指導(dǎo)，促進了煙葉綠色安全生產(chǎn)，保證了煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)。

煙草黑脛病；煙草赤星?。换瘜W(xué)防治；室內(nèi)毒力；藥效試驗

廣東省每年煙葉種植面積1.4萬hm2，主要分布在粵西、粵北地區(qū)，煙葉收入是這些地區(qū)重要的經(jīng)濟支撐。因采取煙稻輪作模式，這些地區(qū)一般在1月底或2月份開始移栽煙苗，平均氣溫處于15～20℃之間，3月份后為南方潮濕季節(jié)，這種氣候特點非常適合煙草黒脛病菌和赤星病菌的流行危害。近年來，調(diào)查發(fā)現(xiàn)廣東煙區(qū)的赤星病菌具有危害廣泛性，且部分地區(qū)危害嚴重，嚴重影響了中下部煙葉的品質(zhì)；煙草黒脛病危害也呈加重趨勢，特別是在坡地?zé)熖镉袝r爆發(fā)成災(zāi)。詢問一些煙農(nóng)發(fā)現(xiàn)：煙農(nóng)對于防治這兩種煙葉真菌病害的防控意識欠缺，防控技術(shù)也較落后。煙農(nóng)一般采取措施為隨意噴施一些常規(guī)性殺菌藥劑，如多菌靈、甲基托布津、代森錳鋅、甲霜靈等，且錯過最佳防治時期，所以在病害危害嚴重年份，經(jīng)濟損失較大。

開展煙葉真菌病害（黒脛病和赤星?。┑臒o公害化學(xué)藥劑篩選，推廣高效低毒低殘留的環(huán)保劑型藥劑的合理使用技術(shù)，對于提高病害防治效果、提高煙葉品質(zhì)和增加種植戶收入具有重要指導(dǎo)作用。我們針對廣東省煙區(qū)主要真菌病害病原菌進行了高效低毒低殘留藥劑的篩選，并對篩選推薦的藥劑進行了田間實驗，為煙草黒脛病和赤星病的提出了重要指導(dǎo)意見。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 病原菌 煙草黑脛病菌：煙草疫霉致病型（Phytophtora parasitica var. nicotianae Tucker），分離于南雄煙田的發(fā)病煙株組織，經(jīng)柯赫式法則確定為煙草黒脛病病原菌，保存?zhèn)溆?；煙草赤星病菌：鏈格孢菌〔Alternaria alternata （Fries） Keissler〕，分離于南雄煙田的發(fā)病煙株組織，經(jīng)柯赫式法則確定為煙草赤星病病原菌，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 殺菌劑原藥及制劑 殺菌劑原藥：95%烯酰嗎啉、97%氟吡菌胺、98%精甲霜靈、93%甲霜靈、97%苯酰菌胺、98%咪鮮胺、97%噁霉靈和95%溴菌腈等，由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所提供。

殺菌劑制劑：75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑（德國拜耳公司），20%烯肟·戊唑醇水懸浮劑（沈陽化工研究院），50%烯酰嗎啉可濕性粉劑（安徽豐樂農(nóng)化有限責(zé)任公司），80%苯酰菌胺可濕性粉劑，58%甲霜靈·代森錳鋅可濕性粉劑（浙江禾本科技有限公司），45%咪鮮胺水乳劑（浙江新興化工股份有限公司），50%多菌靈可濕性粉劑（江蘇揚農(nóng)化工集團有限公司）。

1.1.3 培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200 g，葡萄糖15 g，瓊脂粉15 g，水1 000 mL，馬鈴薯去皮稱重，切碎后水中煮0.5 h，濾液加入葡萄糖和瓊脂粉，攪勻，補充水至1 000 mL，分裝于三角瓶，121℃滅菌30 min后，備用；V8蔬菜汁培養(yǎng)基：美國V8蔬菜罐頭汁150 mL，CaCO30.2g，補充水至1 000 mL，121℃滅菌30 min后，備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 病原菌毒力測定 菌絲生長速率法［1］：煙草赤星病菌（或煙草黒脛病菌）在PDA（或V8）平皿上28℃（或26℃）培養(yǎng)5～6 d后，無菌操作下用6 mm打孔器在菌落邊緣取菌餅。將供試原藥配制成10%制劑，用水稀釋成系列濃度，每濃度藥液適量加入50mL PDA（或V8）瓊脂培養(yǎng)基（45℃）中，使用培養(yǎng)基中殺菌劑有效成分為實驗所需的系列濃度。每50 mL瓊脂培養(yǎng)基平均倒入3個平皿（直徑9 cm），冷卻，然后每平皿中間放入直徑6 mm的病菌瓊脂塊，菌絲面貼培養(yǎng)基，每個濃度3次重復(fù)，以不加藥為對照，28℃（或26℃）條件下培養(yǎng)，待對照長滿平皿后，十字交叉法測定菌落直徑，計算藥劑抑制率和線性回歸方程及相關(guān)參數(shù)。

1.2.2 田間試驗 選擇煙葉真菌病害（赤星病和黑脛?。┌l(fā)病較重的煙地作為試驗用地。煙苗7～8葉期時進行藥劑防治。試驗區(qū)的處理藥劑為篩選的高效藥劑，并選擇合理使用濃度；常規(guī)防治區(qū)的藥劑為50%多菌靈可濕性粉劑1 000倍（赤星?。┖?8%甲霜靈·代森錳鋅可濕性粉劑800倍（黑脛病），施藥兩次；清水為空白對照。試驗區(qū)和常規(guī)防治區(qū)面積均為667 m2，清水對照面積為100 m2。煙葉赤星病采用噴霧法，葉面正反面噴霧至產(chǎn)生水滴；煙葉黒脛病采用基部噴淋法，煙株莖基部和根際土壤進行噴淋。各處理施藥兩次，第一次噴施7 d后各處理區(qū)再施藥一次。第二次施藥10 d和15 d后，每處理區(qū)采用五點調(diào)查法，每點觀察10株煙。病害病情分級標準參照《煙草病蟲害分級與調(diào)查GB/T23222-2008》，依據(jù)各病害病情分級標準記錄各處理發(fā)病情況，計算病情指數(shù)和防治效果。

煙草黑脛病病情分級標準：0級：全株無?。?級：莖部病斑不超過莖圍的1/3，或1/3 以下葉片凋萎；3級：莖部病斑環(huán)繞莖圍1/3～1/2，或1/3～1/2 葉片輕度凋萎；5級：莖部病斑超過莖圍的1/2，但未全部環(huán)繞莖圍，或1/2～2/3 葉片凋萎；7級：莖部病斑全部環(huán)繞莖圍，或2/3 以上葉片凋萎；9級：病株基本枯死。

煙草赤星病病情分級標準：0 級：全葉無病斑；1級：病斑面積占葉片面積的 1%以下；3級：病斑面積占葉片面積的 2%～5%；5級：病斑面積占葉片面積的 6%～10%；7級：病斑面積占葉片面積的 11%～20% ；9級：病斑面積占葉片面積的 21%以上。

采用Excel 2003和DPS軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥劑對煙草黑脛病菌的毒力

菌絲生長速率法測定了6種低毒低殘留藥劑對煙草黑脛病菌的毒力，結(jié)果見表1。烯酰嗎啉、氟吡菌胺、精甲霜靈、甲霜靈、苯酰菌胺和75%肟菌·戊唑醇處理后，其EC50分別為0.56、0.25、4.03、6.95、1.14、2.73 μg/mL，其EC95分別為3.27、1.34、95.28、186.75、19.84、171.97 μg/mL，其中烯酰嗎啉和氟吡菌胺的對煙草黑脛病菌的毒力最高，苯酰菌胺對煙草黑脛病菌的毒力次之。圖1顯示了PDA培養(yǎng)基中添加不同濃度的烯酰嗎啉和氟吡菌胺有效成分對煙草黑脛病菌菌絲生長的抑制作用。選擇烯酰嗎啉、氟吡菌胺和苯酰菌胺作為煙草赤星病菌的推薦藥劑。

表1 不同藥劑對煙草黑脛病菌的毒力

2.2 不同藥劑對煙草赤星病菌的毒力

由表2可知，供試的5種藥劑（咪鮮胺、噁霉靈、溴菌腈、75%肟菌·戊唑醇和20%烯肟·戊唑醇）對煙草赤星病菌的毒力差異較大，其中咪鮮胺的毒力最高，EC50為0.26μg/mL；75%肟菌·戊唑醇的抑菌活性較高，其EC50為2.66μg/mL。圖2為在V8蔬菜汁培養(yǎng)基中添加不同濃度有效成分的咪鮮胺和75%肟菌·戊唑醇對煙草赤星病菌菌絲生長的抑制作用。選擇咪鮮胺和75%肟菌·戊唑醇作為煙草赤星病菌的推薦藥劑。

圖1 不同濃度的殺菌劑對煙草黒脛病菌的抑制作用

表2 不同藥劑對煙草赤星病菌的毒力

圖2 不同濃度的殺菌劑對煙草赤星病菌的抑制作用

2.3 推薦藥劑防治煙草黒脛病和赤星病的田間試驗

基于供試藥劑室內(nèi)毒力測定結(jié)果，選擇實驗區(qū)煙草黒脛病菌使用藥劑為50%烯酰嗎啉1 500倍（第一次）和80%苯酰菌胺2 500倍（第二次），煙草赤星病使用藥劑為45%咪鮮胺2 000倍（第一次）和75%肟菌·戊唑醇2 500倍（第二次）。兩次施藥間隔7 d，第二次施藥后10 d和15 d各處理的病情指數(shù)和防治效果見表3和表4。

推薦藥劑50%烯酰嗎啉1 500倍和75%苯酰菌胺2 500倍防治煙草黒脛病具有較好的防治效果（表3）；試驗區(qū)第二次施藥后10 d和15 d的防治效果分別為85.71%和87.23%，顯著高于對照藥劑58%甲霜靈·代森錳鋅800倍的防治效果。推薦藥劑45%咪鮮胺2 000倍和75%肟菌·戊唑醇2 500倍防治煙草赤星病具有較好的防治效果（表4）；試驗區(qū)第二次施藥后10 d和15 d的防治效果分別為87.33%和82.53%，顯著高于對照藥劑50%多菌靈1 000倍的防治效果。在實際生產(chǎn)中，每種病害采用兩種防治藥劑輪換使用，可有效延緩病菌抗藥性產(chǎn)生，從而提高病害防治效果。

表3 50%烯酰嗎啉和80%苯酰菌胺防治煙草黒脛病田間試驗結(jié)果

表4 45%咪鮮胺和75%肟菌·戊唑醇防治煙草赤星病田間試驗結(jié)果

3 討論

煙草黒脛病菌和赤星病菌的化學(xué)藥劑室內(nèi)毒力測定和田間試驗結(jié)果表明：50%烯酰嗎啉可濕性粉劑1 500倍和80%苯酰菌胺可溶性粉劑2 500倍輪換施用對煙草黒脛病具有較好的防控作用，藥后15 d防治效果達87.23%；45%咪鮮胺水乳劑2 000倍和75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑2 500倍輪換施用對煙草赤星病具有較好的防控效果，藥后15 d防治效果達82.53%，均顯著高于對照藥劑的防治效果，此結(jié)果為煙葉真菌病害的化學(xué)防控提供了技術(shù)參考。

關(guān)于煙葉真菌病害危害國內(nèi)煙區(qū)都有相關(guān)報道，如湖南［2］、貴州［3-4］、安徽［5］、云南［6］、廣西［7］和湖北［8］等。報道證明煙草赤星病危害時間越長，造成煙葉細胞受損及崩解程度越重，品質(zhì)越差，所以建議在染病前進行一次藥劑預(yù)防［9］；赤星病主要對煙株的下二棚葉和上二棚葉造成危害，這也符合廣東省煙區(qū)病害危害特點［10］；煙草黒脛病菌侵入后造成根系活力下降，生長受到一定限制水分運輸受阻，間接或直接影響煙葉的品質(zhì)和產(chǎn)量［11］?；瘜W(xué)防控方面：往年多以甲霜靈、多菌靈、代森錳鋅、甲基托布津等常規(guī)農(nóng)藥品種防治，近年來烯酰嗎啉開始推廣防治煙草黒脛病，但農(nóng)戶偏好長期使用單一農(nóng)藥品種，從而造成病菌抗藥性產(chǎn)生。朱桂林等［12］報道了廣西煙草黑脛病菌已對甲霜靈產(chǎn)生不同程度的抗性，其中以靖西縣的病菌抗藥性最強（EC50為1.0243 μg/mL）；彭麗娟等［13］發(fā)現(xiàn)貴州煙草黑脛病菌對甲霜靈的抗藥性顯著提高，其中南州地區(qū)的病菌抗性倍數(shù)達到9.13倍（EC50為1.4562 μg/mL）；楊天沛等［14］對黔東南州鎮(zhèn)遠縣煙草黑脛病菌進行了烯酰嗎啉毒力EC50為1.19 μg/mL，為抗性中間型菌株，具有耐藥性特點。本試驗結(jié)果表明，煙區(qū)長期使用的一些化學(xué)殺菌劑品種對煙葉真菌病害的防效較差，如多菌靈、甲霜靈和代森錳鋅等，可能是由于病原菌的抗藥性和耐藥性原因造成。如不對煙農(nóng)進行技術(shù)指導(dǎo)，農(nóng)戶則加大藥劑使用濃度，從而可能造成藥害和農(nóng)藥殘留超標。

煙草真菌病害的化學(xué)防控應(yīng)以預(yù)防為主，抓住病害發(fā)生早期進行防控?；瘜W(xué)藥劑選擇應(yīng)以高效低毒低殘留農(nóng)藥的環(huán)保劑型為目的，其中煙草黒脛病菌推薦使用藥劑為烯酰嗎啉、氟吡菌胺和苯酰菌胺單劑及其混配環(huán)保劑型；煙草赤星病菌推薦使用藥劑為咪鮮胺單劑或其混配劑型及75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑等，施藥時應(yīng)輪換使用藥劑品種。因此，科學(xué)安全合理地使用高效低毒低殘留化學(xué)農(nóng)藥是保證煙葉品質(zhì)的關(guān)鍵。

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（責(zé)任編輯 楊賢智）

Screening and test of non-polluted chemicals for controlling main tobacco fungal diseases in Guangdong

PU Xiao-ming1，SHEN Hui-fang1，CHEN Yong-ming2，ZHANG Jing-xin1，QIU Miao-wen2，SUN Da-yuan1，ZHANG Lei-bin1，LIN Bi-run1
（1. Institute of Plant Protection，Guangdong Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of New Technique for Plant protection in Guangdong，Guangzhou 510640，China；2. Nanxiong Tobacco Science Research Institute of Guangdong Province，Nanxiong 512400，China）

s：The tobacco black shank and brown spot have been become the important fungal diseases in Guangdong，so it is necessary to study the screening and application of non-polluted chemicals. In this paper，the research objects were tobacco black shank and brown spot. The results of laboratory bioassay indicated that the toxicities of dimethomorph and fluopicolide against Phytophtora parasitica var. nicotianae were the highest，and the values of median effective concentration （EC50） were 0.56μg/mL and 0.25μg/mL respectively；the toxicity of Phenylamide was lower than that of dimethomorph and fluopicolide，and the EC50was 1.14μg/mL. The toxicity of prochloraz amines against Alternaria alternata was the highest of all，and the EC50was 0.26μg/mL；the toxicity of 75% trifloxystrobin·tebuconazole water dispersible granule （WDG） was lower than that of prochloraz amines，and the EC50was 2.66μg/mL. The results of flied experiments showed of. after a 15 d-treatment，the control effect of rotation application of 50% dimethomorph wettable powder （WP） 1 500× and 80% Phenylamide WP 1 500 × against tobacco black shank was 87.23%；the control effect of rotation application of 45% prochloraz amines emulsion in water （EW） 2 000× and 75% trifloxystrobin·tebuconazole WDG 2 500× against tobacco brown spot was 82.53%；the values of control effect of recommended agents were higher than that of contrast agents （P ＜ 0.05）. The research provided technical guidance for chemical control of tobacco fungal diseases，promoted the green safe production of tobacco，and ensured the yield and quality of tobacco.

tobacco black shank；tobacco brown spot；chemical control；laboratory bioassay；flied experiment

S482.2

A

1004-874X（2016）11-0097-06

2016-08-01

廣東省煙草專賣局科技專項（201309，201544000024059）；廣州市科技計劃項目（2014J4500034）；廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院長基金（201515）

蒲小明（1981-），男，博士，副研究員，E-mail：puxm1981@126.com

林壁潤（1963-），男，博士，研究員，E-mail：linbr@126.com

蒲小明，沈會芳，陳永明，等.廣東煙葉主要真菌病害無公害化學(xué)防治藥劑篩選試驗［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，43（11）：97-102.