劉東順，陸文銓，樸淑娟，熊筱娟

1.宜春學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，江西 宜春 336000；2.第二軍醫(yī)大學(xué)上海長征醫(yī)院，上海 200003

安舒液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

劉東順1，2，陸文銓2，樸淑娟2，熊筱娟1

1.宜春學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，江西 宜春 336000；2.第二軍醫(yī)大學(xué)上海長征醫(yī)院，上海 200003

目的 建立安舒液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對制劑中地膚子、黃柏進(jìn)行定性鑒別。采用高效液相色譜法對制劑中鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿含量進(jìn)行測定，ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）分離，以乙腈0.1%磷酸（1000 mL加50 μL二乙胺）為流動相梯度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測波長284 nm。結(jié)果 薄層色譜分別檢出黃柏中的鹽酸黃柏堿、鹽酸小檗堿及地膚子中的地膚子皂苷Ic。鹽酸小檗堿線性關(guān)系為Y＝23.109X－30.548（r2＝0.999 8），加樣回收率RSD＝2.97%，表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.050 5～2.525 0 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系；鹽酸黃柏堿線性關(guān)系為Y＝10.038X－2.446 6（r2＝0.999 9），加樣回收率RSD＝1.24%，表明鹽酸黃柏堿進(jìn)樣量在0.050 0～2.500 0 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、快速、穩(wěn)定、可靠，重復(fù)性好，可用于安舒液的質(zhì)量控制及評價(jià)。

安舒液；鹽酸小檗堿；鹽酸黃柏堿；高效液相色譜法

安舒液為第二軍醫(yī)大學(xué)上海長征醫(yī)院院內(nèi)制劑，由黃柏、地膚子、白鮮皮、白芷、當(dāng)歸5味藥提取加工而成，具有清熱燥濕、祛風(fēng)止癢功效，用于治療濕疹、皮炎、皮膚瘙癢癥等。本研究采用薄層色譜法（TLC）對方中黃柏、地膚子進(jìn)行鑒別，采用高效液相色譜法（HPLC）對黃柏中的鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿含量進(jìn)行測定，為建立該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀（Agilent，美國），包括G1311C輸液泵、G1329B自動進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱、G4212B-DAD紫外檢測器、Chemstation色譜工作站；十萬分之一天平（Sartorius CPA225D，德國）；旋渦振蕩混和器（WL-901 Vortex，海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；超聲儀（SK7200H型，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。

黃柏對照藥材（批號130801）、地膚子對照藥材（批號130801），購自安徽亳州利鋒藥業(yè)有限公司；鹽酸小檗堿對照品（批號110713-201212.）、鹽酸黃柏堿對照品（批號111895-201303）、地膚子皂苷Ic對照品（批號111723-201404），購自中國食品藥品檢定研究院；安舒液（批號140528、140529、140530），第二軍醫(yī)大學(xué)上海長征醫(yī)院制劑中心提供；乙腈為色譜純（Merck，德國），水為純凈水，其他試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 黃柏

取本品10 mL置于錐形瓶中，加20 mL純水，混勻，再加濃氨水0.5 mL，用乙酸乙酯萃取3次（每次30 mL），合并萃取液，蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成供試品溶液。取黃柏藥材0.1 g，加1%醋酸甲醇20 mL，超聲處理0.5 h，過濾，取濾液蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成對照藥材溶液。取除黃柏外的處方藥材，同法制成陰性對照溶液。另取鹽酸黃柏堿、鹽酸小檗堿對照品，分別制成每1 mL含1 mg的對照品溶液[1]286。照薄層色譜法[2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，取供試品溶液、對照藥材溶液、陰性對照溶液及對照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-水-醋酸（4∶5∶1）[2]的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，以碘化鉍鉀顯色，供試品及對照藥材色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照在相應(yīng)位置上無干擾。

2.2 地膚子

取本品10 mL置于錐形瓶中，加20 mL純水，混勻，再加濃氨水0.5 mL，用乙酸乙酯萃取3次（每次30 mL），合并萃取液，蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成供試品溶液。稱取地膚子1 g，加10 mL甲醇，超聲處理0.5 h，過濾，取濾液蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成對照藥材溶液。取除地膚子外的處方藥材，同法制成陰性對照溶液。另取地膚子皂苷Ic對照品，制成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液[1]114。照薄層色譜法[2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，取供試品溶液、對照藥材溶液、陰性對照溶液及對照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-水-醋酸（4∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰[3]，供試品及對照藥材色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照在相應(yīng)位置上無干擾。

3 鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm），柱號880975-902；流動相：乙腈?0.1%磷酸[1000 mL加50 μL二乙胺（DEA）]梯度洗脫（0～8 min，10%～18%乙腈；8～13 min，18%～30%乙腈；13～20 min，30%乙腈）；檢測波長：284 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品2.02 mg，置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，使其母液濃度為1.01 mg/mL；精密稱取鹽酸黃柏堿對照品2.00 mg，置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，使其母液濃度為1.00 mg/mL。各取上述溶液0.5 mL混合定容至1 mL，制成每毫升含鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿分別為505、500 μg的對照品母液。

3.3 供試品溶液的制備

取本品10 mL置于錐形瓶中，加20 mL純水，混勻，再加濃氨水0.5 mL，用二氯甲烷萃取3次（每次30 mL），合并下層萃取液，45 ℃蒸干，用5 mL甲醇溶解并用初始流動相定容至25 mL，過濾，取續(xù)濾液，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備

取除黃柏外的其余藥材，按安舒液制備方法制成陰性對照品，按“3.3”項(xiàng)下方法制備，即得。

3.5 空白試驗(yàn)

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果顯示陰性對照無干擾，見圖1。

圖1 安舒液中鹽酸黃柏堿、鹽酸小檗堿HPLC圖

3.6 線性關(guān)系考察

將混合對照品貯備液用初始流動相逐級稀釋，制成每毫升含鹽酸小檗堿5.05、0.1、12.625、25.25、50.5、63.12、101、126.25、252.5 μg/mL及鹽酸黃柏堿5.0、10.0、12.5、25.0、50.0、62.5、100、125、250 μg/mL的系列溶液，按上述色譜條件測定，以峰面積對濃度（μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。鹽酸小檗堿：Y＝23.109X－30.548（r2＝0.999 8），表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.050 5～2.525 0 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系；鹽酸黃柏堿：Y＝10.038X－2.446 6（r2＝0.999 9），表明鹽酸黃柏堿進(jìn)樣量在0.050 0～2.500 0 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

3.7 精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液進(jìn)樣10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿的峰面積RSD分別為0.2%、0.8%，表明精密度良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、16、20、24 h進(jìn)樣測定，結(jié)果鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿的峰面積RSD分別為0.33%、0.76%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批安舒液6份，按樣品測定方法測定，鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿的峰面積RSD分別為0.8%、0.4%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

3.10 加樣回收率試驗(yàn)

分別精密稱取6份已知含量的樣品，置于具塞錐形瓶中，精密加入一定量的對照品，按“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，結(jié)果見表1。

?

3.11 樣品測定

按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測定3個(gè)批號的樣品，每批平行3份，結(jié)果見表2。

批號 鹽酸小檗堿 鹽酸黃柏堿140428 0.092 0.031 140429 0.093 0.031 140430 0.090 0.030

4 討論

安舒液制劑液體較黏，輔料較多，需要對其稀釋堿化后再富集測定有效成分含量。本試驗(yàn)先后比較了大孔樹脂柱分離、乙酸乙酯萃取、二氯甲烷萃取等方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用二氯甲烷萃取操作簡便，效果較好。本研究使用同一展開體系對安舒液中君藥黃柏和臣藥地膚子進(jìn)行鑒別，陰性對照無干擾，斑點(diǎn)清晰。

本研究通過總結(jié)現(xiàn)有文獻(xiàn)關(guān)于制劑及黃柏藥材中鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿含量測定方法的報(bào)道[4-9]，先后嘗試了乙腈-乙酸、乙腈-甲酸、乙腈-磷酸體系，發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿拖尾嚴(yán)重，在乙腈-磷酸體系中加入二乙胺可明顯改善鹽酸小檗堿的拖尾現(xiàn)象，峰形改善。本試驗(yàn)對制劑中鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿進(jìn)行含量測定，方法學(xué)考察表明，在本文色譜條件下，其他成分幾乎不干擾其含量測定，系統(tǒng)適用性符合要求，測定方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，能夠有效控制安舒液的質(zhì)量。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

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[3] 陳吉航.婦科栓劑的制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].廣東：廣州中醫(yī)藥大學(xué),2010.

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Study on Quality Standards for Anshu Liquid

LIU Dong-shun1,2, LU Wen-quan2, PIAO Shu-juan2,

XIONG Xiao-juan1(1. College of Chemical and Biological Engineering, Yichun University, Yichun 336000, China; 2. Shanghai Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)

Objective To establish quality standards for Anshu Liquid. Methods Phellodendri Chinensis Cortex and Kochiae Fructus were qualitatively identified by TLC method. The contents of berberine hydrochloride and phellodendrine hydrochloride in the preparation were determined by HPLC method. The chromatographic column was ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm); the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid (0.5% diethylamine) gradient elution; the flow rate was 1.0 mL/min; the detection wavelength was 284 nm. Results Berberine hydrochloride and phellodendrine hydrochloride in Phellodendri Chinensis Cortex and saponin Ic in Kochiae Fructus were detected by TLC method. The linear relationship of berberine hydrochloride in the preparation was Y=23.109X?30.548, r2=0.999 8, RSD=2.97%, showing that the linear range of berberine hydrochloride was 0.050 5–2.525 0 μg. The linear relationship of phellodendrine hydrochloride in the preparation was Y=10.038X?2.446 6, r2=0.999 9, RSD=1.24%, showing that the linear range of phellodendrine hydrochloride was 0.050 0–2.500 0 μg. Conclusion The method is accurate, rapid, stable and reliable, with good reproducibility, which can be used for the quality control and evaluation of Anshu Liquid.

Anshu Liquid; berberine hydrochloride; phellodendrine hydrochloride; HPLC

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.024

R284.1

A

1005-5304(2016)01-0100-03

2015-03-08）

（

2015-03-26；編輯：陳靜）

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高計(jì)劃（14ZJZ04-1）

熊筱娟，E-mail：ycxxxj@163.com