吳先闖，宋衛(wèi)中，宋曉勇，康文藝，侯彥濤，張永州，張曉堅(jiān)，張凌云，盧 紅，劉瑜新（.河南大學(xué)淮河醫(yī)院藥學(xué)部，河南開(kāi)封 7500；.河南大學(xué)中藥研究所，河南開(kāi)封 7500；.河南省醫(yī)藥學(xué)?；A(chǔ)教研室，河南開(kāi)封 7500；.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州 5005）

菝葜乙酸乙酯部位對(duì)H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其機(jī)制研究Δ

吳先闖1＊，宋衛(wèi)中2#，宋曉勇1，康文藝2，侯彥濤3，張永州1，張曉堅(jiān)4，張凌云1，盧 紅1，劉瑜新1（1.河南大學(xué)淮河醫(yī)院藥學(xué)部，河南開(kāi)封 475001；2.河南大學(xué)中藥研究所，河南開(kāi)封 475004；3.河南省醫(yī)藥學(xué)?；A(chǔ)教研室，河南開(kāi)封 475003；4.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州 450052）

目的：探討菝葜乙酸乙酯部位對(duì)肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其機(jī)制。方法：將90只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組（環(huán)磷酰胺，0.02 g/kg，隔日ip給藥1次）和菝葜乙酸乙酯部位低、中、高劑量組[1.0、2.0、4.0 g（生藥）/kg，每天ig給藥2次）。除正常組外，其余各組小鼠復(fù)制移植性實(shí)體瘤模型。造模次日，各給藥組小鼠給予相應(yīng)藥物，正常組和模型組小鼠ig等體積0.5%羧甲基纖維素鈉溶液，持續(xù)14 d。觀察給藥后小鼠體質(zhì)量、瘤質(zhì)量變化，測(cè)定小鼠血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、一氧化氮合酶（NOS）水平及瘤組織血管通透性，并檢測(cè)瘤組織中血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子1（CD31）表達(dá)水平。結(jié)果：與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠的體質(zhì)量、瘤質(zhì)量顯著減少，血清中VEGF、NOS水平顯著升高，瘤組織血管通透性顯著增強(qiáng)（P＜0.05或P＜0.01）；菝葜乙酸乙酯部位中、高劑量組小鼠瘤質(zhì)量顯著減少，血清中VEGF、NOS水平顯著升高，瘤組織的血管通透性顯著增強(qiáng)、CD31表達(dá)水平降低（P＜0.05或P＜0.01）；菝葜乙酸乙酯部位低劑量組小鼠瘤質(zhì)量明顯減少，瘤組織血管通透性增強(qiáng)（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：菝葜乙酸乙酯部位對(duì)H22荷瘤小鼠有一定的抑瘤作用，其作用機(jī)制可能與降低荷瘤小鼠血清中VEGF與NOS水平、使腫瘤血管正?；鸵种颇[瘤新生血管形成有關(guān)。

菝葜；乙酸乙酯部位；抑瘤作用；H22荷瘤小鼠；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；一氧化氮合酶

菝葜（Smilax china L.）又名金剛藤，為百合科菝葜屬植物菝葜的根莖，主要分布于我國(guó)長(zhǎng)江以南，生長(zhǎng)于灌木或中小喬木次生林地區(qū)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，其具有解毒散瘀、祛風(fēng)濕、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等藥理作用[1-2]。目前，中藥菝葜在臨床上主要用于抑菌、抗炎、活血化瘀等，療效顯著[3-4]。據(jù)我國(guó)《本草綱目》記載：“中藥菝葜具有治療惡瘡癰腫作用，常將其作為治療腫瘤疾患的配伍藥物”[5]。本課題前期研究也發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯部位為菝葜主要抗肝癌細(xì)胞活性部位，但其具體的抗腫瘤機(jī)制尚不明確，尤其對(duì)腫瘤血管形成的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。

腫瘤血管形成是腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移與腫瘤新生血管的形成密切相關(guān)[6]。1971年，F(xiàn)olkman J[7]指出通過(guò)阻斷實(shí)體腫瘤的血管生成，腫瘤組織的生長(zhǎng)只能維持在1～2 mm3范圍內(nèi)。因此，腫瘤血管形成是腫瘤治療領(lǐng)域的新作用靶點(diǎn)，也是抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)。鑒于此，筆者擬通過(guò)復(fù)制肝癌H22移植瘤小鼠模型，觀察菝葜乙酸乙酯部位對(duì)荷瘤小鼠血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和一氧化氮合酶（NOS）的影響以及對(duì)瘤組織血管通透性和新生血管形成標(biāo)志物血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子1（CD31）的作用，意在闡明菝葜乙酸乙酯部位抗腫瘤作用機(jī)制，為其臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

UV-2000型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司）；800型酶標(biāo)儀（美國(guó)寶特儀器有限公司）；XDS-500D型倒置熒光顯微鏡（上海蔡康光學(xué)儀器有限公司）；BX43型生物顯微鏡（日本奧林巴斯公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

中藥菝葜購(gòu)于開(kāi)封市天濟(jì)堂藥店（批號(hào)：130812），經(jīng)河南大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定學(xué)叢悅教授鑒定為百合科植物菝葜（Smilax China L.）的根莖；注射用環(huán)磷酰胺（CTX，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)：14051524，純度：98%）；VEGF酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司，批號(hào)：140512）；NOS活性檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20140527）；CD31兔抗多克隆抗體（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）；辣根過(guò)氧化物（HPR）標(biāo)記的羊抗兔抗體（美國(guó)Proteintech公司）；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 動(dòng)物與瘤株

SPF級(jí)KM小鼠90只，體質(zhì)量（20±2）g，♀♂各半，由河南省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（豫）2010-0002]。小鼠H22肝癌瘤株由河南大學(xué)藥學(xué)院杜鋼軍教授饋贈(zèng)，由河南大學(xué)淮河醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心定期在體接種傳代保存。

2 方法

2.1 菝葜乙酸乙酯部位的制備[3]

取中藥菝葜干燥根莖2 kg，粉碎后分別用10倍量65%乙醇熱回流提取3次，每次1 h，過(guò)濾，收集并合并3次提取液。將藥渣再用10倍量50%乙醇熱回流提取3次，每次0.5 h，過(guò)濾，收集并合并3次濾液。將2次不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取液合并，減壓回收溶劑濃縮至浸膏狀，得菝葜乙醇總提物浸膏1 240 g。用適量蒸餾水將菝葜乙醇總提物浸膏進(jìn)行分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取3～5次，并減壓回收萃取部位溶劑，濃縮后得乙酸乙酯部位萃取物浸膏（得率為2.79%），4℃保存，備用。

2.2 造模、分組與給藥

取生長(zhǎng)良好的H22肝癌腹水型荷瘤小鼠2只，頸椎脫臼處死，75%酒精浸泡消毒，無(wú)菌條件下抽取乳白色腹水，用無(wú)菌生理鹽水將腹水按1∶4的比例稀釋成瘤細(xì)胞密度為2×107個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。以0.2 ml/只接種于小鼠右腋窩皮下，復(fù)制H22肝癌實(shí)體瘤模型[8]。將造模小鼠隨機(jī)分成5組，每組15只，分別為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和菝葜乙酸乙酯部位低、中、高劑量組；另取15只正常小鼠作為正常組，平行飼養(yǎng)。腫瘤接種次日開(kāi)始給藥，菝葜乙酸乙酯部位組小鼠分別ig菝葜乙酸乙酯部位提取物1.0、2.0、4.0 g（生藥）/kg（分別為人臨床用量的0.5、1、2倍劑量），每天2次，持續(xù)給藥14 d；陽(yáng)性對(duì)照組小鼠隔日ip CTX 1次，給藥劑量為0.02 g/kg（人臨床用量的等效劑量），持續(xù)給藥14 d；正常組和模型組小鼠ig等體積0.5%羧甲基纖維素鈉溶液（0.2 ml/10 g），每天2次，持續(xù)14 d。給藥期間每天稱定小鼠體質(zhì)量1次，并觀察外觀、精神狀態(tài)等一般情況。

2.3 血清中VEGF、NOS水平及抑瘤率的檢測(cè)

末次給藥24 h后，每組取10只小鼠，摘眼球取血約1 ml，置于加有0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）的抗凝管中，以離心半徑約5.36 cm、3 000 r/min條件下冷凍離心15 min，用移液管吸取上清液置于l ml離心管中，－20℃保存，備用。分別采用ELISA法和比色法檢測(cè)血清中VEGF、NOS水平，具體操作按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。取血后頸椎脫臼處死小鼠，解剖剝離腫瘤，用濾紙吸干，稱質(zhì)量后計(jì)算抑瘤率[抑瘤率（%）＝（模型組平均瘤質(zhì)量－給藥組平均瘤質(zhì)量）/模型組平均瘤質(zhì)量×100%][8]；取部分瘤組織用4%多聚甲醛的磷酸鹽緩沖液（PBS）固定，用于免疫組化檢測(cè)瘤組織中CD31表達(dá)。

2.4 血管滲透性的檢測(cè)

各組的剩余小鼠均尾iv 2%伊文思藍(lán)溶液（20 mg/kg），30 min后處死，解剖取出腫瘤，稱質(zhì)量后剪碎腫瘤組織，勻漿，以100 mg瘤組織勻漿加2 ml甲酰胺的比例混合，37℃水浴24 h，離心取上清。以蒸餾水作空白對(duì)照，用酶標(biāo)儀于620 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線以單位組織中伊文思藍(lán)提取量來(lái)反映腫瘤毛細(xì)血管滲透性。

2.5 瘤組織中CD31表達(dá)的檢測(cè)

采用免疫組化法檢測(cè)。取用4%多聚甲醛PBS溶液固定24 h后的瘤組織，石蠟包埋，切片貼附于防脫載玻片上，常規(guī)脫蠟和水化，3%過(guò)氧化氫（H2O2）溶液中室溫孵育10 min消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性；然后將切片放入檸檬酸緩沖液微波煮沸5 min×2次修復(fù)抗原；5%牛血清白蛋白（BSA）室溫封閉20 min，傾去多余液體，滴加1∶50稀釋的CD31兔抗多克隆抗體，4℃過(guò)夜；PBS洗3次后，滴加HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG，37℃孵育20 min；PBS沖洗3次后滴加鏈霉親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（SABC），37℃孵育20 min；PBS沖洗3次后以二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木素輕度復(fù)染核，封片后在光鏡下觀察。采用半定量法進(jìn)行結(jié)果分析，切片的染色強(qiáng)度記分如下：0分，染色為陰性；1分，染色為弱陽(yáng)性（淺黃棕色）；2分，染色為陽(yáng)性（黃棕色）；3分，染色為強(qiáng)陽(yáng)性（深黃棕色）。染色陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)如下：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為5%者，計(jì)0分；5%～25%者，計(jì)1分；26%～50%者，計(jì)2分；50%～75%者，計(jì)3分；＞75%者，計(jì)4分。按以上2項(xiàng)得分之和判斷結(jié)果：0分為陰性（-），1～2分為弱陽(yáng)性（+），3～4分為中度陽(yáng)性（++），5～7分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++），按綜合評(píng)分的等級(jí)來(lái)評(píng)價(jià)切片CD31變化情況[9]。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 各組小鼠一般情況觀察和抑瘤作用測(cè)定結(jié)果

給藥前，各組間小鼠體質(zhì)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥后，與正常組比較，模型組小鼠體質(zhì)量隨腫瘤生長(zhǎng)而增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，菝葜乙酸乙酯部位各劑量組小鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但外觀和精神狀態(tài)優(yōu)于模型組；陽(yáng)性對(duì)照組小鼠體質(zhì)量明顯下降，且低于正常組（P＜0.01）。陽(yáng)性對(duì)照組和菝葜乙酸乙酯部位組小鼠瘤質(zhì)量較模型組明顯減少（P＜0.05或P＜0.01），并呈現(xiàn)量-效關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 各組小鼠血清中VEGF、NOS水平測(cè)定結(jié)果

與正常組比較，模型組和各給藥組小鼠血清中VEGF、NOS水平顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和菝葜乙酸乙酯部位中、高劑量組小鼠血清中VEGF、NOS水平顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；菝葜乙酸乙酯部位低劑量組小鼠血清中VEGF、NOS水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 各組小鼠體質(zhì)量及瘤質(zhì)量測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Body weight and tumor weight of mice in each group（±s，n＝10）

表1 各組小鼠體質(zhì)量及瘤質(zhì)量測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Body weight and tumor weight of mice in each group（±s，n＝10）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

57.42 21.40 36.11 49.02組別正常組模型組陽(yáng)性對(duì)照組菝葜乙酸乙酯部位低劑量組菝葜乙酸乙酯部位中劑量組菝葜乙酸乙酯部位高劑量組劑量，g/kg 瘤質(zhì)量，g 抑瘤率，% 0.02 1.0 2.0 4.0體質(zhì)量，g給藥前20.32±0.89 20.12±0.99 20.20±1.09 20.16±1.21 19.83±1.39 20.19±1.51給藥后29.89±1.12 30.34±2.89 26.97±1.76＊＊##30.62±2.52 30.19±2.63 29.03±2.03 0.612±0.231 0.261±0.163##0.481±0.126#0.391±0.143##0.312±0.154##

表2 各組小鼠血清中VEGF、NOS水平測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 2 Serum levels of VEGF and NOS of mice in each group（±s，n＝10）

表2 各組小鼠血清中VEGF、NOS水平測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 2 Serum levels of VEGF and NOS of mice in each group（±s，n＝10）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01 Note：vs.normal group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

NOS，U/ml 18.1±1.10 36.5±1.30＊＊20.7±1.70##35.2±1.40＊＊25.5±0.98＊#菝葜乙酸乙酯部位高劑量組4.063.56±16.7623.6±1.20＊##組別正常組模型組陽(yáng)性對(duì)照組菝葜乙酸乙酯部位低劑量組菝葜乙酸乙酯部位中劑量組劑量，g/kg 0.02 1.0 2.0 VEGF，pg/ml 30.57±13.14 87.57±18.92＊＊59.34±14.65＊##83.15±19.12＊＊72.05±17.62＊＊##＊＊##

3.3 各組小鼠瘤組織血管通透性和CD31表達(dá)測(cè)定結(jié)果

與模型組比較，各給藥組小鼠瘤組織血管通透性均不同程度增強(qiáng)、CD31表達(dá)水平均不同程度降低，除陽(yáng)性對(duì)照組和菝葜乙酸乙酯部位低劑量組小鼠瘤組織中CD31表達(dá)水平降低不顯著外，其余各組小鼠上述指標(biāo)均明顯改善（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠瘤組織血管通透性和CD31水平測(cè)定結(jié)果（±s，n＝5）Tab 3 Vascular permeability and CD31 level in tumor of mice in each group（±s，n＝5）

表3 各組小鼠瘤組織血管通透性和CD31水平測(cè)定結(jié)果（±s，n＝5）Tab 3 Vascular permeability and CD31 level in tumor of mice in each group（±s，n＝5）

注：與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

組別模型組陽(yáng)性對(duì)照組菝葜乙酸乙酯部位低劑量組菝葜乙酸乙酯部位中劑量組菝葜乙酸乙酯部位高劑量組0.02 1.0 2.0 4.0 57.4±6.1 62.3±7.3#51.3±5.9#40.2±5.7##34.3±4.9##5.13±0.99 4.56±1.02 4.44±1.18 3.31±1.19##2.31±1.07##劑量，g/kg 伊文思藍(lán)含量，μg/g CD31評(píng)分

4 討論

CTX為烷化劑類抗腫瘤藥物，是目前臨床作用最強(qiáng)、應(yīng)用最多的藥物之一，具有良好的臨床療效[10]，故本研究以其為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果顯示，CTX和菝葜乙酸乙酯部位可不同程度地抑制小鼠H22移植瘤的生長(zhǎng)，其中高劑量菝葜乙酸乙酯提取物抑瘤效果與CTX相當(dāng)。與CTX不同的是，菝葜乙酸乙酯部位各劑量組小鼠體質(zhì)量無(wú)明顯減輕，表明菝葜乙酸乙酯部位對(duì)機(jī)體的毒性較小。

研究表明，新生的血管不僅為腫瘤的生長(zhǎng)提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧，而且為腫瘤細(xì)胞離開(kāi)原發(fā)瘤進(jìn)入血液提供了有效通道[11]。腫瘤血管形成是腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，受多種相關(guān)因子誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)，VEGF和NOS即是重要的相關(guān)因子。VEGF是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族中的重要一員，被認(rèn)為是腫瘤組織中促血管生長(zhǎng)的最主要的血管生長(zhǎng)因子之一，其轉(zhuǎn)錄活性的增強(qiáng)和表達(dá)增加在腫瘤細(xì)胞的能量代謝、新血管生成、促進(jìn)腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移中起重要作用[9]。一氧化氮（NO）具有廣泛的生物學(xué)活性，與多種腫瘤的形成和發(fā)展有關(guān)；NOS是生成NO的關(guān)鍵限速酶，其活性的增高與腫瘤血管形成關(guān)系密切[12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中、高劑量菝葜乙酸乙酯部位提取物能夠顯著降低小鼠血清中VEGF、NOS水平。

研究表明，腫瘤內(nèi)部血管異常是造成腫瘤微環(huán)境異常的重要因素，而血管正?；臉?biāo)志是毛細(xì)血管通透性[13]。本研究結(jié)果表明，菝葜乙酸乙酯部位提取物可降低荷瘤小鼠瘤內(nèi)毛細(xì)血管通透性，顯示出良好的腫瘤血管正常化作用。CD31即血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子，屬于免疫球蛋白超家族成員，是一種新型微血管標(biāo)記物，可以作為血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志，定量評(píng)價(jià)血管新生因子的作用[14]。研究發(fā)現(xiàn)，CD31分子可能參與腫瘤細(xì)胞黏附于內(nèi)皮細(xì)胞并促進(jìn)腫瘤組織血管的生成。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，菝葜乙酸乙酯部位可減少腫瘤組織CD31的表達(dá)。

綜上所述，菝葜乙酸乙酯部位具有一定的抗腫瘤作用，其作用機(jī)制可能與其降低荷瘤小鼠血清VEGF和NOS水平、使腫瘤血管正?；耙种颇[瘤新生血管形成有關(guān)。

[1] 馬恒，王威，董方言.菝葜屬植物化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2009，20（15）：1 191.

[2] 張晟，於小波，沈嬋娟，等.菝葜藥用植物的資源調(diào)查及品質(zhì)分析[J].中國(guó)藥房，2011，22（3）：275.

[3] 葉小春.菝葜提取物的制備工藝及質(zhì)量控制研究[D].武漢：華中科技大學(xué)，2011.

[4] 郝利君，馮芳，郝小芳.菝葜的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2010，24（1）：70.

[5] 邱千，戴琪，陳樹(shù)和，等.菝葜體外抗非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞活性物質(zhì)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2014，16（1）：12.

[6] 湯秀紅.中藥制劑抗腫瘤血管形成的基礎(chǔ)研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].吉林中醫(yī)藥，2010，30（9）：825.

[7] Folkman J.Tumor angiogenesis：therapeutic implications [J].N Engl J Med，1971，285（21）：1 182.

[8] 吳先闖，杜鋼軍，郝海軍，等.玉米須多糖對(duì)H22荷瘤小鼠的腫瘤抑制作用及其對(duì)小鼠免疫功能的影響[J].華西藥學(xué)雜志，2015，30（1）：26.

[9] 何素芳，王志剛，任愛(ài)農(nóng)，等.紅花多糖對(duì)H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及瘤細(xì)胞VEGF、Ki67表達(dá)的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2009，34（6）：795.

[10] 韋鳳華.環(huán)磷酰胺臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥事，2013，27（3）：324.

[11] Folkman J.Antiangiogenesis in cancer therapy-endostatin and its mechanisms of action[J].Experimental Cell Research，2006，312（5）：594.

[12]王魯，湯釗猷，孫惠川，等.肝細(xì)胞癌中NOS和VEGF的表達(dá)及其與腫瘤血管形成的關(guān)系[J].中華腫瘤雜志，2000，22（4）：301.

[13] Jain RK.Normalization of tumor vasculature：an emerging concept in antiangiogenic therapy[J].Science，2005，307（5 706）：58.

[14]卜嵐，馬毓梅，史淑芬，等.CD31、CD105和PTEN在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床病理意義[J].中國(guó)婦幼保健，2015，30（9）：1 446.

Anti-tumor Effect of Ethyl Acetate Part of Smilaz china on H22Liver Cancer-bearing Mice and Its Mechanism Study

WU Xianchuang1，SONG Weizhong2，SONG Xiaoyong1，KANG Wenyi2，HOU Yantao3，ZHANG Yongzhou1，ZHANG Xiaojian4，ZHANG Lingyun1，LU Hong1，LIU Yuxin1（1.Dept.of Pharmacy，Huaihe Hospital of Henan University，Henan Kaifeng 475001，China；2.Institute of Traditional Chinese Medicine，Henan University，Henan Kaifeng 475004，China；3.Basic Teaching and Research Section，Henan Pharmaceutical School，Henan Kaifeng 475003，China；4.Dept.of Pharmacy，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China）

OBJECTIVE：To study the anti-tumor effects of ethyl acetate part of Smilaz china on H22liver cancer-bearing mice and its mechanism.METHODS：90 mice were randomly divided into normal group，model group，positive control group（cytoxan，0.02 g/kg，ip，every 2 days）and ethyl acetate part of S.china low-dose，medium-dose and high-dose groups[1.0，2.0，4.0 g（crude drug）/kg，ig，twice a day].Except for normal group，H22transplanted models of mice were established.The next day after modelation，treatment groups were given relevant medicine，and normal group and model group were given constant volume of 0.5%sodium carboxymethylcellulose solution intragastrically.The change of body weight and tumor weight were observed after medication；the serum levels of VEGF and neoangiogenesis（NOS）were determined as well as vascular permeability of tumor；the expression of CD31 was detected in tumor tissue.RESULTS：Compared with model group，body weight and tumor weight of positive control group were decreased significantly，while the serum levels of VEGF and NOS，vascular permeability of tumor were increased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）.Tumor weight and the expression of CD31 were decreased significantly in ethyl acetate part of S.china medium-dose and high-dose groups，while serum levels of VEGF and NOS，vascular permeability of tumor were increased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）.Tumor weight were decreased significantly in ethyl acetate part of S.china low-dose group，while vascular permeability of tumor was strengthened（P＜0.05 or P＜0.01）.CONCLUSIONS：The ethyl acetate part of S. china shows anti-tumor effects in H22liver cancer-bearing mice，and its mechanism might be associated with reducing the serum levels of VEGF and NOS，improving vascular permeability of tumor and inhibiting neovascularization.

Smilax china；Ethyl acetate part；Anti-tumor effect；H22liver cancer-bearing mice；VEGF；NOS

R285

A

1001-0408（2016）31-4370-03

2016-02-22

2016-09-19）

（編輯：林 靜）

河南省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.144300510019）

＊主管藥師，碩士。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：0371-23906849。E-mail：wuxc128@163.com

#通信作者：副教授。研究方向：中藥教學(xué)與科研。電話：0371-22860159。E-mail：15003781156@126.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.31.15